專利名稱：一類新型萬古霉素和去甲萬古霉素的衍生物,制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一類新型萬古霉素和去甲萬古霉素的衍生物，制備方法及其在制備抗感染，尤其嚴重感染的藥物中的用途。
背景技術：
糖肽抗生素(二丙庚肽)對幾乎所有G+性菌具有活性，在臨床上用于嚴重的G+性菌感染的治療，代表著對付這類難治性疾病的最后防線，見Glycopeptide Antibiotics，edited by R.Nagarajan，MarcelDekker，Inc.New York(1994))。隨著80年萬古霉素耐藥性腸球菌(VRE)的出現，糖肽耐藥性腸球菌不斷增多，近期甚至出現了糖肽耐藥基因從腸球菌向其它菌轉移的現象，如金黃色葡萄球菌對β-內酰胺類抗生素及萬古霉素耐藥株的增加；腸球菌對β-內酰胺類抗生素、氨基糖甙類抗生素及萬古霉素耐藥株的增加等等，由于尚缺乏治有效治療糖肽耐藥菌感染的藥物，糖肽耐藥性已成為威脅人類生存和健康的一大難題，見Hospital Infection Control Practices AdvisoryCommittee，Infection Control Hopital Epidemiology，1995，17，364-369；A.P.Johnson et al.，Clinical MicrobiologyRev.，1990，3，280-291；G.M.Eliopoulos，European J.ClinicalMicrobiol.，Infection Disease，1993，12，409-412；and P.Courvalin，Antimicrob.Agents Chemother，1990，34，2291-2296)。
從已有的研究發出，腸球菌的糖肽耐藥表現型有5種，即VanA，VanB，VanC，VanD和VanE型。為了更有效的控制耐藥菌，近年來很重視糖肽類新藥的開發。已經對許多糖肽抗生素衍生物進行了研究，見美國專利，專利號4,639,433、4,643,987、4,497,802、4,698,327、5,591,714、5,840,684、5,843,889。其它衍生物在EP 0 802 199；EP 0 801 075；EP 0 667 353；WO 97/28812；WO 97/38702；WO 98/52589；WO 98/52592；J.Amer.Chem.Soc.，1996，118，13107-13108；J.Amer.Chem.Soc.，1997，119，12041-12047；J.Amer.Chem.Soc.，1994，116，4573-4590中已經公開。由Eli Lilly company開發的Oritavancin，已經進入了III期臨床階段。盡管如此，仍然需要開發抗菌譜廣，抗菌活性更高，對人體毒副作用更低的糖肽衍生物。

發明內容
本發明的概述發明人對萬古霉素和去甲萬古霉素進行了結構改造，得到了一系列的衍生物，經過初步MIC試驗，證實對耐藥葡萄球菌和耐藥腸球菌的作用是去甲萬古霉素(萬古霉素)的數倍。
因此，本發明的一個目的是提供通式(I)的一系列萬古霉素和去甲萬古霉素的衍生物及其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥 其中R1是H或-CH2-R5，其中R5是C1-C20飽和或不飽和的烴性質的脂族基團，例如C1-C20烷基(alkyl)，C2-C20鏈烯基(alkenyl)，或是C3-C20飽和或不飽和環脂族基團，例如C3-C20環烷基或C3-C20環烯基，或是C5-C20雜環基團(雜環含有選自N、O或S中的一個或多個雜原子)，或是C6-C30芳基，烷芳基或芳烷基(aryl，alkaryl，aralkyl group)，該芳基、烷芳基或芳烷基可以含有一個或多個芳環或稠環，
上述所有基團是未取代的，或被例如鹵素、芳基，OH，氨基等取代，其碳鏈任選可以插入選自O、N和S中的一個或多個雜原子(heteroatom)；R2是OH，或-NH-R8，其中其中R8是烷基，鏈烯基，環烷基，環烯基，芳烷基，烷芳基和雜環基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R3是-H或-CH2-NH-R7，其中R7是烷基，鏈烯基，環烷基，環烯基，芳烷基，烷芳基和雜環基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R4是氫或甲基。
優選的是，R1是-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-CH2-4-(Ph-O)-Ph，-CH2-4-Ph-Ph，-CH2CH2CH2-Ph，-CH2-4-(Butyl-O)-Ph，-CH2-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-S-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-H，-CH2-(CH2)9-CH3；R2是OH，-NH(CH2)3N(CH3)2，-N-(D-glucosamine)；R3是-H，-CH2-NH-CH2-4-Ph-Ph，-CH2-NH(CH2)3N(CH3)2；-CH2-N-(N-CH2-D-glucosamine)；和R4是-H或-CH3。
本發明的第二個目的是提供上述通式化合物的制備方法，包括以下步驟A、將去甲萬古霉素或萬古霉素在三氟乙酸的存在下升溫(例如40-120℃)下反應，獲得葡萄糖殘基被除去的化合物NCPC4850或NCPC4851
其中R4是H或CH3。
本發明化合物的制備方法可以進一步包括B、NCPC4850或NCPC4851進行氨基的保護獲得下式的化合物 其中Pro是保護基，上式化合物與醛R5CHO反應，獲得以下化合物 再脫保護，獲得下式的化合物
其中R5如以上所定義，Pro是保護基；或/和C、以上步驟A或B的產物 其中R4如以上所定義，R1為H或-CH2-R5，R5如以上所定義，與甲醛和胺R7NH2在堿性條件下反應，獲得下式的化合物
其中R7如以上所定義；或D、以上步驟A或B的產物 其中R1為H或-CH2-R5，R5如以上所定義，與R8NH2反應，形成以下結構式的化合物
其中R8如以上所定義。
本發明的又一個目的是提供上述化合物在制備抗嚴重的G+菌感染的藥物，尤其是治療或/和輔助治療心內膜炎、腦膜炎、肺炎、敗血癥、急慢性骨髓炎、燒傷感染、皮膚或軟組織化膿性感染的藥物中的用途。
本發明的再一個目的是提供含有有效量的上述本發明化合物的藥物組合物，本發明的藥物組合物還可以含有本領域公知的載體，如賦型劑，稀釋劑，香味劑，甜味劑等。
本發明的詳細描述我們將去甲萬古霉素(萬古霉素)在三氟乙酸存在的條件下，加熱反應后經過一系列后處理，得到了結構單一的化合物，經過高分辨質譜、NMR等分析技術確定了該化合物的化學結構，NCPC4850(NCPC4851)。
R＝H，Norvancomycin R＝H，NCPC4850R＝CH3，VancomycinR＝CH3，NCPC4851 Molecular Formula ＝C65H73Cl2N9O24Molecular Formula＝C59H63Cl2N9O19Formula Weight＝1435.227 Formula Weight ＝1273.086Exact Mass Calcd. ＝1433.414557 DaExact Mass Calcd.＝1271.381732 DaExact Mass Obsd. ＝1433.4146 Da Exact Mass Obsd. ＝1271.3617 DaNorvancomycin NCPC4850該化合物可能的生成機理是去甲萬古霉素分子(結構如上面左)中的葡萄糖殘基(glucose moiety)水解脫去，而另外一個糖(萬古糖殘基vancosmine moiety)通過分子內重排(如上面箭頭所示)直接連到去甲萬古霉素多肽骨架上。化合物的化學結構已經通過對NCPC4850的進一步化學反應得到了證實。
去甲萬古霉素和NCPC4850的13C NMR(500MHz，D2O，ppm)數據如下表

表1


去甲萬古霉素和化合物NCPCC4850的高分辨質譜數據如下

Molecular Formula＝C65H73Cl2N9O24Molecular Formula＝C59H63Cl2N9O19Formula Weight ＝1435.227Formula Weight ＝1273.086Exact Mass Calcd.＝1433.414557 Da Exact Mass Calcd.＝1271.361732 DaExact Mass Obsd.＝1433.4146 Da Exact Mass Obsd. ＝1271.3617 DaNorvancomycin NCPC4850通過對化合物NCPC4850(NCPC4851也同)進行下列反應(還原胺基化)得到如式(1)的衍生物
Cbz-NCPC4850的合成(氨基的保護)將NCPC4850(128mg，0.10mmol)溶解到5ml 1∶1的1，4-二氧六環/水中，加入NaHCO3(17mg，0.20mmol)，然后在冰浴并劇烈攪拌的情況下逐滴加入Cbz-Cl(17mg，0.11mmol)。反應液在室溫下攪拌1小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Cbz-NCPC4850-CH2R的合成(胺基化)將0.10mmol的Cbz-NCPC4850，0.15mmol的醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
NCPC4850-CH2R的合成(還原)將0.10mmol的以上沉淀溶解到7ml的RMF，加入50mg的Pd/C(5％)，在～1atm、室溫下氫化3小時，催化劑過濾除去后將反應液倒入80ml丙酮，沉淀用反相HPLC純化。全程收率30-65％。
其中R-CHO的普通醛，例如甲醛，乙醛，丙烯醛，丙醛，戊醛，己醛，庚醛，苯甲醛，苯乙醛等，即R是烷基，烯基，芳基，芳烷基，烷芳基等。
式(1)的化合物也可通過以下反應步驟得到
Boc-NCPC4850的合成(氨基的保護)將NCPC4850(128mg，0.10mmol)、(Boc)2O(21.8mg，0.11mmol)以及NaHCO3(17mg，0.20mmol)溶解到5ml的1，4-二氧六環/水(1∶1)中，反應液在室溫下攪拌6小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Boc-NCPC4850-CH2R的合成(胺基化)將0.10mmol的Boc-NCPC4850，0.15mmol的醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)中。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀物用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
NCPC4850-CH2R的合成(還原)0.10mmol的以上沉淀懸浮到10ml氯仿，緩慢滴加2ml TFA。溶液在室溫攪拌20分鐘后倒入50ml乙醚沉淀，沉淀用制備型HPLC純化。全程收率20-60％。
其中R-CHO的普通醛，例如甲醛，乙醛，丙烯醛，丙醛，戊醛，己醛，庚醛，苯甲醛，苯乙醛等，即R是烷基，烯基，芳基，芳烷基，烷芳基等。
以上所述的均為一般醛，也可用氨基取代醛進行還原烷基化，氨基取代醛可用如下方法制備；
將2-氨基乙醛縮二甲醇(1eq.)，以上所述的普通醛RCHO(1.05eq)，和NaCNBH3(1eq)在CH2Cl2中的溶液在室溫下攪拌1-4小時。該反應用TLC檢測。0℃下向反應混合物加入FmocCl(1eq)和DIPEA(2eq)。室溫下繼續攪拌1-2小時。真空中除去溶劑，并且通過反相HPLC純化殘余物得到氨基取代乙縮醛。向上述氨基取代乙縮醛在丙酮中的溶液內加入6N HCl(1.5eq.)。室溫下將反應攪拌5-16小時。真空中除去溶劑且在高真空下干燥殘余物，得到氨基取代醛的粗產物，不需要進一步純化即可使用。
也可用硫取代醛進行胺基化，硫取代醛的制備如下 將溴乙縮醛(1eq.)(如二甲基2-溴乙縮醛(dimethyl 2-bromoacetaldehyde))和碘化鈉(1eq.)，在DMF中的溶液在室溫下攪拌0.5小時。向該溶液中加入取代硫醇RSH(R是烷基，烯基，芳基，烷芳基，芳烷基等)(1.eq)，然后加入碳酸鉀(1eq)。在25-80℃下將該混合物攪拌4-16小時。隨后反應溶解在乙酸乙酯中，用水洗滌2次且用飽和氯化鈉洗滌1次。有機層用MgSO4干燥且真空中除去溶劑。用反相HPLC純化，得到相應的硫取代乙縮醛。
在硫取代乙縮醛在丙酮中的溶液中加入6N HCl(1.5eq.)。室溫下將反應攪拌5-16小時。真空中出去溶劑且在高真空下干燥殘余物，得到硫取代醛的粗產物，其通常不需要進一步純化即可使用。
通過對式(1)的化合物(NCPC481也同)進行胺甲基化可得到如式(2)的化合物
將0.10mmol的NCPC4850，1.0mmol的胺R7NH2以及0.12mmol的甲醛水溶液溶解到10ml的乙腈/水(1∶1)，用1M的NaOH調pH到9.5～10，反應液在室溫下攪拌6～10小時后，用1M的HCl調pH到4～5，倒入200ml丙酮沉淀。沉淀用反相HPLC純化，收率30-85％。通過對式(2)的羥基與胺的縮合(NCPC4851也同)可得到如式(3)的化合物 將0.10mmol的NCPC4850或其還原烷化衍生物、1.0mmol的胺R8NH2(或胺鹽)溶解到5ml的DMSO，用Et3N調pH到8.5～9，反應液攪拌1小時后加入0.12mmol的PyBOP。反應液在室溫繼續攪拌3小時。將150ml乙醚加入到反應混合物中得到油狀粘稠物，油狀粘稠物用30ml乙醚分兩次震蕩洗滌后再用15ml丙酮處理便得到白色或淡黃色固體。用反相HPLC純化，收率60-90％。
用本發明的各種化合物對各種耐藥菌進行了抗菌活性實驗，結果，本發明的化合物對各種耐藥菌的最小抑菌濃度大大優于萬古霉素和去萬古霉素，從而證實本發明的化合物可有效用于抗嚴重的G+菌感染，尤其用于治療或/和輔助治療心內膜炎、腦膜炎、肺炎、敗血癥、急慢性骨髓炎、燒傷感染、皮膚或軟組織化膿性感染。
本發明的化合物可以制成非腸道給藥劑型或經腸道給藥劑型，如口服或靜脈注射劑型。本發明的化合物的用量可以參照萬古霉素和去甲萬古霉素的現有劑量，例如成人可以為0.8-2.0g/d，可以分2-3次給藥，兒童用量酌減。本發明的化合物可以按常規方法成鹽，例如制成鹽酸鹽。
實施例為了進一步闡明本發明，下面給出一系列實施例。需要指出的是，這些實施例完全是例證性的。給出這些實施例的目的是為了充分明示本發明的意義和內容，決不對本發明造成任何形式的限制。
在以下實施例中，下列縮寫具有以下含義。未定義的縮寫具有其普遍接受的含義，除非另外聲明，所有溫度為攝氏度。
BOC，Boc ＝叔丁氧基羰基Cbz-Cl ＝芐氧酰氯DIPEA＝二異丙基乙胺DMF ＝N，N-二甲基甲酰胺DMSO ＝二甲基亞砜eq. ＝當量Et ＝乙基EtOAc ＝乙酸乙酯Fmoc ＝9-芴基甲氧基羰基HPLC ＝高效液相色譜Me ＝甲基PyBOP＝苯并三唑-1-基氧三(吡咯烷子基)膦六氟磷酸鹽TFA ＝三氟乙酸THF ＝四氫呋喃
TLC，tlc ＝薄層層析在以下的實施例中，去甲萬古霉素鹽酸鹽由華北制藥集團生產，其它試劑和反應物從Aldrich Chemical Co.購買。
在實施例中，通過上述的一些化學過程合成了一系列NCPC4850(NCPC4851)的衍生物(見表2化合物編號1～32)。
另外需要指出，實施例所有反應中通過反相HPLC純化條件用DIKMA 10×50mm(5μm)C18柱及TFA緩沖體系通過制備反相高效液相(HPLC)純化。用時間為零時10％乙腈/0.1％TFA至時間為15分鐘時的80％乙腈/0.1％TFA的10ml/分鐘的線形梯度洗脫。含有產物的流份通過在254nm處紫外掃描檢測。將所需流份冷凍干燥成白色固體。本發明中所言及的收率均為摩爾收率。
NCPC4850和NCPC4851的衍生物
表2

這些化合物的質譜數據如下表所示
表3

實施例實施例1NCPC4850和NCPC4851的化學合成

R＝H，NorvancomycinR＝H，NCPC4850R＝CH3，Vancomycin R＝CH3，NCPC4851
將5.0克去甲萬古霉素鹽酸鹽溶解到20ml三氟乙酸(TFA)，于50℃下攪拌反應2小時。反應液真空濃縮后溶于20ml丙酮，倒入200ml氯仿沉淀。沉淀物用20ml氯仿分兩次洗滌后在真空下干燥。粗品用反相HPLC純化得化合物NCPC4850純品500mg(產率10％)。如果用萬古霉素鹽酸鹽為原料，通過相同的實驗過程，則可得到化合物NCPC4851。
實施例2化合物1的合成 Cbz-NCPC4850的合成將NCPC4850(128mg，0.10mmol)溶解到5ml的1，4-二氧六環/水(1∶1)中，加入NaHCO3(17mg，0.20mmol)，然后在冰浴并劇烈攪拌的情況下逐滴加入Cbz-Cl(17mg，0.11mmol)。反應液在室溫下攪拌1小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀無用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Cbz-NCPC4850-4-Chlorophenylbenzyl的合成將0.10mmol的Cbz-NCPC4850，0.15mmol的4-氯聯苯甲醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
化合物1的合成將0.10mmol的以上沉淀物溶解到7ml的DMF，加入50mg的Pd/C(5％)，在～1atm、室溫下氫化3小時，催化劑過濾除去后將反應液倒入80ml丙酮沉淀，沉淀物用反相HPLC純化。全程收率50％。
實施例3化合物2的合成 Boc-NCPC4850的合成將NCPC4850(128mg，0.10mmol)、(Boc)2O(21.8mg，0.11mmol)、NaCO3(17mg，0.20mmol)溶解到5ml的1，4-二氧六環/水(1∶1)中，反應液在室溫下攪拌6小時后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
Boc-NCPC4850-4-phenyoxylbenzyl的合成將0.10mmol的Boc-NCPC4850，0.15mmol的4-苯氧基苯甲醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，繼續攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。
化合物2的合成將0.10mmol的以上沉淀懸浮到10ml氯仿，緩慢滴加2ml TFA。溶液在室溫攪拌20分鐘后倒入50ml乙醚沉淀，沉淀用反相HPLC純化。全程收率42％。
實施例4化合物3的合成與化合物1的制備相同，只是用4-Ph-Ph-CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例5化合物4的合成與化合物1的制備相同，只是用Ph-CH2CH2-CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例6化合物5的合成與化合物1的制備相同，只是用4-(Butyl-O)-Ph-CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例7化合物6的合成與化合物1的制備相同，只是用CH3-(CH2)9-CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例8化合物7的合成與化合物1的制備相同，只是用CH3-(CH2)9-NH-CH2CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例9化合物8的合成與化合物1的制備相同，只是用CH3-(CH2)9-S-CH2CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例10化合物9的合成與化合物1的制備相同，只是用4-(4-Cl-Ph)-Ph-CH2-NH-CH2CHO代替4-氯聯苯甲醛。
實施例11
化合物10的合成將0.1mmol的化合物7、1.0mmol的H2N-(CH2)3N(CH3)2溶解到5ml的DMSO，用DIPEA調pH到8.5～9，反應液攪拌1小時后加入0.12mmol的PyBOP。反應液在室溫繼續攪拌3小時。將150ml乙醚加入到反應混合物中得到油狀粘稠物，油狀粘稠物用30ml乙醚分兩次震蕩洗滌后再用15ml丙酮處理便得到白色固體。用反相HPLC純化。收率65％。
實施例12化合物11的合成同實施例11，只是用H2N-(D-glucosamine)代替H2N-(CH2)3N(CH3)2。
實施例13化合物12的合成 將0.1mmol的化合物1、1.0mmol的H2N-(CH2)3N(CH3)2溶解到5ml的DMSO，用DIPEA調pH到8.5～9，反應液攪拌1小時后加入0.12mmol的PyBOP。反應液在室溫繼續攪拌3小時。將150ml乙醚加入到反應混合物中得到油狀粘稠物，油狀粘稠物用30ml乙醚分兩次震蕩洗滌后再用15ml丙酮處理便得到白色固體。用反相HPLC純化。收率70％。
實施例14化合物13的合成同實施例13，只是用H2N-(D-glucosamine)代替H2N-(CH2)3N(CH3)2。
實施例15
化合物14的合成 將0.10mmol的NCPC4850，1.0mmol的4-苯基芐胺以及0.12mmol的甲醛水溶液溶解到10ml 1∶1的乙腈/水，用1M的NaOH調pH到9.5～10，反應液在室溫下攪拌8小時，用1M的HCl調pH到4～5后倒入120ml丙酮沉淀。沉淀物用反相HPLC純化。收率65％。
實施例16化合物15的合成 將0.10mmol的化合物7，1.0mmol的H2N-(CH2)3N(CH3)2以及0.12mmol的甲醛水溶液溶解到10ml 1∶1的乙腈/水，用1M的NaOH調pH到9.5～10，反應液在室溫下攪拌8小時，用1M的HCl調pH到4～5后倒入120ml丙酮沉淀。沉淀物用反相HPLC純化。收率50％。
實施例17化合物16的合成與實施例16類似，只是用(N-CH3-D-glucosamine)NH2代替H2N-(CH2)3N(CH3)2。
實施例18化合物17的合成 將5.0克萬古霉素鹽酸鹽溶解到20ml TFA，于50℃下攪拌反應2小時。反應液真空濃縮后溶于20ml丙酮，倒入200ml氯仿沉淀。沉淀用20ml氯仿分兩次洗滌后真空干燥。粗品用反相HPLC純化得化合物NCPC4851純品350mg。
化合物17的合成將0.10mmol的NCPC4851，0.15mmol的4-氯聯苯甲醛溶解到5ml的DMF/MeOH(1∶1)。反應液在65℃下攪拌48小時后加入0.20mmol的NaCNBH3，再攪拌24小時，反應液冷卻后倒入75ml丙酮沉淀。沉淀用10ml丙酮分兩次洗滌，真空下干燥。粗品用反相HPLC純化。
實施例19-33化合物18-31的合成化合物18-31的合成分別與化合物2-16的合成相同，只是用NCPC4851代替NCPC4850。
實施例34將2ml注射用水和0.6g的本發明化合物按常規方法制成注射劑。
抗菌活性的研究抗菌活性的測定最小抑菌濃度(MIC)的測定由微生物12、13、14、15河北醫科大學第二醫院提供，微生物1、2、3、4、7、8、9、10、11由河北省人民醫院提供，微生物5、6、16、17由美國CHIRON公司提供，微生物18、19由國家生物制品檢定所提供。基于對替考拉寧的敏感性，萬古霉素耐藥腸球菌的表型為Van A或Van B。
在NCCLS準則下在微量稀釋液體培養法(microdilution brothprocedure)中測定最小抑菌濃度(MIC)。通常，將化合物連續稀釋在96孔微量滴定平板中的Mueller-Hinton培養液內。基于在600nm的吸光度，稀釋過夜培養的菌株，各孔中的最終濃度是5×105cfu/mL。將平板重新置于35℃的培養箱。次日(或在腸球菌菌株的情況中是24小時后)，通過目測的平板測定MIC。在初始篩選中常規試驗的菌株包括甲氧苯青霉素敏感的金黃色葡萄球菌(MSSA)、耐甲氧苯青霉素的金黃色葡萄球菌(MRSA)、甲氧苯青霉素敏感的表皮葡萄球菌(MSSE)、耐甲氧苯青霉素的表皮葡萄球菌(MRSE)、萬古霉素敏感的屎腸球菌(VSE Fm)、萬古霉素敏感的糞腸球菌(VSE Fs)、耐萬古霉素也耐提考拉寧的屎腸球菌(VRE Fm Van A)、耐萬古霉素但對提考拉寧敏感的屎腸球菌(VRE Fm Van B)、耐萬古霉素也耐提考拉寧的糞腸球菌(VRE Fs Van A)、耐萬古霉素但對的考拉寧敏感的糞腸球菌(VREFs Van B)。
化合物的體外活性MIC(μg/ml)

權利要求
1.通式(I)的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥 其中R1是H或-CH2-R5，其中R5是C1-C20飽和或不飽和的烴性質的脂族基團，例如C1-C20烷基(alkyl)，C2-C20鏈烯基(alkenyl)，或是C3-C20飽和或不飽和環脂族基團(cycloaliphatic group)，例如C3-C20環烷基(cycloalkyl)或C3-C20環烯基(cycloalkenyl)，或是C5-C20雜環基團(heterocycle)(雜環含有選自N、O或S中的一個或多個雜原子)，或是C6-C30芳基，烷芳基或芳烷基(aryl，alkaryl，aralkylgroup)，該芳基、烷芳基或芳烷基可以含有一個或多個芳環或稠環，上述所有基團是未取代的，或被例如鹵素，芳基，OH，氨基等取代，其碳鏈任選可以插入選自O、N和S中的一個或多個雜原子(thechains of all group described above may be interupted by oneor more hetero atom)；R2是OH，或-NH-R8，其中其中R8是烷基，鏈烯基，環烷基，環烯基，芳烷基，烷芳基和雜環基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R3是-H或-CN2-NH-R7，其中R7是烷基，鏈烯基，環烷基，環烯基，芳烷基，烷芳基和雜環基，這些基團可以是取代或未取代的，其碳鏈任選可以插入N、O或S中的一個或多個；R4是氫或甲基。
2.根據權利要求1的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥，其中R1是-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-CH2-4-(Ph-O)-Ph，-CH2-4-Ph-Ph，-CH2CH2CH2-Ph，-CH2-4-(Butyl-O)-Ph，-CH2-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-S-(CH2)9-CH3，-CH2CH2-NH-CH2-4-(4-Cl-Ph)-Ph，-H，-CH2-(CH2)9-CH3；R2是OH，-NH(CH2)3N(CH3)2，-N-(D-glucosamine)；R3是-H，-CH2-NH-CH2-4-Ph-Ph，-CH2-NH(CH2)3N(CH3)2；-CH2-N-(N-CH2-D-glucosamine)；和R4是-H或-CH3。
3.權利要求1的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物的制備方法，包括以下步驟A、將去甲萬古霉素或萬古霉素 在三氟乙酸的存在下在升溫(例如40-120℃)下反應，獲得下式的葡萄糖殘基被除去的化合物NCPC4850(R4是H)或NCPC4851(R4是CH3) 其中R4是H或CH3。
4.根據權利要求3的制備方法，進一步包括B、NCPC4850或NCPC4851進行氨基的保護獲得下式的化合物 其中Pro是保護基，上式化合物與醛R5CHO反應，獲得以下化合物 再脫保護，獲得下式的化合物 其中R5如權利要求1所定義，Pro是保護基；或/和C、以上步驟A或B的產物 其中R4如以上所定義，R1為H或-CH2-R5，R5如權利要求1所定義，與甲醛和胺R7NH2在堿性條件下反應，獲得下式的化合物 其中R7如權利要求1所定義；或D、以上步驟A或B的產物 其中R1為H或-CH2-R5，R5如權利要求1所定義，與R8NH2反應，形成以下結構式的化合物 其中R8如以上所定義。
5.權利要求1或2的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥在制備抗嚴重的G+菌感染的藥物中的用途。
6.權利要求1或2的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥在制備治療或/和輔助治療心內膜炎、腦膜炎、肺炎、敗血癥、急慢性骨髓炎、燒傷感染、皮膚或軟組織化膿性感染的藥物中的用途。
7.含有藥學有效量的權利要求1或2的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥的藥物組合物。
全文摘要
本發明涉及通式(I)的萬古霉素或去甲萬古霉素的衍生物或其可藥用鹽、溶劑化物、立體異構體或前藥，其中R
文檔編號A61P19/00GK1827638SQ200510052470
公開日2006年9月6日 申請日期2005年2月28日 優先權日2005年2月28日
發明者D·楚, Z·-J·倪, J·J·-X·王, Y·雷, Y·白 申請人:華北制藥集團有限責任公司, 凱榮公司