專利名稱：一種治療血管系統疾病的新藥的制作方法
技術領域：
本發明為一種藥物，特別是治療血管系統疾病的藥物。
血管收縮性肽(Endothelin，縮寫為ET)，是1988年由柳澤等人從豬動脈內皮細胞的培養上清液中分離鑒定出的由21個氨基酸組成的肽(柳澤等，nature 332，P411-412)。之后，從對ET編碼的遺傳因子研究中發現了與ET結構類似的肽，分別命名為ET1、ET2、ET3。組成ET1、ET2、ET3的氨基酸均為L型。(井上等，Proc.Natl Acad.Sci.USA.86.2863-2867)。這些ET類的結構如下 -Leu-Asp-Ile-Ile-Trp-OHA1 A2 A3 A4 A5A6ET1SerSerSer leuMet PheET2SerSerSer TrpLeu PheET3ThrPheThr TyrLys Tyr上述的ET類物質在生物體內具有強烈的血管收縮和升壓作用，推測它們為循環系統調節的內在因子，可引起高血壓、心、腦血液循環疾病(如心肌梗塞)、腎病(如急性腎功能不全)，以及與血管收縮有關的疾病(J.Med.Chem.，35，1493(1992))。此外，由于ET類物質對支氣管平滑肌有收縮作用，推測與哮喘也有關。
迄今為止，雖然有對ET類與受體結合有抑制作用的各種肽的報導，但非肽類化合物只有蒽醌衍生物(日本專利，特開昭3-47163號)和脫鎂葉綠甲酯酸衍生物(日本專利，特開昭5-331063號)。烏宋酸自1963年從烏索酸氧化得到以后(Bull.calcutta School Trop.Med.，11，20(1963))，雖然進行了許多研究，但對ET與受體結合的抑制作用未見報導。
本發明的目的是提供一種能抑制ET與受體結合的活性物質。
為達到上述目的，本發明通過在受測物質存在下檢測放射性標記的ET與動脈株化細胞膜受體結合后的殘余量來衡量受測物質抑制ET與受體結合的程度，并作為活性篩選指標，測試每一步分離出的各個餾分的活性，以此來指導有效成分的分離和純化。經過追蹤分離獲得的烏宋酸，具有顯著地抑制ET與受體結合的活性，從而完成了本發明。
本發明提出一種通式如下的烏宋酸類 式中R1和R2可以是H或OH，但其中之一必須是H；或R1和R2一起共同為下列基團＝O，＝NOH，＝N-NH2， 式中R3和R4可以是H，或者鹵原子；R3和R4也可結合形成碳碳雙鍵。
烏宋酸類藥理學允許的鹽，也屬于本發明的范圍。
通式(I)所表示的化合物的一種—烏宋酸(I′) 是三帖化合物，從中國藥用植物中用一般的方法可以分離純化得到。根據已知的方法，也可以從烏索酸氧化得到烏宋酸(khim.Farm.Zh.20 172-178，1986)。式(I)中R1和R2共同為下式＝O，＝NOH，＝N-NH2， 所表示的化合物，可以通過從R1和R2為＝O所表示的化合物與羥胺、肼、乙二醇等反應得到。
R3和R4為鹵素取代的化合物，可以從R3和R4結合形成雙鍵的化合物經囟化及氫鹵化反應得到。R3和R4為H的化合物可通過氫化方法得到。
本發明所說的烏宋酸類藥理學允許的鹽，是指與無機離子、有機基團、氨基酸等形成的鹽。無機離子是指堿金屬類，如鋰、鈉、鉀等；以及堿土金屬類，如鎂、鈣等；其它金屬，如鋁、鋅、鐵等也包含在本發明中。有機基團是指氨類，如氨基、伯胺基、仲胺基、叔銨基；含氮類(脂肪族、芳香族)是指甲胺基、二甲胺基、三甲銨基、乙胺基、二乙胺基、三乙銨基、丙胺基、二丙胺基、異丙胺基、二異丙胺基、丁胺基、二丁胺基、異丁胺基、特丁胺基、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、吡咯、吡啶、賴氨酸、精氨酸、組氨酸。
本發明是關于將烏宋酸類及其藥理學允許的鹽類作為有效成份制成ET受體抑制劑，用于哺乳動物(如人、狗、貓、兔、鼠等)由于ET引起的各種疾病，如高血壓、冠心病、心肌病、動脈硬化、心肌梗塞、大腦動脈收縮、大腦缺血、大動脈收縮引起的云狀皮下出血、哮喘、急性腎功能不全等的治療和預防，作為血管擴張劑使用。
本發明的ET與受體結合的抑制劑，經口服或不經口服均可以。劑型可以是片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑、乳化劑、懸濁劑、注射劑等。這些劑型，分別加適當的擔體、成形劑、其它必要的添加劑，按規定的方法制成。
式(I)所表示的烏宋酸類每天的給藥量，根據患者的病情、體重、該衍生物的種類、給藥方法等不同而有所不同。例如對于非口服給藥，即皮下、靜脈、肌肉注射和直腸內用藥，大約0.01--20mg/公斤體重·日，最好是0.1--10mg/公斤體重·日。如口服，大約0.1--100mg/公斤體重·日，最好是1-10mg/公斤體重·日。
與對ET與受體結合有抑制作用的各種肽相比，非肽小分子化合物，即本發明的烏宋酸類，經口服給藥不分解，且從自然界中容易得到，這是本發明的優點所在。
下面結合具體實施方式
對本發明作進一步的詳細說明。
實施例1.烏宋酸的分離采自中國四川省的丁座草(Xylanche himalaica)全草干燥粉碎后，在室溫下用95％乙醇提取，所得提取液在60℃下減壓濃縮。提取物30g用乙酸乙酯溶解，溶解物(7.93g)用1000g硅膠柱層析分離，洗脫劑為正己烷/異丙醇/96∶4，得活性部分3.44克，Rf＝0.42(正己烷∶異丙醇＝10∶1)。
活性部分繼續用180g硅膠柱層析，洗脫液從正己烷∶異丙醇/97∶3開始到90∶10進行梯度洗脫分離，得活性部分3.19g，Rf＝0.38(正己烷∶異丙醇/90∶10)。
這部分繼續用150g硅膠分離，用正己烷∶乙酸乙酯/80∶20--0∶100梯度洗脫，得活性部分257mg，Rf＝0.49(正己烷∶乙酸乙酯＝75∶25)。
繼續用25g硅膠分離，用CH2Cl2MeOH/99∶1洗脫，得活性部分101mg，Rf＝0.69，(CH2Cl2MeoH＝95∶5)。
最后用HPLC(島津LC-6A型，分離柱Merck Hibar RT250-25 Lichrosorb Si60，7μm，檢測波長254nm，流速9.9ml/min，爐溫20℃，洗脫液為正己烷∶異丙醇/95∶5)分離，得烏宋酸單體16.7mg，Rf＝0.69(CH2Cl2MeOH/95∶5)。
實施例2.活性試驗(1)ET受體標準品從老鼠胎兒胸部大動脈得到的株化細胞A10(Bmax20.3PM，ATCCCRL 1476)作為測定用的受體細胞膜標準品。根據測定規程，A10細胞懸濁液5ml加入38ml稀釋液(CaCl2，BSA，含有Bacitracin50mMDoris緩沖液，PH7.4)，作為受體的稀釋標準液。
(2)125I-ET結合試驗取放射性標記的125I-ET ET1(81.4TBq/mmol)8.5KBq，加入受體稀釋標準液175μl和樣品25μl。加入1×10-6M的ET1，測定非特異的結合量。反應在250μl Doris緩中液中于室溫下進行2小時。反應后，用纖維濾紙在玻璃漏斗上急速過濾，用50mM Doris緩沖液(pH7.4)洗三次，漏斗上留下的放射性物質用γ-射線測定儀測定。測定結果，烏宋酸對ET1與受體結合的50％抑制濃度(IC50)約為5μg/ml。
權利要求
1.一種治療血管系統疾病的藥物，其特征是有效成分是烏宋酸類，結構式為 式中R1和R2可以是H或OH，但其中之一必須是H；R1和R2也可以一起共同為下列基團＝O，＝NOH，＝N-NH2， R3和R4可以是H，或者囟原子；R3和R4也可以結合形成碳碳雙鍵。
2.根據權利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與堿金屬，如鋰、鈉、鉀等形成的鹽。
3.根據權利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與堿土金屬，如鎂、鈣等形成的鹽。
4.根據權利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與氨類有機基團，如氨基、伯胺基、仲胺基、叔銨基形成的鹽。
5.根據權利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與鋁、鋅、鐵等形成的鹽。
6.根據權利要求1所述的藥物，其特征是烏宋酸類與甲胺基、二甲胺基、三甲銨基、乙胺基、二乙胺基、三乙銨基、丙胺基、二丙胺基、異丙胺基、二異丙胺基、丁胺基、二丁胺基、異丁胺基、特丁胺基、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇銨、四氫吡咯、哌啶、嗎啉、吡咯、吡啶、賴氨酸、精氨酸、組氨酸等形成的鹽。
全文摘要
本發明公開了一種結構通式為所表示的烏宋酸類及其藥理學允許的鹽的藥物(式中R
文檔編號A61P9/10GK1114564SQ9511123
公開日1996年1月10日 申請日期1995年1月27日 優先權日1994年3月24日
發明者丁立生, 德田昌彥, 川邊紀雄, 戶上泰彥 申請人:中國科學院成都生物研究所, 東麗株式會社