專利名稱：紫地榆有效部位的制備及其防治結腸炎的藥物用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥技術領域，具體而言，本發明涉及一種紫地榆有效部位及其制備方法和藥物用途。該有效部位由云 南民間白族/彝族常用草藥隔山消經現代提取エ藝制備而成，具有明顯的抗潰瘍性結腸炎功效，可以用于制備防治潰瘍性結腸炎的保健品或藥物。
背景技術：
潰瘍性結腸炎(ulcerative colitis, UC)是ー種病因尚未確定的、主要累及直腸、結腸黏膜層及黏膜下層的慢性非特異性腸道炎癥性疾病，臨床上以腹瀉、腹痛、黏液膿血便和里急后重等為主要癥狀，以結腸黏膜慢性炎癥和潰瘍形成為主要病理特點。一般認為UC的發病與自身免疫、感染、遺傳、精神及環境因素等有夫。目前國內外尚未找到特異性治療藥物和方法，臨床上治療常用的幾類藥物(氨基水楊酸類、皮質類固醇激素、免疫抑制劑等)都只是緩解其臨床癥狀，且存在停藥后易復發和長期使用不良反應多等缺點。由于該病治愈難度大、易復發，并與結腸癌的發病存在一定的關系，被世界衛生組織列為現代難治病之一。由于該病自然病程的復雜特殊及對患者生活質量的嚴重影響，UC的治療現已成為消化系統疾病中的難點，日益受到關注。而有跡象表明，我國UC的發生率正逐年增高。因此，尋找其它療效顯著且副作用小的藥物以替代目前的常規藥物己成為全世界研究的熱點和主要方向。由于潰瘍性結腸炎與自身免疫有關，因此在治療該疾病時常規方法為選用糖皮質激素(例如，強的松、地塞米松、甲基強的松龍)或免疫抑制劑。而長期服用激素類制劑和免疫抑制劑的副作用都很大，使這些本來就受疾病折磨的患者猶如雪上加霜。尤其是大劑量激素的沖擊療法及激素長期的維持治療，激素的毒副作用也隨之明顯凸現，比如會出現類腎上腺皮質功能亢進現象向心性肥胖、面色潮紅、甚至動則汗出或入夜盜汗、痤瘡等，且病人容易繼發感染或加重感染，機體的生長發育延緩等等。而免疫抑制劑又會出現骨髄抑制，可能發生粒細胞減少；肝功能損害，使谷丙轉氨酶(SGPT或ALT)增高；性機能損害，尤其是男性，少數可發生不育；脫發；出血性膀肌炎，血尿增多；抵抗力降低；惡心、嘔吐、食欲不振等胃腸道反應。服用激素或免疫抑制最大的缺點是停藥后都容易復發。由于西藥治療潰瘍性結腸炎有很多的缺點，如上述治療的不徹底、易復發、對機體的傷害較大等；而中草藥在疾病，尤其是慢性難治性頑疾的治療上有著獨特的療效。因此，中草藥治療潰瘍性結腸炎越來越被患者所接受。由于潰瘍性結腸炎經常有腹瀉、粘液便和膿血便、里急后重、腹痛、發熱等癥狀，中醫認為是濕熱郁結，余邪不盡、熱毒結聚等癥狀，故在中藥的辯證方藥上使用清熱、燥濕、活血及解毒的中草藥。然而，常用的治療潰瘍性結腸炎中藥都是數種中草藥組成的復方，不僅藥物質量控制不易，服用上也不方便。因此，以單味中草藥為基礎，富集其有效組分或有效部位，將其開發成為安全、有效、可控的現代中藥/天然藥物是當前藥物研發的研究熱點。紫地榆(Geranium strictipes R. Knuth )為物牛兒苗科老鸛草屬植物,是中國的特有植物，分布在中國大陸的云南、四川等地。紫地榆生長于海拔2，700米至3，000米的地區，常生于山坡草地、林下及灌叢，目前尚未由人工引種栽培。在云南主要分布于中甸、麗江、大理、昆明等地；其根為白族、彝族民間常用草藥隔山消，味苦、微澀、酸，性微寒，功能主治為清熱利濕，活血止血(滇南本草)。白族和彝族民間多用于治療厭食、痢疾、慢性胃炎、脘腹疼痛，月經不調，鼻衄；也可外用，治跌打損傷。國內外文獻表明目前對紫地榆的研究主要集中在對其化學成以及隔山消(紫地榆的根)水提物抑齲作用方面的探索，而對該藥的有關藥理、毒理、臨床應用、藥材標準等方面的研究報道都非常少。已報道的紫地榆主要化學成分包括鞣質類和酚酸類，其中五倍子酸甲酯具有抗HIV的活性。除本專利發明人前期對其粗提物的抗菌作用進行了初歩研究，尚未見其它關于紫地榆和/或其有效部位用于防治潰瘍性結腸炎的報道。隔山消( 紫地榆的干燥根)是云南民間白族、彝族常用中草藥，雖然當地居民也將其應用于治療慢性胃炎等消化道疾病。但是，還未有特別應用于治療潰瘍性結腸炎的報道。此外，由于隔山消味苦，需長期服藥的慢性難治性疾病如潰瘍性結腸炎患者，一般很難按吋、按量長期服用常規煎煮的藥物。并且隔山消中含有大量鞣質，因此，其在治療慢性疾患的同時可能對胃黏膜造成新的刺激與傷害。為了去蕪存菁，即保留紫地榆藥材中防治潰瘍性結腸炎的有效部位、去除易產生毒副作用的成分，使患者不需服用大量藥物即可達到防治效果，我們對紫地榆的有效部位提取エ藝進行了大量研究，并以こ酸所致大鼠潰瘍性結腸炎為藥效試驗模型，驗證紫地榆有效部位用于治療潰瘍性結腸炎的功效。據此完成本發明。

發明內容
本發明的目的是提供一種適合于エ業化生產的紫地榆有效部位，具體而言，該有效部位由下列方法制備得到a)用50%_90%こ醇溶劑回流提取經粉碎的紫地榆3次，每次提取1-10小時，溫度50-800C ;合并提取液，減壓濃縮得こ醇浸膏；b)將步驟a得到的こ醇浸膏溶于蒸餾水中超聲使其充分溶解，經大孔吸附樹脂材料柱層析，水洗，然后用60%的こ醇-水洗脫，其中大孔吸附樹脂的型號為AB-8 ；c)將步驟b得到的洗脫液減壓濃縮至無醇味，冷凍干燥得產品。其中，減壓濃縮時的溫度不超過100°C ;步驟a中的提取時間優選2-6小吋。本發明中的紫地榆是指物牛兒苗科老鸛草屬植物紫地榆Geranium strictipesR. Knuth的任一部位或全草,優選其干燥根。本發明的另一目的是提供了由大孔樹脂制備得到的紫地榆有效部位在制備治療潰瘍性結腸炎的藥物中的應用。本發明的再一目的是提供ー種具有防治潰瘍性結腸炎功能的藥物，該藥物含有治療有效量的紫地榆有效部位提取物、藥用輔料和可藥用載體。以紫地榆有效部位為原料的藥物制劑可以是注射劑、片劑、顆粒劑、膠囊劑、ロ服液、氣霧劑、透皮貼劑、栓劑、滴丸劑、夕卜用搽劑、軟膏劑等劑型藥物。本發明的相關試驗中選用了 AB-8大孔吸附樹脂為分離工具，有效地富集了紫地榆有效部位；并采用10%こ酸復制大鼠潰瘍性結腸炎模型(UC大鼠)，觀察UC大鼠體重變化、大便隱血情況；檢測UC大鼠腸道結腸黏膜組織損傷情況以及病理組織學變化；測定UC大鼠結腸組織中丙ニ醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性、NO自由基含量、髓過氧化物酶(MPO)活性和谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)含量；摘取UC大鼠脾臟、胸腺和結腸，計算脾臟指數、胸腺指數、結腸濕重指數等。エ藝研究及藥效學實驗結果說明使用大孔吸附樹脂對紫地榆醇提物進行精制在生產エ藝上及其在制備防治UC的制藥用途的應用上有著相當的優勢，并且以往未見相關的報道，從而構成本發明。本發明有益之處在于首次發現由AB-8大孔樹脂制備的紫地榆有效部位具有防治潰瘍性結腸炎方面的成藥潛力，為開發防治該疾病創新性非激素藥物或免疫抑制劑提供了新的物質基礎。具有潛在巨大的社會效益和經濟效益。本發明再一特點為紫地榆有效部位的制備采用了除去干擾成分效果好、操作簡便、樣品損耗小、成本低、污染小、安全可靠的大孔吸附樹脂為提取分離材料，利于節能減排條件下的大規模生產。產業化前景十 分明確。
具體實施例方式為了更好地理解本發明的實質，下面通過實施例進ー步說明本發明。實施例給出了紫地榆有效部位的制備及其對大鼠こ酸所致潰瘍性結腸炎的治療效果，說明其在制備防治潰瘍性結腸炎中的用途。必須說明，本發明的實施例是用于說明本發明而不是對本發明的限制。根據本發明的實質對本發明進行的簡單改進都屬于本發明要求保護的范圍。實施例I :紫地榆有效部位(樣品I)的制備I. I儀器與試劑FD-1C-80冷凍干燥機為北京博醫康實驗儀器有限公司產品，超凈工作臺采用蘇州凈化設備有限公司SW-CJ-2FD型雙人單面凈化工作臺，隔水式恒溫培養箱為上海一恒科技有限公司產品，滅菌鍋用上海博訊實業有限公司醫療設備廠YXQ-LS-50SII型立式壓カ蒸汽滅菌器，旋轉蒸發儀(R-210)為瑞士步祺產品，臺式高速冷凍離心機(TL-16R型)為上海離心機機械研究所產品，紫外分光光度計(722型)購自上海第三分析儀器廠。紫外光譜用Shimadzu UV-240紫外分光光度計測定，薄層制備層析(PTLC)用Merck公司的鋁箔硅膠板，薄板(TLC)檢測用254nm和365nm的紫外燈；顯色劑用碘蒸氣、10%硫酸-こ醇以及磷鑰酸溶液。こ酸、こ醇、甲醇等試劑均為分析純，天津化學試劑有限公司生產。I. 2 藥材隔山消，購自大理集盛大藥房。經大理學院藥學與化學學院馬曉匡教授鑒定為物牛兒苗科老鸛草屬植物紫地榆Geranium strictipes R. Knuth的干燥根。I. 3紫地榆こ醇浸膏的制備取隔山消藥材(紫地榆的干燥根)5公斤，粉碎后加60%こ醇10000毫升浸泡，加溫至60°C提取，提取3次，毎次本別為2小吋、4小吋、4小吋。合并提取液，減壓濃縮得紫地榆こ醇浸膏(粗提物I) I. 64公斤，即I克浸膏相當于3. 06克生藥。I. 4紫地榆有效部位提取物的制備將I. 3項下制備得到的粗提物I (500克)溶于3750毫升蒸餾水中超聲使其充分溶解，用750克大孔吸附樹脂AB-8吸附拌樣，上柱，先用水洗脫至無色。續用60%こ醇-水溶液洗脫至無色，取洗脫液500毫升減壓濃縮至干，真空干燥，即得紫地榆有效部位(樣品I)。
實施例2 :紫地榆有效部位(樣品II)的制備2. I儀器與試劑同實施例I。2. 2藥材同實施例I。2. 3紫地榆こ醇浸膏的制備取隔山消藥材(紫地榆的干燥根)5公斤，加60%こ醇10000毫升浸泡，加溫至60°C提取，提取3次，毎次本別為4小吋、6小吋、8小吋。合并提取液，減壓濃縮得紫地榆こ醇浸膏(粗提物II) I. 63公斤，即I克浸膏 相當于3. 06克生藥。2. 4紫地榆有效部位提取物的制備將2. 3項下制備得到的粗提物II (500克)溶于3750毫升蒸餾水中超聲使其充分溶解，用750克大孔吸附樹脂AB-8吸附拌樣，上柱，先用水洗脫至無色。續用60%こ醇-水溶液洗脫至無色，取洗脫液500毫升減壓濃縮至干，真空干燥，即得紫地榆有效部位(樣品
II)。實施例3 :紫地榆有效部位對こ酸所致潰瘍性結腸炎大鼠隱血的影響3. I實驗材料3. I. I動物SD雄性大鼠，體重為220 240克，合格證號SCXK (滇)2005-0008，昆明醫學院實驗動物中心提供。大鼠飼料及墊料由大理學院動物實驗中心提供。3. I. 2受試藥物粗提物I，即實施例I制備得到的紫地榆こ醇浸膏；樣品I，即實施例I制備得到的紫地榆有效部位。實驗以柳氮磺胺吡啶(SASP，上海信誼嘉華藥業有限公司生產，批號100527)為陽性對照品，用時用刀片刮去黃色糖衣，呈現黃褐色，研碎后過100目篩，用O. 5%CMC-Na配制成劑量為300毫克/公斤的混懸液備用。3. I. 3 試劑冰こ酸(天津市風船化學試劑科技有限公司，批號080308，分析純)；以下試劑盒由南京建成生物工程研究所提供隱血(OB)試劑盒，批號20101126 ；考馬斯亮藍蛋白試劑盒，批號20100925 ;丙ニ醛(MDA)試劑盒，批號20101124 ;S0D試劑盒(測總)，批號=20101125 ;一氧化氮測試盒(硝酸還原酶法)，批號:20101117 ;髓過氧化物酶(MPO)測試盒，批號20101109 ;谷胱甘肽-過氧化物酶(GSH-PX)測試盒，批號20101116。3. I. 4主要儀器同實施例I。3. 2試驗方法3. 2. Iこ酸性潰瘍性結腸炎(UC)大鼠造模大鼠在實驗室常規飼養一周。實驗前禁食不禁水24小吋，記錄體重。造模前先用5%肥皂水灌腸，清潔腸道。30分鐘后用こ醚麻酔，經肛門插入直徑3毫米的聚こ烯纖維導管8 10公分，取仰臥位，注入10%こ酸溶液I. 5毫升、保留15秒，立即用3 5毫升生理鹽水(NS)沖洗兩次。造模24小時后大鼠即出現腹瀉，為黃色稀便、半稀便甚至血便，體重下降，精神萎靡，自主活動減少。其糞便性狀及一般情況的改變，符合實驗性UC的改變，表明造模成功。3. 2. 2分組及給藥造模24小時后，大鼠隨機分為9組，即樣品1(50毫克/公斤、100毫克/公斤、200毫克/公斤)、粗提物I (低、中、高劑量組)、陽性對照SASP組、模型組、正常對照組，每組10只。其中，正常組大鼠用生理鹽水按3. 2. I造模方法處理。造模后24小時開始灌胃給藥，I次/天，連續7天。正常組和模型組以等容量的生理鹽水灌胃；粗提物I用O. 5%羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)配制成低、中、高劑量(163. 4毫克/公斤、326. 8毫克/公斤、653. 6毫克/公斤，相當于O. 5、I. 0、2克生藥/公斤)。3. 2. 3大便隱血實驗采用鄰聯甲苯胺法，用隱血(OB)試劑盒檢測，用棉簽挑取少量大鼠大便于白瓷板上，先滴加鄰聯甲苯胺，再滴加過氧化氫，根據顯色時間和顯色程度進行隱血等級評分。隱血等級評分標準如下 __典便表現_
0陰性(_) (3分鐘后不顯藍綠色)
1隠血(+ ) (30 60秒中內、1i藍色)
2隱血(++)(立_顯藍綠色)
3隱血(+++)(立即顯深藍色)
_4_肉眼血便_3. 2. 4數據統計與分析統計軟件為SPSS16. O,結果用均數土標準差表示，各組總體比較采用單因素方差分析，組間比較采用t檢驗，涉及的計量資料采用秩和檢驗，P
<O. 05為有統計學差異。3. 3實驗結果こ酸性UC大鼠造模后，對各組造模24小時和給藥7天后的隱血情況進行評價與統計學分析，紫地榆有效部位對UC大鼠隱血的影響的實驗結果見表1-2。造模24小時后各組大鼠大便隱血情況沒有統計學差異，隱血大部分呈陽性(++)或強陽性(+++)。經藥物治療后，隱血程度逐漸減輕。給藥7天后，各組間隱血情況比較差異有統計學意義(P〈0. 001)。除正常組外，各組造模后24小時和給藥7d后的隱血情況之前后比較P < O. 05，有統計學差異，其中粗提物組和樣品I之高、中、低劑量組給藥前后都有非常顯著的差異(P〈0. 01 )。表I.紫地榆有效部位對こ酸所致UC大鼠隱血的影響(造模后24小吋)
權利要求
1.一種紫地榆有效部位提取物，其特征由下列方法制備得到 a)用50%-90%こ醇溶劑回流提取經粉碎的紫地榆3次，每次提取1-10小吋，溫度50-800C ;合并提取液，減壓濃縮得こ醇浸膏； b)將步驟a得到的こ醇浸膏溶于蒸餾水中超聲使其充分溶解，經大孔吸附樹脂材料柱層析，水洗，然后用60%的こ醇-水洗脫，其中大孔吸附樹脂的型號為AB-8 ； c)將步驟b得到的洗脫液減壓濃縮至無醇味，冷凍干燥得產品。
2.根據權利要求I的紫地榆有效部位提取物，其特征為紫地榆是指櫳牛兒苗科老鸛草屬植物紫地榆Geranium strictipes R. Knuth的干燥根；減壓濃縮時的溫度不超過IOO0C ;步驟a中的提取時間為2-6小時。
3.根據權利要求1-2之一的紫地榆有效部位提取物用于制備防治潰瘍性結腸炎的藥物用途。
4.ー種具有防治潰瘍性結腸炎功能的藥物，其為治療有效量的根據權利要求1-2之一的紫地榆有效部位提取物、藥用輔料和可藥用載體。
5.根據權利要求4的藥物，其藥物劑型是片劑、顆粒劑、膠囊、ロ服液、注射劑、滴丸、氣霧劑、透皮貼劑、栓劑、外用搽劑或軟膏劑。
全文摘要
本發明涉及紫地榆有效部位的制備及其防治結腸炎的藥物用途。本發明的紫地榆有效部位提取物由彝藥隔山消經大孔吸附樹脂精制而成。隔山消為牻牛兒苗科老鸛草屬植物紫地榆Geranium strictipes R.Knuth的干燥根。本發明采用大鼠乙酸所致潰瘍性結腸炎模型，觀察紫地榆有效部位對模型大鼠的一般臨床癥狀、病理形態學和氧化損傷的相關生化指標的影響。實驗結果顯示，紫地榆有效部位對乙酸所致潰瘍性結腸炎大鼠模型具有一定的治療作用，可改善其臨床癥狀。因此，紫地榆有效部位可以預期應用于制備防治潰瘍性結腸炎的藥物。
文檔編號A61K36/185GK102688263SQ20121017912
公開日2012年9月26日 申請日期2012年6月2日 優先權日2012年6月2日
發明者張嫻文, 施貴榮, 李鳳賢, 李輝, 洪小鳳, 耿玲, 趙昱 申請人:大理學院