專利名稱：新型吡咯并咔唑衍生物的制作方法
技術領域：
本發明涉及新型吡咯并咔唑衍生物、其制備、含該衍生物的藥物組合物及其用于治療惡性疾病的用途。
更具體地說，本發明的一個方面涉及式I的吡咯并咔唑衍生物 其中R1是氫或低級烷基；R2是雜芳基；以及R3和R4獨立地是氫或低級烷基；以及它的藥用鹽。
在一個優選方面，本發明涉及某種式I的化合物，特別包括R1是氫且R2是苯硫基的化合物。
在另一方面，本發明涉及一種含治療有效量的式I化合物或其藥用鹽并與至少一種藥用賦形劑混合的藥物組合物。
在另一方面中，本發明涉及一種治療惡性疾病、特別是哺乳動物、尤其是人的小細胞肺癌、結腸癌和腎和前列腺腫瘤的方法，即給需要這種治療的哺乳動物服用一種治療有效量的式I化合物或其藥用鹽。
術語“低級烷基”意指單基支鏈或非支鏈的C1—C6飽和的烴鏈，如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、正戊基和正己基。
術語“雜芳基”意指具有5或6個原子的單環的單價不飽和芳族碳環基(其中一個原子是選自N，O或S的雜原子)，例如苯硫基、呋喃基、吡咯基和吡啶基，它們可以分別被羥基、低級烷基、低級烷氧基、氯、氟、三氟甲基和/或氰基任意選擇地一、二—或三—取代。
“任意選擇”或“任意選擇地”意指后面介紹的事件或條件可能發生，也可能不發生，且說明書包括所述事件或事情發生的情況和不發生的情況。
“藥用鹽”可以是由無機或有機酸得到的任何鹽。術語“藥用陰離子”意指這種酸加成鹽的陰離子。不應選擇生理或其它地方不合需要的鹽和/或陰離子。
陰離子由無機酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸(提供硫酸鹽和硫酸氫鹽)、硝酸、磷酸，等等和有機酸如乙酸、丙酸、乙二酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、檸檬酸、琥珀酸、馬來酸、富馬酸、灑石酸、丙二酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、水楊酸、對甲苯磺酸等等得到。
術語“治療”意指任何對哺乳動物病癥的治療，包括(i)防止，即，使疾病的臨床癥狀不再發展；(ii)抑制疾病，即，阻止臨床癥狀的發展；和/或(iii)緩解疾病，即，使臨床癥狀消退。
術語“有效量”意指劑量足以提供治療正在治的疾病。這將取決于患者、疾病種類和治療所要達到的效果。
式I化合物按下述命名和編號 例如，其中R1是氫，R2是3—苯硫基，R3是氫且R4是甲基的式I化合物命名為1，3—二氧代—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，5—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
其它例子如下所示
它們分別命名為1.1，3—二氧代—6—(3—乙基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
2.1，3—二氧代—8—甲基—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—2—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
3.1，3—二氧代—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(呋喃—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
4.1，3—二氧代—6—(3—(二甲氨基)丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(吡咯—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
術語“溶劑”、“惰性有機溶劑”或“惰性溶劑意指與此有關的反應條件下為惰性的溶劑，例如有苯、甲苯、乙腈、四氫呋喃(“THF”)、二甲基甲酰胺(“DMF”)、氯仿、二氯甲烷、乙醚、甲醇、吡啶，等等。除非另外說明，否則用于本發明的反應的溶劑是惰性有機溶劑。
術語“q.s.”意指加入足以實現規定作用的量，例如使溶液達到所需體積(即100％)。
除非另外說明，這里介紹的反應是在大氣壓下5℃—100℃進行的(優選10℃—50℃；最佳于室溫，如20℃)。此外，除非另外注明，反應時間和條件為近似的，例如在約大氣壓、約5℃—約100℃(優選約10℃—約50℃，最佳約20℃)反應進行約1—約10小時(優選約5小時)。在實施例中給出的參數是特定的，不是近似的。
如果需要，通過任何合適的分離和純化步驟如過濾、萃取、結晶、柱色譜法、薄層色譜法或厚層色譜法或這些方法的組合來進行分離和純化這里介紹的化合物和中間體。參考以下實施例可獲知合適的分離和離析方法說明。不過，當然也可以使用其它等同的分離或離析方法。
式I化合物可遵照參考反應流程1介紹的方法制備。其中所用的取代基如R1，R2，R3和R4具有與本發明綜述中介紹的相同定義，除非另外注明。
式I任意選擇地取代的N，N—二(低級烷基)氨基甲基吲哚是市售的，或通過本領域專業人員使用通用合成方法很容易地制備。例如，N，N—二甲氨基甲基吲哚可從Aldrich Chemical Company，Milnaudee.WI。
反應流程1 其中R是低級烷基 Y是氨基保護基；
如反應流程1，步驟1中指出，式I任意選擇地取代的N，N—二(低級烷基)氨基甲基吲哚按照Canadion J.Chem.，第51卷，第792頁(1973)公開的方法轉化為式2任意選擇地取代的磷鹽。
將式I化合物、優選N，N—二甲氨基甲基吲哚溶于質子溶劑、優選甲醇中，并于10℃—50℃(優選25℃)與過量的甲基碘反應1—10小時(優選3小時)。然后，將約1摩爾當量的溶于極性溶劑(優選二甲基甲酰胺)中的三苯膦加到產物中，并將混合物在100—150℃、優選于回流溫度保持6—24小時、優選16小時。當反應基本完成時，分離式2任意選擇取代的磷鹽，并用傳統方法、優選結晶法純化。
如反應流程1，步驟2中指出，在堿存在下，式2任意選擇取代的磷鹽與式R2CHO的雜芳醛反應，得到式3的乙烯基吲哚。
式2任意選擇取代的磷鹽溶于極性質子惰性溶劑(優選DMSO)中，在位阻堿(優選1，5—二氮雜雙環〔4.3.0〕壬—5—烯或1，8—二氮雜雙環〔5.4.0〕十一碳—7—烯)存在下與式R2CHO的醛反應。反應于20℃—100℃(優選80℃)進行約2小時，然后于20℃攪拌6—48小時(優選約16小時)。當反應基本完成時，分離式3的乙烯基吲哚，并用傳統方法、優選硅膠色譜法或結晶法純化。
如反應流程1，步驟3中指出，式3的乙烯基吲哚與1—碘—3—(叔丁基)二苯基甲硅烷基氧丙烷反應并脫保護，得到式4的N—羥丙基乙烯基吲哚。
將式3的乙烯基吲哚溶于極性質子惰性溶劑(優選DMF或DMSO)中并于0℃—50℃(優選25℃)用堿金屬氫化物如氫化鉀或氫化鈉(優選氫化鉀)處理。反應5分鐘—3小時(優選15分鐘)后，加入1—碘—3—(叔丁基)二苯基甲硅烷基氧丙烷，反應于同樣溫度攪拌約1—24小時(優選約16小時)。當反應基本完成時，分離甲硅烷基保護的化合物并用傳統方法、優選硅膠色譜法純化。通過在四氫呋喃或二甲氧基乙烷中于20—30℃用氟化四丁銨或吡啶—氫氟酸處理1—12小時(優選2小時)來脫除甲硅烷基。式4的N—羥丙基乙烯基吲哚最好通過硅膠色譜法純化。
如反應流程1，步驟4指出，式4化合物的羥基轉化為二(低級烷基)氨基，得到其中R3和R4是低級烷基的式5化合物。
式4的醇溶于二氯甲烷或氯仿(優選二氧甲烷)并于-10℃—20℃(優選0℃)用受阻堿(如2，6—二甲基吡啶或2，4，6—可力丁，優選2，6—二甲基吡啶)處理，再用二氟甲烷磺酸酐處理15分鐘至1小時(優選30分鐘)。然后，在0℃—40℃(優選25℃)使產物與過量的式R3R4NH胺(其中R3和R4是低級烷基)反應約3小時，然后再于約0℃反應6—24小時(優選2小時)。當反應基本完成時，離析式5的胺并用傳統方法、優選硅膠色譜法純化或直接在步驟5中使用。
如反應流程1，步驟4a指出，式4化合物(其中R3和R4的至少一個是氫)的羥基轉化為保護的氨基，得到5a化合物。
式4醇溶于二氯甲烷或氯仿(優選二甲氯烷)，并于-10℃—20℃(優選0℃)，用受阻硬(如，2，6—二甲基吡啶或2，4，6—可力丁，優選2，6—二甲基吡啶)、再用三氟甲磺酸酐處理15分鐘—1小時(優選30分鐘。然后，于0—40℃(優選25℃)，使產物與過量的式R3R4NH胺(其中R3和R4中的至少一個是氫)反應約3小時，再于約0℃反應6—24小時(優選12小時)。當反應基本完成時，離析乙烯基胺并且傳統方法純化、優選硅膠色譜法純化，或在后面的反應中直接使用。
所得中間體胺是伯胺或仲胺(即，其中R3和R4中的至少一個是氫)，它通過在叔胺堿(優選吡啶)中溶解并于約25℃與三氟乙酸酐反應5分鐘—4小時(優選30分鐘)而受到保護。當反應基本完成時，離析式5a的乙烯基三氟乙酰氨基化合物，并用傳統方法，優選硅膠色譜法純化。
另外，其中R3和R4中至少一個為氫的中間體胺也可以通過在叔胺堿(優選三乙胺)存在下溶于惰性溶劑中并與二碳酸二叔丁酯反應形成叔丁氧基氨基甲酸酯衍生物而得到保護。
如反應流程1，步驟5中指出，式5的乙烯基胺或保護的乙烯基胺，如式5a的乙烯基三氟乙酰氨基化合物通過與馬來酰亞胺反應轉化為式I化合物。
式5或5a的乙烯基胺或保護的乙烯基胺溶于芳烴(優選甲苯)并與2—3摩爾當量(優選2摩爾當量)馬來酰亞胺一起回流6—24小時(優選16小時)。當反應基本完成時，離析Diels—Alder加合物并優選用硅膠色譜法純化。這種加合物溶于惰性溶劑(如苯，甲苯，二氯甲烷，優選苯)中并用2—3摩爾當量(優選2摩爾當量)二氯二氰基苯醌于20—50℃(優選25℃)處理15分鐘—3小時(優選30分鐘)。當反應基本完成時，用傳統方法離析所得咔唑。如果起始乙烯基胺具有式5a結構，則脫除保護基Y。保護基的脫除可通過公知方法進行。如果例如存在三氟乙酸酯保護基的話，在質子溶劑(如甲醇，乙醇，或其混合物)與四氫呋喃的混合物中，用無機堿(氫氧化鈉，氫氧化鉀等等，優選氫氧化鈉)處理咔唑約15分鐘(于約25℃)，以便使三氟乙酸酯保護基裂鍵。另外，如果用t—BOC基保護胺的話，則用酸處理脫除保護基。離析所得式I的吡咯并咔唑，并優選用硅膠色譜法純化。
式I化合物可轉化成相應的酸加成鹽。轉化是用化學計量量的合適的酸如鹽酸(如，3摩爾當量成三鹽酸鹽)處理來進行。典型地，將游離堿溶于極性有機溶劑甲醇或乙醇中，并將酸加入水、甲醇或乙醇中。溫度保持在0℃—50℃。相應的鹽自發地沉淀，也可從有少量的極性溶劑的溶液中得到。
通過用過量的合適的堿如氨水或碳酸氫鈉，一般在含水溶液中及0℃—50℃處理，可將式I化合物的酸加成鹽分解成相應的游離堿。通過傳統方法如用有機溶劑萃取離析游離堿形式。
優選其中R1是氫且R2是3—苯硫基的式I化合物。還優選其中R3是氫且R4是低級烷基、更優選甲基的化合物。進一步優選結合了上述特性的化合物。最佳是1，3—二氧代—6—(3—甲基氨丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑化合物。
本發明化合物是蛋白激酶C抑制劑，用作化學療法藥劑，治療哺乳動物、特別是人的各種惡性病癥，包括小細胞肺癌、結腸癌、相當于MCS7、MDA—MB—435和MDA—N細胞系的胸腫瘤和PKC過快速(overexpressing)腫瘤，如相應的CHO/PKC—ε的腫瘤。本發明的不同化合物與其它化合物相比，對某些腫瘤顯示了更高的活性，這可通過通用方法測定。
蛋白激酶C抑制的體外活性，是通過測定來自γ—32P ATP的32P結合入合成的肽基質的情況用數量表示。
化學治療藥劑、特別是用于治療惡性疾病的藥劑的體內活性，是通過腫瘤抑制試驗測定的，例如參見Maneckjee等人在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，第89卷，1169—1173(1992年2月)介紹的方法。例如使用HT—29結腸癌細胞、SCLCH82細胞、CHO/PKC—β和CHO/PKC—ε細胞進行不同分析。
以治療有效劑量如足以提供治療前述病癥的劑量服用式1化合物。本發明的化合物或其藥用鹽的治療可借助于用于類似應用的藥劑的任何可接受的給藥方式。
對于本發明化合物來說，盡管人體劑量水平還必須要最佳化，但日劑量為約0.1—20.0mg/kg體重、優選約0.5—10.0mg/kg體重、最佳約1.0—5.0mg/kg體重。因此，對于70kg人的給藥來說，劑量范圍將是約7.0—1,400mg/天，優選約35.0—700mg/天，最佳約70—350mg/gd?；钚曰衔锏慕o藥量當然取決于要治療的病癥和狀態、損害的嚴重性、給藥的方式和時間安排以及藥劑師的判斷力。
在使用本發明的化合物治療上述疾病中，可以采用任何藥用給藥方式。式I的化合物既可單獨給藥，也可與其它藥用賦形劑結合給藥，包括固體、半固體、液體或氣溶膠劑量形式在內，如片劑、膠囊、粉末、液體、懸浮液、栓劑、氣溶膠等等。式I化合物也可以緩釋或控制釋放劑量形式給藥，包括積存(depot)注射、滲透泵、丸劑、透皮(包括電遷移)補片，等等，用于以預定速率將化合物延時給藥，優選以精確劑量的一次給藥適合的單位劑量形式給藥。組合物一般包括一種傳統的藥用載體或賦形劑和一種式I化合物或其藥用鹽。另外，這些組合物可包括其它醫藥劑、藥物、載體、助劑等等，例如多藥抗性的逆轉劑。
一般來說，取決于給藥的目的方式，藥物組合物將含有約0.1％—90％、優選約0.5％—50％(重量)的式I化合物或鹽，其余是合適的藥物賦形劑，載體，等等。
上述詳細介紹的病癥的一種優選給藥方式是口服，采用按照損害程度可調節的方便的日量規定。對于這種口服給藥，通過結合任何通常使用的賦型劑和山梨醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、滑石、纖維素、Crosscarmellose鈉、葡萄糖、明膠、蔗糖、碳酸鎂，等等形成無毒的藥物組合物。這種組合物的形式呈溶液、懸浮液、片劑可分散片劑、丸劑、膠囊、粉末、緩釋配方等等。
組合物最好呈丸劑或片劑形式，因此組合物與活性成分一起含有稀釋劑，如乳糖、蔗糖、磷酸二鈣等等；潤滑劑，如硬脂酸鎂等等；以及粘合劑，如淀粉、阿拉伯膠、聚乙烯基吡咯烷、明膠、纖維素以及它們的衍生物，等等。
舉例來說，液體藥物給藥的組合物可通過將上述定義的活性化合物和任選的藥物助劑在載體如水、鹽水、葡萄糖水溶液、甘油、二醇、乙醇等等中溶解、分散等等形成溶液或懸浮液而制備。需要的話，待給藥的藥物組合物還可含有微量的無毒輔助物質，如濕潤劑、乳化劑或增溶劑、pH緩沖劑等等，例如乙酸鈉、檸檬酸鈉、環糊精衍生物、單月桂酸山梨糖、乙酸三乙醇胺、油酸三乙醇胺，等等。制備這類劑型的實際方法是已知的，或將為本領域專業人員所理解；例如，參見Remington＇s Pharmaceutical Sciences，Mack Publising Compa-ny，Easton，Phennsylvania，15th Edition，1975。待給藥的組合物或配方終將含有一定量的活性化合物，該量能有效地減緩要治療的主題癥狀。
可以制備含0.005^—95％活性成分、余量為無毒載體的劑型或組合物。
對于口服給藥，通過摻入任何常用的賦形劑如藥品級山梨醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、滑石、纖維素衍生物、Crosscarmellossse鈉、葡萄糖、蔗糖、碳酸鎂、糖精鈉、滑石等等制成藥用無毒組合物。這類組合物呈溶液、懸浮液，片劑，膠囊、粉末、緩釋配方等等。這類組合物可含有0.01—95％活性賦型劑、優選0.1—50％。
對于固體劑型，在例如碳酸亞丙酯、植物油或三甘油酯中的溶液或懸浮液優選封裝在明膠膠囊中。這種二酯溶液及其制備和包封在美國專利4,328,245；4,409,239；和4,410,545中有介紹。對于液體劑型，例如在聚乙二醇中的溶液可以用足夠量的藥用液體載體如水稀釋，以易于給藥測定。
另外，通過將活性化合物或鹽溶解或分散在植物油、二醇、三甘油酯、丙二醇酯(如碳酸亞丙酯)等等中，并將這些溶液或懸浮液包封在硬和軟明膠膠囊壁內可制備液體或半固體口服配方。
其它可以使用的配方有美國專利Re，28,819和4,358,603提出的配方。
非腸胃給藥一般是以注射，即皮下、肌內或靜脈內注射為特征。注射藥物以傳統形式制備，既可以作為液體溶液或懸浮液、在注射前適用于液體溶液或懸浮液的固體形式，也可以作為乳液、合適的賦形劑的例子是水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等等。另外，如需要可含有微量無毒輔助物質，如濕潤劑或乳化劑，pH緩沖劑，增溶劑等等，例如乙酸鈉、單月桂酸脫水山梨糖醇、油酸三乙醇胺、環糊精等等。近來推出的非腸胃給藥的手段使用了植入緩釋或延釋系統，以便維持藥劑含量恒定。參見例如美國專利3,710,795。
這種腸胃外給藥的組合物中含有的活性化合物百分數高度依賴于其特殊性質以及化合物的活性和主題需要。不過，在溶液中可以使用0.01％—10％活性成分的百分數，而且如果組合物是隨后將稀釋到上述百分數的固體的話，活性成分的百分數將會更高。優選組合物在溶液中包括0.2—2％活性成分。
單獨的活性化合物或與其它藥用賦形劑結合使用的嗅液也可以給藥。
活性化合物或鹽的配方也可以單獨或與惰性載體如乳糖結合作為氣溶膠或噴霧器用的溶液或作為吸入用的微細粉用于呼吸道給藥。在此情況下，配方顆粒的直徑低于50微米、優選低于10微米。
以下制備例如實施例旨在使本領域專業人員更清楚地理解和實施本發明。它們不應被當作是限定本發明的范圍，而只是用于舉例說明。
實施例1制備式2化合物1A.R1是氫將2—N，N—二甲氨基甲基喲哚(5.4g)(Acta.Chim.Acad.Sci.Hung.，第34卷，439頁(1962)的40ml甲醇溶液與甲基碘(15ml)混合并放置3小時。溶液蒸發后得到一種玻璃狀物，往里加三苯膦(11.6g)和二甲基甲酰胺(DMF)(100ml)?；旌衔锘亓鬟^夜，然后在減壓下蒸掉大部分DMF，殘余物用苯(75ml)研制。濾掉形成的晶體，用少量苯洗滌，并真空干燥，得到吲哚—2—甲基三苯基碘化磷(10.4g)。1B.變化R1
采用實施例1A的工序，用所需R1取代基取代的2—二乙氨基甲吲哚替代2—二乙氨基甲基吲哚，得到式2的相應化合物，其中R1是甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正戊基，正己基，等等，例如4—甲基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷；5—乙基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷；6—正丙基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷；以及7—正丁基基吲哚—2—甲基三苯基碘化磷。
實施例2制備式3化合物2A.R1是氫且R2是苯硫—3—基往溶有1.04g吲哚—2—甲基三苯基碘化磷的60ml二甲亞硫溶液中加入175μl噻吩—3—甲醛，然后加250μl1，8—二氮雜雙環〔5.4.0〕十一碳—7—烯。混合物于40℃充氮情況下攪拌1小時，于80℃攪拌2小時，最終于20℃攪拌過夜?；旌衔锏谷胨?，并用乙醚萃取。干燥有機層，減壓脫除溶劑，殘余物用甲醇結晶純化。2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚的產量為200mg(44％)。
2B變化R1和R2采用實施例2A的工序，并任意選擇地用例如實施例1制備的其它式2化合物替代吲哚—2—甲基三苯基碘化磷，并用式R2CHO的其它化合物任意替代噻吩—3—甲醛，得到以下式3的化合物2—〔2—(苯硫基—2—基)乙烯基〕吲哚；2—〔2—(呋喃—3—基)乙烯基〕吲哚；2—〔2—(吡咯—3—基)乙烯基〕吲哚；
2—〔2—(吡啶—3—基)乙烯基〕吲哚；4—甲基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚；5—乙基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚；6—正丙基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚；7—正丁基—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚。
實施例3制備式4化合物3A.R1是氫且R2是苯硫—3—基將2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(200mg)溶于3ml二甲基甲酰胺并用40mg氫化鉀于25℃處理15分鐘。然后加1—碘—3—(叔丁基二苯甲硅烷基氧)丙烷(500mg)，反應混合物于25℃攪拌過夜。在乙醚和水之間分配混合物之后，干燥有機層，并減壓除溶劑。殘余物在硅膠上用制備TLC純化(用5∶1己烷/EtPAc洗脫)。1—〔3—(叔丁基二苯基甲硅烷基氧)丙基〕—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚的產量為330mg(71％)。
將該物質溶于2nd四氫呋喃并用2ml 1M氟化四丁銨溶液于25℃處理2小時?；旌衔镌谝颐押退g分配后，干燥有機層，并減壓除溶劑。殘余物在硅膠上用制備TLC純化(用2∶1己烷/EtOAc)洗脫，得到121mg 1—(3—羥丙基)—2—〔2—(苯硫—2基)乙烯基〕吲哚(68％)。
3B.變化R1和R2采用實施例3A的工序，用例如上述實施例2制備的式3其它化合物替代2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基)吲哚，得到式4的相應羥丙基化合物。
實施例4制備式5a化合物A.R1是氫，R2是苯硫—3—基，R3是氫，且R4是甲基將1—(3—羥丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(121mg)的3ml二氯甲烷溶液用120μl2，6—二甲基吡啶處理并冷卻到0℃。加三氟甲磺酸酐(100μl)，攪拌30分鐘后，引入5ml40％含水甲胺，反應混合物于25℃攪拌3小時。于0℃進一步攪拌12小時后，反應混合物在二氯甲烷和水之間分配，干燥有機層，減壓除溶劑。硅膠制備TLC(用10％甲醇/二氯甲烷洗脫)得到83mg1—〔3—甲氨)丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(67％)。將該產物溶于3ml含150μl吡啶的二氯甲烷并加三氟乙酸酐(40ml)。30分鐘后，在乙醚和碳酸氫鈉水溶液之間分配混合物，干燥有機層，并減壓脫溶劑。硅膠制備TLC(用3∶1己烷/EtOAc洗脫)得到80mg 1—〔3—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)丙基)—2—〔2—苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(73％)。
4B.變化R1，R2，R3和R4采用4A的工序并用例如以上實施例3中制備式4化合物任意選擇地替代1—(3—羥丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚，得到式5和5a的相應化合物。 實施例5式I化合物的制備 5A.R1是氫，R2是苯硫—3—基，R3是氫，且R4是甲基用40mg馬來酰亞胺處理1—〔3—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)丙基)—2—〔2—苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚(80mg)的2ml甲苯溶液?；亓鬟^夜后，減壓蒸掉溶劑，殘余物用硅膠制備TLC純化，得到20mg Diels—Alder加合物(20％)。
1H NMR(CDCl3)7.96(m，1H)，7.35-7.15(m，4H)，7.13(m，1H)，7.02(m，1H)，4.40(d，1H)，4.13(t，2H)，3.73(m，2H)，3.45(t，2H)，3.12(m，2H)，3.06(s，3H)，2.02(5.2H).
該物質溶于3ml甲苯，并用20mg二氯二氰苯醌(DPQ)處理。20分鐘后，另加10mg DDQ。10分鐘后，反應混合物涂到制備TLC板上并以2∶1己烷/EtOAc洗脫。以此方式，得到18mg 1，3—二氧—6—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑黃色泡沫。
該產物溶于4ml 1∶1 MeOH/THF，加1ml 1M NaOH。攪拌15分鐘后，在二氯甲烷和水之間分配混合物。分離有機層并減壓除溶劑。殘余物的制備TLC(用10％甲醇的二氯甲烷洗脫)得到15mg 1，3—二氧代—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
1H NMR(d6—DMSO)8.96(d，H)，8.00(s，1H)，795(m，1H)，7.74(d，1H)，7.62(m，3H)，7.3 5(t，1H)，4.5 9(t，2H)，2.55(t，2H)，2.29(s，3H)，1.97(t，2H).HRMS分析C22H19N3O2S389.1197；實測389.1198.
HRMS分析C22H19N3O2S389.1197；實測值389.1198。
5B.變化R1，R2和R3
采用實施例5A的工序并用例如上述實施例4B中制備式5或5a其它化合物替代1—〔3—(N—甲基三氟甲基乙酰氨基)丙基)—2—〔2—(苯硫—3—基)乙烯基〕吲哚，得到式I的相應的吡咯并咔唑衍生物。
實施例6本例說明了用于口服的含式I活性化合物，如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
成分 每片量，mg活性化合物 200乳糖，噴霧干燥 148硬脂酸鎂 2將上述成分混合并引入硬殼明膠膠囊。
式I其它化合物，例如按照實施例1—6制得的化合物，可用作制備本例口服配方中的活性化合物。
實施例6本例說明了用于口服的含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑的另一代表性藥物組合物的制備。
成分每片量，mg活性化合物 400玉米淀粉50乳糖145硬脂酸鎂5
將上述成分緊密混合并壓成單刻痕片劑。
在本例口服配方的制備中，式I的其它化合物，例如按照實施例1—6制備的化合物，可用作活性化合物。
實施例7本例說明了含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—苯硫—3—基)吡咯并〔3，4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
制備具有以下組成的口服用懸浮液成份 用量活性化合物 1.0g富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g羥苯甲酸甲酯 0.1g粒狀糖 25.5g山梨醇(70％溶液) 12.85gVeegum K(Vanderbilt Co.) 1.0g香味劑0.035ml著色劑 0.5mg蒸餾水足量到100ml在本例口服配方的制備中，可以使用式I的其它化合物，例如按照實施例1—6制備的化合物作為活性化合物。
實施例8本例說明了含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
制備緩沖到pH7.4的注射制劑，它具有以下組成成分用量活性化合物 0.2g乙酸鈉緩沖液(0.4M) 2.0mlHCl(1N) 加足到pH7.4水(蒸餾，無菌)加足到20ml在制備本例注射制劑中，可以使用式I的其它化合物，例如按照實施例1—6制備的化合物作為活性化合物。
實施例9本例說明了含式I活性化合物，例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)吡咯并〔3.4—c〕咔唑的代表性藥物組合物的制備。
制備共2.5克的栓劑，它具有以下組成活性化合物500mgWitepsol H—15*余量(*飽和植物脂肪酸的三甘油酯；Riches—Nelson，Inc.，New，York，N.Y.的產品)在制備本例的栓劑配方中，可以使用式I的其它化合物，例如按照實施例1—6制備的化合物作為活性化合物。
實施例10采用蛋白激酶C抑制試驗體外測定活性通過測定來自γ—32P ATP的32P結合入合成肽基質的情況用數量表示蛋白激酶C(PKC)抑制活性。使用取自大芯腦髓的PKC的β1同功酶和合成的肽底物ala—lys—arg—arg—arg—leu—ser—ser—leu—arg—ala測定抑制可能性。
含25mM Tris—HCl、pH7.5、2.5mM Mg(NO3)、1.0mMEGTA、20μM底物、1μg/ml磷脂酰絲氨酸(PS)、5×10-6M二?；视?di—C8)和50μM ATP的反應混合物用γ—32P ATP(＞5,000Ci/mmol)作標記)以提供每次反應約106CPM和每孔50μl體積的0.08μg/ml PKC。該試驗是在存在或不存在試驗化合物的條件下進行，并以下同的濃度加入。于室溫保溫5分鐘后，通過加0.2V50％TCA溶液來中止反應。然后，將各孔取出的30μl樣品(對照和試驗化合物)滴在Whatman P—81離子交換色譜紙上，然后在Beckman LS5000TA液體閃爍計數器上計數32—P參入率。按照下式測定由5×10-6MdiC8和1μg/ml磷脂酰絲氨酸活化的PKC抑制率。抑制率＝1.0－〔(樣品CPM－基體CPM)/(總的CPM－基體CPM)〕×100以及測定達到50％抑制率所需的濃度。
當用此法試驗時，本發明的化合物是蛋白激酶C的活性抑制劑；例如1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔—IC5030nM。
實施例11采用小細胞肺癌異種移植試驗體內測定活性。
該方法是由Maneckjee等人，在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，89卷，1169—1173頁(1992年2月)中介紹的方法的改型。
H82小細胞肺癌(SCLC)細胞由冷凍的備料中解凍并在RP-MI中生長。在注射之前，將該細胞受胰蛋白酶作用，計數，并再懸浮于PBS溶解的基膜制劑(MatrigelR)(1∶2)至5×105或1.5×106細胞/ml的濃度。雌性無胸腺裸鼠，4—5周齡(Harlan SpragueDawley)在激發前一天，接受200R/鼠輻射，并通過在脅腹中皮下注射，提供0.2ml SCLC/鼠(濃度1×105或3×105SCLC細胞/鼠)。30只小鼠組每天用10mg/kg試驗化合物腹膜內處理一次(該化合物溶于DMSO并稀釋到最終20％DMSO于PBS的媒體濃度)。激發后2小時開始處理，持續45天。媒體處理和未處理過鼠用作對照。
統計分析采用Fisher Exact試驗〔Kendall M.Stuart A.，TheAdvanced Theory of Statistics，第2卷(MacMillan Pub.Co.NY，1979)〕比較各組之間的腫瘤出現率。用Mann Whitney U試驗〔Hollander N.，Wolfe D.A.，Non—parametric Statisticol Meth-ods(John Wiley and Sons，Inc.，NY，1973)〕比較存活時間的差別并用對數等級試驗(Kalbfleisch J.D.，Prentice R.L.，The Statisti-cal Analysis of Failure Time Data(John Wiley and Sons，Inc.，NY1980)〕比較各腫瘤達到2000mm3的時間。
當采用這種方法檢測時，本發明的化合物抑制腫瘤生長。
實施例12采用結腸癌異種移植試驗體內側定活性采用實施例2的方法并用HT—29結腸癌細胞替代H82小細胞肺癌細胞，所述細胞生長到濃度為5×106個細胞/ml，并以1×106個細胞/鼠濃度給藥，測定抗結腸癌活性。
當用這種方法檢測時，本發明的化合物抑制了腫瘤生長。
盡管參考其具體實施方案已介紹了本發明，但本領域專業人員應理解，可以做出不同改變，且在不背離本發明的精神實質和范圍內可以替換其等同物。另外，可以做出各種改進以將具體情況、物質、物質組合物、方法、方法步驟適應本發明的目的、精神實質和范圍。所有這些改進旨在包括在所附權利要求的范圍內。在此引用的所有專利和出版物結合入本文作參考。
權利要求
1.一種下式表示的化合物 其中R1是氫或低級烷基；R2是雜芳基；以及R3和R4獨立地是氫或低級烷基；或其藥用鹽。
2.權利要求1的化合物，其中R1是氫。
3.權利要求2的化合物，其中R2是3—苯硫基。
4.權利要求3的化合物，其中R3是氫R4是低級烷基。
5.權利要求4的化合物，其中R3是氫且R4是甲基，即1，3—二氧代—6—(3—甲氨基丙基)—1，2，3，6—四氫—4—(苯硫—3—基)—吡咯并〔3，4—c〕咔唑。
6.一種藥物組合物，它包括一種式I化合物或其鹽和一種藥用載體。
7.一種制備權利要求1定義的式I化合物及其鹽的方法，它包括使式5或5a化合物 其中R1—R4按權利要求1中定義，y是氨基保護基，與馬來酰亞胺反應，需要的話，脫除保護基，且需要的話，使式I化合物轉化成藥用鹽。
8.按權利要求7的方法或顯然與其化學等同的方法制備的權利要求1—5中任一項的化合物。
9.權利要求1的化合物或其鹽制造用于治療惡性疾病、特別是小細胞肺癌、結腸癌以及腎和前列腺腫瘤的藥物組合物的用途。
10.前述新型化合物、組合物、方法和用途。
全文摘要
式I代表的化合物，其中R
文檔編號A61P35/00GK1123280SQ9510868
公開日1996年5月29日 申請日期1995年8月3日 優先權日1994年8月4日
發明者C·A·布羅卡 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司