專利名稱：超聲對比劑劑量配方的制作方法
技術領域：
本發明屬于一般的診斷顯像劑領域，特別涉及一種能夠提供增強的圖像和持續時間長的圖像的超聲對比劑(ultrasound contrast agent)劑量配方。
背景技術：
當利用超聲來獲得人或動物內部器官和結構的圖像時，當超聲波、聲能波以一定的頻率(當超過該頻率時，能被人耳所感知)穿過人體時會被反射。不同類型的身體組織對超聲波的反射不同，由反射不同內部結構的超聲波所產生的反射可以被檢出并通過電子學方法轉換為可視圖像。對于一些醫療情況，獲得人們感興趣的器官或結構的有用的圖像尤其困難，這是因為在由缺乏對比增強劑的超聲波的反射而產生的超聲波圖像中，上述結構的細節不能充分地從周圍的組織中被分辯出來。通過向感興趣的器官或其他結構中給予超聲對比劑來提高超聲波圖像中的對比度，從而本質上改善對某些生理和病理狀況的檢測和觀察。在有些情況下，對超聲對比劑自身運動的檢測是非常重要的。例如，由特定的心血管異常引起的獨特的血流模式只有通過對血流給予超聲對比劑并觀察血流或血容量才可以被識別。當超聲波穿過身體并被反射以產生能夠據此作出內科診斷的圖像時，用作超聲對比劑的材料通過影響超聲波而發揮作用。不同類型的物質以不同的方式和不同的程度影響超聲波。此外，由對比增強劑所引起某些效果比其它試劑更容易被測量和觀察。在選擇理想的超聲對比劑組合物時，人們通常更喜歡那些當超聲波穿過身體時對超聲波具有最顯著作用的物質。此外，對超聲波的作用應該易于測量。氣體是用作超聲對比劑的較好的介質。氣體在使用之前必須固定化， 其可以作為表面活性劑固定化氣泡或者通過用膠囊包在脂質體或者微粒中。在超聲波圖像中可以看到三種主要的對比增強效果，即，背反射、射束衰減、和聲速差分。已有多種天然的和合成的聚合物被用于包封例如空氣等超聲對比劑，這些聚合物有助于制造給藥后持續時間較長的超聲對比劑。Schneider等在Invest. Radiol. , Vol 27、 pp. 134-139(1992)中描述了三種微米級的、填充空氣的、合成的、聚合物顆粒。據報道這些顆粒在血漿中以及使用壓力下穩定。然而，在2. 5MHz時它們的回聲反射性低。另一種微泡 '混懸物F1I從超聲處理后的蛋白肝i乳中被獲得。Feinstein等，.T. Am. Coll. Cardiol. ,Vol. 11, pp. 59-65 (1988)。Feinstein描述了具有良好的體外穩定性、大小適合于肺與肺內腔之間通道(transpulmonary passage)的微泡的制備。然而，由于這些微泡在壓力下不穩定，它們在體內壽命短暫，半衰期大約為幾秒鐘(與一個循環過程近似相等)。Gottlieb, S.等， T. Am. Soc. Echo. , Vol. 3, pp. 328 (1990)，摘要；和 Shapiro, J. R.等，T. Am. Coll. Cardiol. Vol. 16, pp.1603-1607(1990)。
Rasor Associates公司也在WO 80/02365中對明膠包封的微泡進行了描述。所述明膠包封的微泡是通過“聚結”明膠而形成的。分子生物系統公司(Molecular Biosystems, Inc.)在W096/04018中對包封在含氟材料的殼體內部的氣體微泡進行了描述。Fritzch等報道了用半乳糖微晶(SHU454和SHU508)固定化的微泡。Fritzsch， T.等，Invest. Radiol. Vol. 23 (Suppl I), pp. 302-305 (1988);和 Fritzseh T.等，Invest. Radiol. ,Vol. 25 (Suppll) 160-161 (1990)。該微泡在體外持續15分鐘但在體內持續不到20 秒。Rovai,D.等，T. Am. Coll. Cardiol. , Vol. 10,pp. 125—134(1987);和 Smith,M.等，Τ. Am. Coll. Cardiol. , Vol. 13, pp. 1622-1628(1989)。Schering Aktiengesellschaft 在歐洲專利EP 398935中公開了用于超聲波顯像的微膠囊密封氣體或揮發性液體的制備以及用途， 其中，微膠囊由合成聚合物或多糖形成。Sintetica在歐洲專利458745中公開了一種用于治療或診斷目的的空氣或氣體微球，該微球被能夠分散在含水載體中的界面沉積聚合物薄膜所包縛，用于注射到宿主動物體內或用于口腔、直腸或尿道給藥。Delta生物工程有限公司在WO 92/18164號專利中描述了一種用于成像的微粒的制備方法，該方法通過對蛋白質水溶液進行噴霧干燥形成具有內含氣體的空心球體。WO 93/25242號專利描述了用于超聲波成像的微粒的合成方法，所述微粒的結構為在聚氰基丙烯酸酯或聚酯的外殼內部含有氣體。WO 92/21382公開了一種微粒對比劑的制造，所述微粒對比劑包括含有氣體的共價鍵結合的基質，其中，所述基質為碳水化合物。Unger在美國專利第5，334，381號和5，123，414號以及5，352，435號中描述了用作超聲對比劑的脂質體，其包括氣體、氣體前體例如pH活化或光活化氣體前體，以及其他的液體或固體對比增強劑。其他人鑒于被包封的氣體的效果，也提出了與空氣相比增強顯像的氟化氣體的應用。Quay在美國專利No. 5，393，524中公開了包括全氟化碳在內的多種試劑在超聲波顯像中增強反襯度的應用。上述試劑由經挑選的氣體小氣泡或微泡組成，其在溶液中顯示出較長的壽命，并且足夠小以至于能夠穿過肺，這使得其能夠在心血管系統及其他重要器官的超聲波圖像中得以應用。Bracco在歐洲專利554213公開了氟化烴氣體對預防微泡在曝露于血流壓力時的崩解的作用。Nycomed在W095/23615專利中公開了一種用于顯像的微膠囊，該微膠囊由包含全氟化碳的溶液例如蛋白質溶液等凝結而形成。麻省理工學院 (Massachusetts Institute of Technology)在專利 W095/03357 中公開了一種由聚乙二醇-聚(丙交酯-共-乙交酯)塊狀聚合物形成的微粒，該微粒內包封有顯像劑，包含氣體例如空氣和全氟化碳。如同Sonus藥物公司在W094/16739中所描述的，當固體和液體反射聲波達到一個相似的程度，眾所周知，氣體是用作超聲對比劑的更有效且更受歡迎的介質。 事實上，如WO 94/16739的實施例12所示，當對小型豬給藥時，蛋白質微膠囊由于產生安全問題(以及功效問題)而不予考慮。美國專利6，132，699和5，611，344都描述了在合成聚合物外殼中使用全氟化碳來增強對比度的方法。美國專利5，837，221描述一種生產多孔聚合物微粒的方法，該方法將疏水性試劑合并入聚合物中來增加回聲反射性。有數種超聲對比劑在美國和歐洲都獲批準，用于很有限的強心劑用藥。 OPTISON0 (Amersham, Mallinkrodt)包含含有八氟丙燒氣體的熱變性人白蛋白微膠囊。 每毫升微球體混懸物包含5-8 X IO8個平均直徑為2-4. 5微米粒度范圍和220 μ g的八氟丙烷。這些微球體還沒有被批準用于心肌血流評估，僅僅被批準用于心室增強作用。在較高的丸劑劑量下(5mL混懸物或1100 μ g八氟丙烷)，心室增強作用持續達5分鐘。DEFINITY0 (Bristol Myers醫學成像)包含含有脂類微球體的八氟丙烷,其中脂類殼由磷脂DPPA、DPPCJP mPEG-DPPE組成。每毫升混懸物包含I. 2 X IO10個微粒，該微粒的平均直徑在I. 1-3. 3微米的粒度范圍內且具有ΙΙΟΟμ g八氟丙烷。該試劑僅僅被批準用于心室增強作用，而沒有被批準用于心肌血流評估。在700 μ L的丸劑劑量(用于70kg的人)下或5133 μ g的氣體下，試劑在心室內增強作用的持續時間大約為3. 4分鐘。IMAGENt0 (Photogen公司)包含含有全氟己烷的脂類微球體，其中，脂類外殼由磷脂DMPC組成。每毫升混懸物包含I. 4X109個微粒和92μ g的全氟己烷，其中，該微粒具有小于3微米的平均直徑。該試劑僅僅被批準用于心室增強作用，而沒有被批準用于心肌血流評估。在O. 43毫升的丸劑劑量(用于70kg的人)下或的氣體下，試劑在心室內的增強作用的平均持續時間大約為2. 6分鐘。在任何情況下，這些商品試劑僅具有有限的應用，沒有被批準用于除心室增強作用之外的其他應用，這些試劑在心室的平均顯像增強持續時間為5分鐘或更少。仍然缺少能夠增強心血管系統特別是心肌和心室的顯像且具有較長持續時間的商業超聲對比劑。現有技術中描述的試劑，當作為丸劑或短浸劑給藥時，產生的心肌圖像的持續時間明顯小于處理一個完整的心臟測試所需要的時間。一般地，現有技術的藥劑所提供的圖像其用于心肌時的持續時間不到一分鐘。人們希望獲得這樣的試劑，它能夠提供的增強顯像持續時間在心肌中為超過一分鐘和/或在心室中為大于5分鐘。因此，本發明的目的在于提供一種尤其適用于強心劑的劑量配方，其包含微粒，其中，微粒能夠提供增強的圖像和持續時間長的圖像。本發明的另一個目的是提供一種試劑盒，用于在超聲波顯像方法中包含微粒的劑量配方給藥。

發明內容
人們已經開發了具體的劑量配方并已經將其用于臨床研究，該劑量配方使用了聚合物微粒，將能夠提供顯著且持續時間長的增強顯像的全氟化碳氣體合并入其中。該劑量配方典型地包括一、二或直到五個劑量，最好為一個或兩個劑量的微粒，所述微粒由最好含有脂類的生物相容的聚合物形成，其含有在體溫時為氣體的全氟化碳。所述微粒以對增強超聲波顯像有效的劑量給患者投藥，在心室內的持續時間為大于五分鐘和/或在心肌中為大于一分鐘，劑量范圍從O. 025到8. Omg微粒/kg體重。優選給患者給藥的劑量范圍為從
0.05到4. Omg微粒/kg體重。在一個優選方案中，在心室中超聲波顯像的增強作用持續大于9分鐘，和/或在心肌中則為大于2分鐘。劑量配方典型地用小瓶或注射器提供。在一個典型的配方中，劑量配方呈干粉形式，使用之前需用無菌水重新配制，具體而言向裝有干粉的小瓶或注射器內添加水， 然后搖動以產生等滲或等壓的微粒懸浮液。在這些劑量配方的優選方案中，懸浮液包含
1.0-3. 5 X IO9微粒/mL，或25_50mg微粒/mL，最優選的濃度是懸浮液包含I. 5-2. 8 X IO9微粒/mL或30-45mg微粒/mL。在一個優選方案中,微粒的平均粒度小于8微米、最好是平均粒度為I. 8-3. O微米。在最佳方案中，氣體是0 4、化4、(^6、(^6、(^8、(^8、(^1(|、或SF6。在優選方案中，氣體是全氟正丁燒(n-perf luorobutane) (C4F10),以75-500 μ g/mL的微粒混懸物的給藥量提供；優選全氟正丁烷以100-400 μ g/mL的微粒混懸物的給藥量提供；最好是全氟正丁烷以150-350 μ g/mL的微粒混懸物的給藥量提供；或者氣體是八氟正丙烷，以75-375 μ g/mL 的微粒混懸物的給藥量提供，最好為以120-300U g/mL的微粒混懸物的給藥量提供。在最佳方案中，微粒由合成聚合物形成，所述合成聚合物例如有聚醇酸，包括聚乳酸、聚輕基乙酸、和聚(乳酸-共-輕基乙酸)，聚乙交酯(polyglycolides)、聚交酯和聚(丙交酯共乙交酯)，聚原酸酯(polyorthoesters)、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烴 (polyalkylenes)，例如聚乙烯和聚丙烯，聚烷撐二醇，例如聚乙二醇，聚氧化烯烴例如聚環氧乙烷，聚乙烯醇、聚戊酸、和聚(丙交酯共己內酯)、衍生物、共聚物及其混合物，以及相對于聚合物重量以0. 01-30被％的比例含有一個疏水化合物的聚合物，最好為以0. 01-30wt% (脂類重量/聚合物重量)的比例含有脂類的聚合物。在一個特別優選方案中，脂類為二油酰基磷脂酰膽堿(di ο I eoylpho sphat idyl cho line) (DOPC)、二肉豆蘧酰基磷脂酰膽堿 (dimyristoylphosphatidyIchoI in, DMPC)、雙十五酸基憐脂酸膽喊(dipentadecanoylph osphat idyl cho line, DPDPC)、二月桂酸基憐脂酸膽喊(dilauroylphosphatidylcholine， DLPC)、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(dipalmi toy lphosphat idyl choline, DPPC)、二硬 脂酰基磷脂酰膽堿(di stearoy lphosphat idyl choline, DSPC)、二花生酰基磷脂酰膽堿(diarachidoy lphosphat idyl choline, DAPC)、二山箭炔酰基磷脂酰膽堿 (dibehenoy lphosphat idyl cho line, DBPC)、雙二十三燒酸基憐脂酸膽喊(ditricosanoyl phosphatidylcholine DTPC)、二木脂酸基憐脂酸膽喊(dilignoceroylphatidylcholine DLGPC);或磷脂酰乙醇胺。最好是，微粒中的合成聚合物是聚(丙交酯共乙交酯)，丙交酯對乙交酯的比例為 50 50(即I : I)，重均分子量在20，000-40，000道爾頓的范圍內，微粒中的疏水化合物是DAPC，比例為5 6.6% (DAPC重量/聚合物重量)。劑量配方可以以包含微粒干粉的小瓶或注射器形式提供，或者以包含重懸浮微粒溶液的試劑盒形式提供。典型地，干粉的小瓶或注射器中也包含賦形劑例如糖或食鹽，使得溶液等滲，或者重新配制后等滲。然后，將此劑量配方作為丸劑或注射劑通過注射給患者給藥，在整個30分鐘的期間內進行顯像。微粒在多種診斷顯像程序中都很有用，包括超聲波顯像、磁共振成像、熒光檢查、X 射線和計算機化層析檢查。在用于心臟病學應用例如心肌血流評估和心室增強作用的臨床試驗中對微粒進行了檢驗。
具體實施例方式這里，對改進后的方法、微粒、試劑盒、和用于超聲波顯像的劑量配方進行描述。微粒在各種診斷超聲波顯像的應用中非常有用，特別在超聲程序中例如血管顯像和超聲波心動描記法例如心肌血流評估、心肌血容量評估和心室增強作用中非常有用。I.定義除非另作說明，和通常所使用的一樣，術語"微粒"包括"微球體"和"微膠囊"，以及其他的微粒。微粒在形狀上可以是球形的或非球形的。這里"微膠囊"一般被定義為具有一個包圍著氣體核心的外部聚合物殼的微粒。“微球體"被定義為可以是固體球形，或者由遍及充滿氣體的聚合物的氣孔所形成的蜂窩狀構造或海綿樣結構的多孔球形。一些微球體可以包含由遍及聚合物外殼的充滿氣體的氣孔所形成的具有蜂窩狀構造或海綿樣結構的外部聚合物外殼。對于這類微球體，該外部聚合物外殼包圍內部的氣體核心。和通常所使用的一樣，術語"劑量(dosage)"和"藥量(dose)"是同義詞，表示一次給予的物質量，或產生預期診斷或對比效果所需的物質量。這里所使用的術語"劑量配方"，是指小瓶或其他容器例如注射器，其包含一個或多個劑量的要求產生預期診斷或對比效果的物質。與常規一樣，這里"患者的部位"是指患者身上的一個特定的區域或部分。在有些情況下，"患者的部位"是指遍及患者全身的部位。這種部位的例子有肺部、胃腸部、心血管部位(包括心肌組織或心肌(例如心臟肌肉)、心室的室、圍鰓腔、瓣膜功能)、腎部位以及身體的其他部位、組織、器官等等、包括脈管組織和循環系統、以及有病的組織、包括癌組織。"患者的部位"例如包括將要被診斷圖像顯像的部位。盡管患者的部位"也"可能是體外的，但是最好在體內。
脈管組織"表示血管(包括動脈、靜脈、毛細血管等)。
'胃腸部位"包括食管、胃、小腸和大腸以及直腸所定義的部位。
與習慣一樣，這里" 與習慣一樣，這里J
與習慣一樣，這里與習慣一樣，這里患者部位。與習慣一樣，這里
顯像部位。與習慣一樣，這里穿過心臟的心室。與習慣一樣，這里與習慣一樣，這里
腎部位"是指腎和直接連接腎的脈管組織，包括腹主動脈。 目標部位"和"目標區"交叉使用，均表示希望藥劑到達的
欲顯像部位"和"顯像部位"交叉使用，均表示患者的預期
心室血流或心室增強作用"是指血流以一個或多個心臟循環
心房血流"是指血流以一個或多個循環穿過心臟的心房。 心肌血流"是指血液以一個或多個循環數在心臟肌肉或心肌的脈管組織中(包括在心臟的血管中)的流動。與習慣一樣，這里"心肌血容量"是指在心臟肌肉或心肌的脈管組織中的血液的量。與習慣一樣，這里
張周期和收縮周期。與習慣一樣，這里像在亮度上的增加。與習慣一樣，這里相對增加了的圖像。與習慣一樣，這里^與習慣一樣，這里
心動周期"是指心臟的一個完整的收縮周期，包括心臟的舒
增加的亮度"是指與沒有超聲對比劑而獲得的圖像相比，圖
增強的顯像"是指與沒有超聲對比劑而獲得圖像相比，亮度
持續時間"是指顯像的增加亮度可以被檢出的總時間。
冠狀動脈血管擴張劑"是指生理活性物質例如雙嘧哌胺醇 (dipyridamole)或腺苷,當這些藥物被患者服用時,能夠引起心血管部位脈管組織的擴張。II.微粒
在優選方案中，微粒包含聚合物、脂類和全氟化碳氣體。微粒可以既包含微球體也包含微膠囊，或只包含微球體或微膠囊。聚合物在優選方案中，微粒由合成聚合物形成。合成聚合物產生生物相容且無生物材料污染的微粒。另外，優選合成聚合物，是因為合成聚合物在體外和體內可再生合成和降解。根據體內穩定性所需要的時間選擇聚合物，該例如時間是分布到欲顯像的部位所需要的時間， 以及顯像所需要的時間。合成聚合物可以被修飾以產生性質不同的微粒(例如，改變分子量和/或功能基團)。典型的合成聚合物有聚醇酸例如聚乳酸、聚羥基乙酸、和聚(乳酸共羥基乙酸)、 聚乙交酯(polyglycolides)、聚交酯、聚(丙交酯共乙交酯)及其混合物、聚酐、聚原酸酯 (polyorthoesters)、聚酰胺、聚碳酸酯、聚烯烴,例如聚乙烯和聚丙烯、聚二醇例如聚乙二醇、氧化聚烯烴例如聚環氧乙烷聚乙烯醇、聚戊酸、和聚(丙交酯共己內酯)、及其衍生物、 共聚物和混合物。這里“衍生物”包括化學基團經取代、加成的聚合物，例如本領域技術人員通常使用的烷基、烷撐、羥基化、氧化及其他修飾。優選的可生物降解的聚合物的具體例子包括醇酸例如乳酸和羥基乙酸的聚合物、聚交酯、聚乙交酯(polyorthoesters)、聚(丙交酯共乙交酯)、與PEG的共聚物、聚酐、 聚(鄰)酯、聚氨酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯共己內酯)及其共聚物。最佳優選聚合物是聚(丙交酯共乙交酯)，其中丙交酯對乙交酯的比例為50 50(即I : I)且聚合物的重均分子量在20，000-40, 000道爾頓范圍內。重均分子量(Mw)是基于單個聚合物鏈分布內具有給定分子量的分子質量而計算出的平均分子量。Mw可以用凝膠滲透色譜法 (GPC)來測定。疏水化合物在一個優選方案中，如美國專利No. 5，837，221所描述的，聚合物包括一種疏水化合物。通常，例如脂類，它是疏水性的且在聚合物內部的量是一個有效劑量，結合這樣的化合物會通過微粒限制水的滲透和/或吸收，也因此限制了微粒中氣體的損失。這會有效增加由包含脂類、合成聚合物和包封有氣體尤其是氟化氣體例如全氟化碳的微粒所提供的增強顯像的持續時間。能夠用來固定聚合物微粒內部氣體的脂類包括但不局限于下列種類的脂類脂肪酸及其衍生物、甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯、磷脂、鞘脂類、膽固醇和類固醇衍生物、萜烯和維生素。脂肪酸及其衍生物可以包括(但不局限于)飽和和不飽和脂肪酸、奇數和偶數的脂肪酸、順反異構體、以及脂肪酸衍生物包括乙醇、酯、酸酐、羥基脂肪酸和前列腺素。可以使用的飽和和不飽和脂肪酸包括但不局限于具有12-22個碳原子的直鏈或支鏈分子。可以使用的飽和脂肪酸的例子包括但是不局限于月桂酸、肉豆蘧酸、棕櫚酸和硬脂酸。可以使用的不飽和脂肪酸的例子包括但是不局限于月桂酸、抹香鯨酸、肉豆蘧烯酸、棕櫚油酸、 巖芹酸和油酸。可以使用的支鏈脂肪酸的例子包括但是不局限于異月桂酸、異肉豆蘧酸、 異棕櫚酸、異硬脂酸和異戊二烯類。脂肪酸衍生物包括12-(((7' -二乙氨基香豆素-3-) 羰基)甲氨基)_硬脂酸；N-[12_(((7' 二乙氨基香豆素-3-)羰基)甲基氨基)十八酰基]-2-氨基棕櫚酸、N- 丁二酰-二油酰磷脂酰基乙醇胺和棕櫚酰-高半胱氨酸；和/或它們的組合物。可以使用的甘油單酯、甘油二酯、甘油三酯及其衍生物包括但是不局限于分子的碳原子數為6-24之間的脂肪酸或脂肪酸的混合物，二半乳糖基二甘油酯、I，2- 二油酰基-sn-甘油；I，2- 二棕櫚酰基-sn-3- 丁二酰基甘油；和I，3- 二棕櫚酰基_2_ 丁二酰基甘油。能夠使用的磷脂包括但是不局限于磷脂酸、帶有飽和與不飽和脂類的卵磷脂、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、溶血磷脂酰衍生物、心磷脂、和酰基烷基磷脂。磷脂的例子包括但是不局限于二油酰基磷脂酰膽堿(dioleoylphosphatidylcholine) (DOPC)、二肉豆蘧酰基磷脂酰膽堿 (dimyri stoy lphosphat idyl cho line, DMPC)、雙十五酸基憐脂酸膽喊(dipentadecanoylp hosphat idyl cho line, DPDPC)、二月桂酸基憐脂酸膽喊(dilauroylphosphatidylcholine, DLPC)、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿(dipalmi toy lphosphat idyl choline, DPPC)、二硬 脂酰基磷脂酰膽堿(di stearoy lphosphat idyl choline, DSPC)、二花生酰基磷脂酰膽堿(diarachidoy lphosphat idyl choline, DAPC)、二山箭炔酰基磷脂酰膽堿 (dibehenoy lphosphat idyl cho line, DBPC)、雙二十三燒酸基憐脂酸膽喊(ditricosanoyl phosphatidylcholine DTPC)、二木脂酸基憐脂酸膽喊(dilignoceroylphatidylcholine DLPC);和磷脂酰乙醇胺,例如二油酰基磷脂酰基乙醇胺(dioleoylphosphatidylethanola mine)或I-十六烷基-2-棕櫚酰甘油磷酸乙醇胺。也可以使用帶有不對稱的酰基鏈(例如帶有一個6碳原子的酰基鏈和另一個12碳原子的酰基鏈)的合成磷脂。可以使用的鞘脂類包括神經酰胺、鞘磷脂、腦苷脂類、神經節苷脂、腦硫脂和溶血腦硫脂。神經鞘脂的例子包括但是不局限于神經節苷脂GM和GM2。可以使用的類固醇包括但是不局限于膽固醇、膽固醇硫酸酯、膽固醇半琥珀酸酯、6-(5-膽固醇-3 β-氧)己基-6-氨基-6-脫氧-I-硫代-a D-乳糖吡喃糖苷、6-(5-膽留烯_3β_氧)己基6_氨基6_脫氧-I-硫代-a D-甘露卩比喃糖苷以及(膽留烯基-4' -二甲基-35-胺基)丁酸酯。可以使用的其他的脂類化合物包括生育酚及其衍生物，以及油和衍生油，例如硬脂酰胺。許多陽離子脂類都可以使用，例如D0TMA，N-[I-(2，3-二氧化油酰基)丙基-N，N， N-三甲基氯化物；D0TAP、1，2-二氧化油酰基-3-(三甲氨基)丙烷；和D0TB、1，2-二油酰基-3- (4'-三甲基)丁酰基-sn-甘油。最優選的脂類是磷脂，最好為DPPC、DAPC, DSPC、DTPC、DBPC, DLPC,最好為DPPC、 DSPC、DAPC 和 DBPC。脂類的含量范圍為O. 01-30% (脂類重量/聚合物重量)；最好為O. 1-20% (脂類重量/聚合物重量)，最優選為1-12% (脂類重量/聚合物重量)。當微粒由本發明所述的方法形成時，其大小可以得到良好的重現。這里，除非另作說明，術語顆粒的"大小"或"直徑"是指數均粒子大小。下面列舉一個可用于定義數均粒子大小(Xn)的等式的例子。
權利要求
1.一種試劑盒，其包含一種劑量配方和用于重新配制該劑量配方的溶液，其中該劑量配方包含微球體，所述微球體含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物，并且所述微球體包封有在體溫下為氣體的全氟化碳氣體，并且其中所述微球體是具有蜂窩狀構造或海綿樣結構的多孔球形，并且其中所述微球體為干粉，并且所述微球體用溶液重新配制形成等滲懸浮液，該懸浮液中的微球體濃度為1.0X109到 3. 5 X IO9微球體/mL懸浮液或微球體質量濃度為25 50mg微球體/mL懸浮液，并且其中劑量配方中所述微球體的劑量范圍為O. 5 4. Omg微球體/kg體重,從而適合于在心肌中提供與沒有服用對比劑時相比大于I分鐘的增強超聲波圖像。
2.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述懸浮液中的微球體濃度范圍為I.5 X IO9到2. 8 X IO9微球體/mL的懸浮液或微球體質量濃度為30到45mg微球體/mL的懸浮液。
3.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述微球體具有小于8微米的平均粒度。
4.如權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述微球體具有I.9 2. 6微米的平均粒度。
5.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述劑量從O.5mg微球體/kg體重、2. Omg 微球體/kg體重和4. Omg微球體/kg體重中選擇。
6.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體選自CF4、C2F4,C2F6, C3F6, C3F8, C4F8、C4F10 ο
7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是全氟正丁烷，以75 500μ g/ mL給藥量的微球體懸浮液提供。
8.如權利要求7所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是全氟正丁烷，以100 400 μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
9.如權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是全氟正丁烷，以150 350 μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
10.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述氣體是八氟正丙烷，以75 375 μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
11.如權利要求10所述的試劑盒，其特征在于，所述八氟正丙烷以120 300μ g/mL給藥量的微球體懸浮液提供。
12.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述疏水化合物與所述聚醇酸或者其共聚物或混合物以O. 01 30% (疏水化合物重量/聚醇酸或者其共聚物或混合物重量)的比例混合。
13.如權利要求12所述的試劑盒，其特征在于，所述疏水化合物為脂類。
14.如權利要求13所述的試劑盒，其特征在于，所述脂類是磷脂，選自二油酰基磷脂酰膽堿、二肉豆蘧酰基磷脂酰膽堿、雙十五酰基磷脂酰膽堿、二月桂酰基磷脂酰膽堿、二棕櫚酰基磷脂酰膽堿、二硬脂酰基磷脂酰膽堿、二花生酰基磷脂酰膽堿、二山崳炔酰基磷脂酰膽堿、雙二十三烷酰基磷脂酰膽堿、二木脂酰基磷脂酰膽堿和磷脂酰乙醇胺。
15.如權利要求14所述的試劑盒，其特征在于，所述聚醇酸共聚物是丙交酯與乙交酯的比例為I : I、重均分子量為20 40kDa的聚(丙交酯共乙交酯)，所述脂類是以5 .6.6% (脂類重量/聚醇酸共聚物重量)的比例與所述聚醇酸共聚物混合的二花生酰磷脂酰膽堿。
16.如權利要求I所述的試劑盒，其特征在于，所述懸浮液進一步含有一種或多種選自糖、鹽和表面活性劑的賦形劑。
17.一種制造用于超聲對比顯像的組合物的方法，包括在溶液中懸浮含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物的微球體；將所述懸浮液放入小瓶或注射器中；冷凍所述懸浮液；使所述小瓶凍干以在小瓶或注射器中產生干粉；和用在體溫下為氣體的全氟化碳氣體回充冷凍干燥器以得到組合物，其中所述組合物包含微球體，并且所述微球體包封有全氟化碳氣體，并且其中所述微球體是具有蜂窩狀構造或海綿樣結構的多孔球形，并且其中所述微球體為干粉，并且當微球體在使用之前用藥學可接受的載體進行重新配制時，它們可形成第二懸浮液， 該第二懸浮液是等滲懸浮液，其中的微球體濃度為I. O X IO9到3. 5 X IO9微球體/mL第二懸浮液或微球體質量濃度為25 50mg微球體/mL第二懸浮液，并且其中劑量配方中所述微球體的劑量范圍為O. 5 4. Omg微球體/kg體重,從而適合于在心肌中提供與沒有服用對比劑時相比大于I分鐘的增強超聲波圖像。
18.如權利要求17所述的方法，其特征在于，所述懸浮液進一步含有賦形劑。
19.一種制造用于超聲對比顯像的組合物的方法，包括將含有聚醇酸或者其共聚物或混合物、以及疏水化合物的溶液中微球體干法混合；將混合物放入小瓶或注射器中；抽真空后，用在體溫下為氣體的全氟化碳氣體充滿小瓶或注射器以得到組合物，其中所述組合物包含微球體，所述微球體包封有全氟化碳氣體，并且其中所述微球體是具有蜂窩狀構造或海綿樣結構的多孔球形，并且其中所述微球體為干粉，并且當微球體在使用之前用藥學可接受的載體進行重新配制時，它們可形成等滲懸浮液， 該懸浮液中的微球體濃度為I. OX IO9到3. 5 X IO9微球體/mL懸浮液或微球體質量濃度為 25 50mg微球體/mL懸浮液，并且其中劑量配方中所述微球體的劑量范圍為O. 5 4. Omg微球體/kg體重,從而適合于在心肌中提供與沒有服用對比劑時相比大于I分鐘的增強超聲波圖像。
20.如權利要求19所述的方法，其特征在于，所述混合物進一步含有賦形劑。
全文摘要
臨床研究已經實施并開發了具體的劑量配方，該劑量配方使用了能夠提供顯著增強顯像且持續時間長的全氟化碳氣體，將其并入聚合物的微粒開發而成。劑量配方包括由生物相容聚合物和全氟化碳形成的微粒，其中，聚合物最好混有脂類，全氟化碳在體溫下為氣體。所述微粒以對增強超聲波顯像有效的劑量給患者給藥，在心室的時間為大于5分鐘和/或在心肌中為大于一分鐘，劑量范圍為0.025到8.0mg微粒/kg體重。劑量范圍優選為0.05到4.0mg微粒/kg體重。所述劑量配方一般是裝在小瓶內提供。在一個典型的配方中，劑量配方由使用之前需用無菌水重新配制的干粉形成，具體而言向裝有干粉的小瓶或注射器內添加水，然后搖動以產生等滲的或等滲壓的微粒懸浮液。
文檔編號A61K49/22GK102600485SQ201210028040
公開日2012年7月25日 申請日期2004年6月4日 優先權日2004年6月4日
發明者唐納德·E·柴克林Ⅲ, 理查德·沃勒維奇, 茱麗·斯常博, 霍華德·伯恩斯坦 申請人:阿庫斯菲爾公司