專利名稱：路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法及其用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及總鞣質(zhì)提取物的醫(yī)藥技術。
背景技術：
隨著全球經(jīng)濟的快速發(fā)展以及人口老齡化問題的不斷加重，現(xiàn)代人們的生活壓力越來越大，抑郁癥和帕金森病的患者越來越多。因此治療抑郁癥和帕金森病藥物(單胺氧化酶抑制劑類藥物)的研究引起了人們的廣泛興趣。路路通是金縷梅科(Hamanmeidaceae)植物楓香樹(LiquidambarforraosanaHance)的干燥成熟果實，始載于《本草綱目拾遺》。路路通為常用中藥，主要用于治療風濕痹痛，肢體麻木，濕疹，乳少經(jīng)閉，脘腹疼痛(國家中醫(yī)藥管理局中華本草編委會，中華本 草.精選本.上冊.上海上海科學技術出版社，1998. 719.)。但到目前為止，尚未見路路通總鞣質(zhì)提取物對單胺氧化酶抑制的活性報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法及其用途。路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法，其步驟為
(1)首先將路路通藥材粉碎成粉末狀；
(2)第一次按照藥材質(zhì)量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取l_2h;
(3)第二次按照藥材質(zhì)量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取Ih；
(3)將上述兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾；
(4)濾液用2M的鹽酸調(diào)pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質(zhì)提取物。路路通總鞣質(zhì)提取物的用途，用于制備抗單胺氧化酶藥物。本發(fā)明采用酶標法研究了路路通總鞣質(zhì)提取物的抗單胺氧化酶活性，并且研究了路路通總鞣質(zhì)提取物對絕望行為所致抑郁小鼠的應激行為能力(張均田.現(xiàn)代藥理實驗方法(上冊)[M].北京醫(yī)科大學，中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，1998. 1061)和6-0HDA所致帕金森大鼠的行為能力(吳凌波等.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18(3) :251-252)
的影響。結(jié)果顯示，路路通總鞣質(zhì)提取物是良好的天然單胺氧化酶抑制劑；路路通總鞣質(zhì)提取物能明顯改善抑郁小鼠和帕金森大鼠的行為能力。路路通總鞣質(zhì)提取物與藥學上可以接受的載體或其它賦型劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成經(jīng)口服給藥的內(nèi)用型和非口服給藥的注射劑或其它劑型，可以在臨床上用于開發(fā)抗單胺氧化酶活性藥物和治療抑郁癥，帕金森病等。
具體實施例方式路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法，其步驟為(1)首先將路路通藥材粉碎成粉末狀；
(2)第一次按照藥材質(zhì)量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取l_2h;
(3)第二次按照藥材質(zhì)量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取Ih；
(3)將上述兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾；
(4)濾液用2M的鹽酸調(diào)pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質(zhì)提取物。路路通總鞣質(zhì)提取物的用途，用于制備抗單胺氧化酶藥物。本發(fā)明提供的具體技術方案·
I、路路通總鞣質(zhì)的制備
通常提取路路通總鞣質(zhì)采用“堿提酸沉”法，但又有水提和醇提兩種工藝。為了兼顧得率和純度，本發(fā)明采用了醇提取的方法。具體的工藝路線如下首先將路路通藥材粉碎成粉末狀。第一次采用藥材質(zhì)量5-8倍的比例加入95%乙醇熱回流提取l_2h;第二次按照藥材質(zhì)量5-8倍的比例加入95%乙醇熱回流提取lh。兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾。濾液用2M的鹽酸調(diào)PH值到1-2，然后用有機溶劑(氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙醚中的一種或幾種混合)萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質(zhì)提取物。2、路路通總鞣質(zhì)提取物的抗抑郁和抗帕金森體內(nèi)、外藥理學實驗。近年來的研究表明，對單胺氧化酶有抑制作用的藥物，可顯著提高抑郁癥和帕金森病人腦內(nèi)的單胺氧化酶水平，發(fā)揮預防和治療抑郁癥和帕金森的作用。因此本發(fā)明首先采用酶標法研究了路路通總鞣質(zhì)提取物在體外對單胺氧化酶的抑制活性，結(jié)果表明，路路通總鞣質(zhì)提取物具有良好單胺氧化酶抑制活性。為了進一步證實路路通總鞣質(zhì)提取物的抗抑郁和抗帕金森作用，本發(fā)明研究了路路通總鞣質(zhì)提取物對絕望行為所致抑郁小鼠的應激行為能力的影響(張均田.現(xiàn)代藥理實驗方法(上冊KM].北京醫(yī)科大學，中國協(xié)和醫(yī)科大學聯(lián)合出版社，1998. 1061)和對6-0HDA所致帕金森大鼠的行為能力的影響(吳凌波等.現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2009，18(3):251-252)。結(jié)果顯示，路路通總鞣質(zhì)提取物能明顯改善抑郁小鼠和帕金森大鼠的行為能力。以上結(jié)果提示，路路通總鞣質(zhì)提取物可以用于制備預防、治療抑郁癥和帕金森病的藥物。下面結(jié)合具體實例進一步對本發(fā)明進行描述，但不限制本發(fā)明。實施例I路路通總鞣質(zhì)提取物的制備
稱取路路通粉末Ikg置于圓底燒瓶中，加入95%乙醇7L熱回流提取2h，抽濾得濾液；再加入95%乙醇7L熱回流提取lh，再抽濾，得濾液。兩次的濾液合并濃縮至干，加IL蒸餾水溶解，用IM氫氧化鈉水溶液或濃氨水調(diào)pH至9-11,靜置12-18h后抽濾,濾液用2M鹽酸調(diào)pH至1-2。每次加入2L乙酸乙酯萃取，共萃取3次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞋質(zhì)65g。實施例2酶標法測定路路通總鞣質(zhì)提取物的抗單胺氧化酶活性。利用酶標法測定了路路通總鞣質(zhì)提取物的抑制率，磷酸異丙煙肼為陽性對照藥。具體實驗過程如下
(I)單胺氧化酶的制備將I只雌性wistar大鼠脫頸椎處死，取出其肝臟，將肝臟剪碎，用磷酸緩沖液(pH=7. 6)洗滌數(shù)次，待洗滌干凈后，加入20ml, 0. 3M蔗糖緩沖液進行勻漿，充分勻漿后，各取IOml倒入兩個50ml離心管中。用20ml，0. 3M蔗糖緩沖液洗滌勻漿器后，各取IOml倒入前面所述的離心管中。經(jīng)托盤天平配平后，在_4°C下，1000\8離心10!^11。吸取上清液，將上清液配平，1200 Xg離心15min，吸取上清液，將上清液配平，IOOOOXg離心30min，棄去上清液，沉淀加4ml的磷酸緩沖液混勻，得到Wistar大鼠肝臟線粒體濃縮物，即為實驗用單胺氧化酶。(2)樣品對單胺氧化酶抑制活性的測定
運用96孔酶標板測定樣品對單胺氧化酶的抑制活性。在96孔酶標板中依次加入40 u I單胺氧化酶(Wistar大鼠肝臟線粒體)，40iU樣品溶液，40 Ul磷酸異丙煙肼溶液(陽性藥)，37°C孵育20min后，加120yl底物(2. 5mM的酪胺)及40 yl顯色液(0. 5mM的4-氨基安替吡啉，ImM的香草酸，4U/ml的辣根過氧化酶的混合物)。37°C孵育60min后，用酶標儀在490nm下測定各孔OD值。其中，空白組(包含單胺氧化酶40 yl，磷酸緩沖液40 yl，底物120iU，顯色劑40 yl)，空白本底組，樣品本底組和磷酸異丙煙肼本底組用120 ill磷 酸緩沖液(PH=7. 6)代替120 Ul底物。每組實驗重復三次，并以下面公式計算樣品對單胺氧化酶的抑制率。根據(jù)量效關系和直線回歸法可以計算出樣品對單胺氧化酶的半數(shù)抑制濃度值(IC50)結(jié)果表明路路通總鞣質(zhì)對單胺氧化酶具有明顯的抑制活性。其半數(shù)抑制濃度值(IC50)為5. 9ug/ml。實驗數(shù)據(jù)見表I。表I分光光度法測試結(jié)果
權利要求
1.路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法，其步驟為 (1)首先將路路通藥材粉碎成粉末狀； (2)第一次按照藥材質(zhì)量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取l_2h; (3)第二次按照藥材質(zhì)量的5-8倍的比例，向藥材中加入95%乙醇熱回流提取Ih； (3)將上述兩次的提取液合并濃縮至干，加適量的水溶解，用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值到9-11，靜置12-18h后抽濾； (4)濾液用2M的鹽酸調(diào)pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取2-4次，萃取液合并濃縮至干，得到路路通總鞣質(zhì)提取物。
2.根據(jù)權利要求I所述的路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法，其特征在于有機溶劑為氯仿，或者二氯甲烷，或者乙酸乙酯，或者乙醚，或者上述幾種的混合。
3.路路通總鞣質(zhì)提取物的用途，用于制備抗單胺氧化酶藥物。
4.根據(jù)權利要求3所述的路路通總鞣質(zhì)提取物的用途，其特征在于單胺氧化酶抑制劑是指用于抑郁癥，帕金森癥的藥物。
5.根據(jù)權利要求3所述的路路通總鞣質(zhì)提取物的用途，其特征在于與藥學上可以接受的載體，或其它賦型劑相結(jié)合，按照常規(guī)方法制成經(jīng)口服給藥的內(nèi)用型劑型，或非口服給藥的注射劑，或其它劑型。
全文摘要
路路通總鞣質(zhì)提取物的制備方法及其用途，其步驟為(1)路路通用95%乙醇回流提取得到乙醇提取物；(2)乙醇提取物用水溶解，然后用濃氨水或氫氧化鈉水溶液調(diào)pH值到9-11，過濾；(3)過濾的濾液用濃鹽酸調(diào)pH值到1-2，然后用有機溶劑萃取，得到上述路路通的總鞣質(zhì)提取物；路路通總鞣質(zhì)提取物在制備抗單胺氧化酶藥物中的應用。
文檔編號A61P25/24GK102743419SQ20121017593
公開日2012年10月24日 申請日期2012年5月31日 優(yōu)先權日2012年5月31日
發(fā)明者楊中鐸, 梁冀北 申請人:蘭州理工大學