專利名稱：一種增強免疫力的制劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種增強免疫力的制劑及其制備方法，屬于生物保健品技術領域。
背景技術：
免疫力是指人體自身的防御機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物(病毒、細菌等)，并處理自身衰老、損傷、死亡、變性的細胞以及識別和處理體內突變細胞和病毒感染細胞的能力。現代免疫學認為，免疫力是人體識別和排除“異己”的生理反應。人體內執行這一功能的是免疫系統。長期以來，人們生活在一個既適合生存又充滿危險的環境中，人類能夠存續，是因為獲得了非凡的免疫力。所以說免疫力是生物進化過程的產物。但隨著社會的發展，人們的生活和工作節奏不斷加快，壓力也越來越大，加上生活環境的污染，導致身體機能下降，免疫力低下，極易招致細菌、病毒、真菌等感染。因此免疫力低下最直接的表現就是容易生病，因經常患病，又加重了機體的消耗，表現為體質虛弱、營養不良、精神萎靡、疲乏無力、食欲降低、睡眠障礙等，生病、打針吃藥便成了家常便飯，且每次生病都要很長時間才能恢復，而且常常反復發作。長此以往會導致身體和智力發育不良，還易誘發重大疾病。目前，市場上存在眾多的增強免疫力的保健品，但大多數都效果不明顯或見效比較遲緩，甚至因人體差異而無保健效果，滿足不了眾多消費者的需求。

發明內容
本發明的目的在于提供一種見效快且效果明顯的能增強人體免疫力的制劑及其制備方法，以滿足廣大消費者的需求。本發明通 過下列技術方案實現:一種增強免疫力的制劑，其特征在于由下列質量份的組分組成:
鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份，
黃芪提取物I 1.5份，山茱萸提取物 0.2 0.5份，
丹參提取物0.1 0.4份，蜂蜜98 105份。所述鐵皮石斛粉是將鐵皮石斛粉碎至細度為1200目的超微粉。所述三七粉是將三七粉碎至細度為1200目的超微粉。所述黃芪提取物、山茱萸提取物、丹參提取物是市購產品，或者經過下列常規方法提取:
A、分別將所述黃芪、山茱萸、丹參各原料藥粉碎后，水煎提取2 3次，每次用水量為藥材總質量的8 12倍，每次水煎提取保持微沸0.5 1.5小時，合并各次提取液，過濾分離出濾液和濾渣；
B、將A步驟的濾液濃縮至Ig藥材/ml，冷卻、靜置至室溫，攪拌下緩慢加入乙醇至乙醇終濃度為60wt%，靜置至沉淀完全，抽濾分離出濾液和濾渣；
C、將B步驟的濾渣用質量濃度為60%的乙醇洗滌，直至洗滌液無色，將洗滌液并入B步驟的濾液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分別得黃芪、山茱萸、丹參的提取物一干浸膏粉。本發明的另一目的在于提供一種增強免疫力的制劑的制備方法，其特征在于經過下列各步驟:
(I)按下列質量份備料:
鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份，
黃芪提取物I 1.5份，山茱萸提取物 0.2 0.5份，
丹參提取物0.1 0.4份，蜂蜜98 105份。(2)將步驟(I)的細度為1200目的鐵皮石斛超微粉、細度為1200目的三七超微粉，與黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，即得到增強免疫力的制劑。將本發明提供的上述制劑通過常規成型工藝制備成具有增強免疫力作用的膠囊齊U、顆粒劑、片劑、散劑或丸藥等口服制劑。其中，鐵皮石斛:性味:味甘，性微寒；具有生津養胃、滋陰清熱、潤肺益腎、明目強腰之功效。三七:性味:味甘、微 苦、性溫；歸肝經、胃經、心經、肺經、大腸經；有止血、散血、定痛等功能。黃芪:性味:甘，性微溫；歸肝、脾、肺、腎經；有益氣固表、斂汗固脫、托瘡生肌、利水消腫之功效。山茱萸:性味:酸、澀，微溫；歸肝、腎經；用于補益肝腎，收斂固澀、固精縮尿止帶止崩、止汗，此外還有生津止渴的作用。丹參:性味:苦，微寒；歸心、肝經；用于活血調經，祛瘀止痛，涼血消癰，清心除煩，養血安神。蜂蜜:性味:甘、性平；歸脾、胃、肺、大腸經；用于調補脾胃、緩急止痛、潤肺止咳、潤腸通便、潤膚生肌、解毒、主脘腹虛痛、肺燥咳嗽、腸燥便秘、目赤、口瘡、潰瘍不斂、風疹瘙癢、水火燙傷、手足裂。本發明提供的藥物的藥理作用:鐵皮石斛具有增強免疫功能、促進消化、護肝利膽、抗風濕、降低血糖血脂、抗腫瘤、保護視力、滋養肌膚、抗衰老之功。三七具有良好的止血功效、顯著的造血功能；能加強和改善冠脈微循環，擴張血管的作用；有較強的鎮痛作用，具有抗疲勞、提高學習和記憶能力的作用；抗炎癥作用；具有免疫調節劑的作用，能使過高或過低的免疫反應恢復到正常，但不干擾機體正常的免疫反應；抗腫瘤作用；抗衰老、抗氧化作用；降低血脂及膽固醇作用。黃芪有增強機體免疫功能、保肝、利尿、抗衰老、抗應激、降壓和較廣泛的抗菌作用；能消除實驗性腎炎蛋白尿，增強心肌收縮力，調節血糖含量；黃芪不僅能擴張冠狀動脈，改善心肌供血，提高免疫功能，而且能夠延緩細胞衰老的進程。山茱萸用于肝腎不足，頭暈目眩，耳鳴，腰酸；能固經止血，可用治婦女體虛、月經過多等癥；有抗糖尿病、抗菌的作用，對失血性休克、心功能及血液動力學的作用明顯。丹參具有活血散淤、消腫止血、消炎止痛、調經止痛、擴張冠狀動脈、改善心肌缺血狀況、降低血壓、安神靜心、降血糖和抗菌等功效，對月經不調，經閉痛經，癥瘕積聚，胸腹刺痛，熱痹疼痛，瘡瘍腫痛，心煩不眠，肝脾腫大，心絞痛等病癥有一定的療效；丹參還具有抗血小板凝聚、降低血液黏度及調節內外凝血系統的功能。蜂蜜對創面有收斂、營養和促進愈合作用，有潤滑性祛痰和輕瀉作用。本發明的各成分均為國家藥材公司市售產品。本發明具備的優點和效果:該制劑適宜于免疫力低下者，具有增強免疫力的功效。能促進抗體生成細胞增殖，提高血清溶血素水平，促進腹腔巨噬細胞的吞噬功能，對體重增長、胸腺/體重比值、脾臟/體重比值及脾淋巴細胞增殖轉化作用、單核-巨噬細胞碳廓清和NK細胞活性無明顯影響。具有見效快、效果明顯、安全性高、成本低且操作簡便等優點。
具體實施例方式下面結合實施例對本發明做進一步說明。實施例1
(O按下列質量份的組分進行備料:
細度為1200目的鐵皮石斛超微粉 12份 細度為1200目的三七超微粉 6.9份 市購的黃芪提取物1.356份
市購的山茱萸提取物0.3份
市購的丹參提取物0.228份
蜂蜜101.76份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規成型工藝制備成具有增強免疫力作用的散劑。實施例2
(I)按下列質量份的組分進行備
料:
細度為1200目的鐵皮石斛超微粉10份細度為1200目的三七超·微粉4份
市購的黃芪提取物1.5份
市購的山茱萸提取物0.5份
市購的丹參提取物0.4份
蜂蜜100份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規成型工藝制備成具有增強免疫力作用的膠囊劑。實施例3
(O按下列質量份的組分進行備料:
細度為1200目的鐵皮石斛超微粉15份 細度為1200目的三七超微粉 10份 市購的黃芪提取物1.5份
市購的山茱萸提取物0.5份
市購的丹參提取物0.4份
蜂蜜105份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規成型工藝制備成具有增強免疫力作用的片劑；其中:
黃芪提取物、山茱萸提取物、丹參提取物經過下列常規方法提取:
A、分別將所述黃芪、山茱萸、丹參各原料藥粉碎后，水煎提取2次，每次用水量為藥材總質量的12倍，每次水煎提取保持微沸1.5小時，合并各次提取液，過濾分離出濾液和濾渣；
B、將A步驟的濾液濃縮至Ig藥材/ml，冷卻、靜置至室溫，攪拌下緩慢加入乙醇至乙醇終濃度為60wt%，靜置至沉淀完全，抽濾分離出濾液和濾渣；
C、將B步驟的濾渣用質量濃度為60%的乙醇洗滌，直至洗滌液無色，將洗滌液并入B步驟的濾液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分別得黃芪、山茱萸、丹參的提取物——干浸膏粉。實施例4
(O按下列質量份的組分進行備料: 細度為1200目的鐵皮石斛超微粉13份細度為1200目的三七超微粉8份
市購的黃芪提取物1.0份
市購的山茱萸提取物0.4份
市購的丹參提取物0.3份
蜂蜜101份；
(2 )將步驟(I)所備組分中的鐵皮石斛超微粉、三七超微粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，按常規成型工藝制備成具有增強免疫力作用的丸藥；其中:
黃芪提取物、山茱萸提取物、丹參提取物經過下列常規方法提取:
A、分別將所述黃芪、山茱萸、丹參各原料藥粉碎后，水煎提取3次，每次用水量為藥材總質量的8倍，每次水煎提取保持微沸0.5小時，合并各次提取液，過濾分離出濾液和濾渣；
B、將A步驟的濾液濃縮至Ig藥材/ml，冷卻、靜置至室溫，攪拌下緩慢加入乙醇至乙醇終濃度為60wt%，靜置至沉淀完全，抽濾分離出濾液和濾渣；
C、將B步驟的濾渣用質量濃度為60%的乙醇洗滌，直至洗滌液無色，將洗滌液并入B步驟的濾液中，回收乙醇，干燥，粉碎，分別得黃芪、山茱萸、丹參的提取物——干浸膏粉。為了清楚說明本發明的效果，下面將增強免疫力功能實驗簡介如下:
I材料和方法
1.1樣品:實施例1的增強免疫力的散劑，規格:120克/瓶，置陰涼干燥處保存。人口服推薦用量為每人(成人)每日2次，每次3克，成人體重按60kg計算，折合劑量為100 mg/kg BW。1.2實驗動物與分組:SPF級健康昆明種雄性小鼠240只，體重為18 22克，由廣西醫科大學實驗動物中心繁殖，實驗動物生產許可證號=SCXK (桂)2009-0002，實驗動物質量合格證號:0006030。每40只小鼠為一組,共6組。免疫I組,進行ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗；免疫II組，進行遲發型變態反應實驗；免疫III組，進行臟/體比值測定，血清溶血素測定和抗體生成細胞數測定；免疫IV VI組，分別進行碳廓清實驗、腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗和NK細胞活性測定。1.3實驗動物房環境條件:動物實驗室為屏障系統，使用許可證號:SYXK(桂)2011-0005。動物實驗室溫度:22 25°C，相對濕度:55 70%。1.4劑量選擇與受試物給予方式:根據人口服推薦用量，設樣品低、中、高劑量組分別為500、1000、2000 mg/kg BW (分別相當于人體推薦用量的5、10、20倍)，設一個陰性對照組，每組10只動物。分別稱取樣品2.5,5.0、10.0g，各加純水至IOOmL,混勻，配成25、50、100mg/mL的溶液，按0.2mL/10g Bff的體積給予相應劑量組動物灌胃，陰性對照組予以等體
積的純水，每天灌胃一次，連續灌胃30天。1.5主要儀器與試劑:動物天平、電子分析天平、離心機、潔凈工作臺、二氧化碳培養箱、恒溫水浴箱、顯微鏡、半自動生化分析儀、酶標儀等。無菌手術器械、微量注射器、細胞計數器、24孔和96孔平底細胞培養板、96孔U型細胞培養板、玻璃平皿、紗布、載玻片、試管、200目篩網、計時器、血色素吸管等。RPMI1640培養液、小牛血清、2-ME、青霉素、鏈霉素、ConA、lmol/L的HCL溶液、異丙醇、MTT、Hank，s 液(pH 7.2 7.4)、PBS 緩沖液(Ph7.2 7.4)、臺酚藍、DNFB、丙酮、硫化鋇、補體(豚鼠血清)、SA緩沖液、瓊脂糖、綿羊紅細胞(SRBC)、生理鹽水、印度墨汁、0.1 %的碳酸鈉、雞紅細胞、甲醇、Gimsa染液、YAC-1細胞、乳酸鋰、硝基氯化四氮唑、吩嗪二甲酯硫酸鹽、氧化型輔酶1、0.2mol/L的Tris-HCL緩沖液、1%冰醋酸、1%的NP40等。1.6實驗方法
1.6.1臟器/體重比值測定:稱重后處死小鼠，取出胸腺和脾臟，在電子分析天平上稱重，計算臟/體比值。1.6.2ConA誘導的小鼠脾淋巴細胞轉化實驗(MTT法)
無菌取脾，置于盛有適量無菌Hank’ s液的平皿中，制成細胞懸液，經200目篩網過濾。用Hank’s液洗2次，每次離心IOmin (1000 r/min)。然后將細胞懸浮于ImL完全培養液中，計數活細胞數，用RPMI1640培養液調整細胞濃 度為3 X 106個/mL。再將細胞懸液分兩孔加入24孔培養板中，每孔ImL,在其中一孔加75PL ConA液(相當于7.5Pg/mL)，另一孔作為對照，置5 %C02，37°C二氧化碳孵箱中培養72h。培養結束前4h，每孔輕輕吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培養液，同時加入MTT (5 mg/mL) 50μ /孔，繼續培養4h。培養結束后，每孔加入ImL酸性異丙醇，吹打混勻，使紫色結晶完全溶解。然后分裝到96孔培養板中，每個孔作3個平行孔，用酶標儀，以570nm波長測定光密度值。淋巴細胞的增殖能力用加ConA孔的光密度值減去不加ConA孔的光密度值表示。1.6.3 二硝基氟苯誘導的小鼠DTH實驗(耳腫脹法)
實驗結束前5天用硫化鋇將小鼠腹部皮膚脫毛約3cmX 3cm范圍，用50μ DNFB溶液均勻涂抹致敏，5天后將IOPL DNFB均勻涂抹于小鼠右耳兩面進行攻擊，24小時后頸椎脫臼處死小鼠，剪下左右耳殼，用打孔器取下8_直徑的耳片、稱重，以左右耳重量之差值表示DTH的程度。1.6.4抗體生成細胞檢測(Jerne改良玻片法)
取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心10min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2%(v/v)的細胞懸液，每鼠腹腔注射0.2mL。將免疫后5天的小鼠處死，取脾臟置盛有Hank’ s液的平皿內，輕輕磨碎脾臟,制成細胞懸液,經200目篩網過濾,離心IOmin(2000 r/min)，用Hank’s液洗滌2遍，最后將細胞懸浮在8mL Hank’s液中。將表層培養基(Ig瓊脂糖加雙蒸水至IOOmL)加熱溶解后，放45 50°C水浴保溫，與等量Ph7.2 7.4、2倍濃度的Hank’ s液混合,分裝小試管,每管0.5mL,再向管內加入50PL10%SRBC(v/v,用SA緩沖液配制)、25PL脾細胞懸液，迅速混勻后傾倒于已刷瓊脂糖薄層的玻片上，做平行片，待瓊脂凝固后，將玻片平扣放在玻片架上，放入二氧化碳培養箱中孵育1.5h，用SA緩沖液稀釋的補體(1:8)加入玻片架凹槽內，繼續孵育1.5h，計數溶血空斑數。用空斑數/IO6脾細胞表示抗體生成細胞數。1.6.5血清溶血素的測定(血凝法)
取脫纖維的羊血，用生理鹽水洗滌3次，每次離心10min(2000r/min)，用生理鹽水將壓積SRBC配成2%(v/v)的細胞懸液，每鼠腹腔注射0.2mL。免疫5天后，摘除小鼠的眼球，取血于離心管內，放置約lh，2000r/min離心lOmin，分離、收集血清。用生理鹽水將血清倍比稀釋，將不同稀釋度的血清分別置于微量血凝板內，每孔100 μ L，再加入IOOyL0.5% (ν/ν)的SRBC懸液，混勻，裝入濕潤的平盤內加蓋，于37°C溫箱孵育3h，觀察血球凝集程度。按下式計算抗體積數:
抗體積數=(SJ2S2 +3Ss......nSn)
式中1、2、3……η為對倍稀釋的指數，S為凝集程度的級別。1.6.6小鼠碳廓清實驗
經尾靜脈給小鼠注射用生理鹽水稀釋4倍的印度墨汁，每IOg體重注射0.1 mL，墨汁注入后立即計時,于注入墨汁后第2、10min,分別從內目此靜脈叢取血20yL,加入到2 mL 0.1%Na2CO3溶液中，搖勻。以Na2CO3溶液作空白對照，以600 nm波長測光密度值(OD)。將小鼠處死，取肝、脾臟，稱重。按下式計算吞噬指數a。a=K1/3·X體重/(肝重+脾重)
式中 K=GgOD1 — IgOD2)/ (t2-t!)。1.6.7小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗(半體內法)
給小鼠腹腔注射20%(v/v，用生理鹽水配制)的壓積雞紅細胞懸液，每鼠lmL，間隔30min，頸椎脫臼處死小鼠，正中剪開腹壁皮膚，腹腔注入2mL生理鹽水，轉動鼠板IminJl出腹腔洗液lmL，平均滴于2片載玻片上，放入墊有濕紗布的搪瓷盒內，置37°C孵箱溫育30min。孵畢，取出玻片于生理鹽水中漂洗后晾干，用甲醇:丙酮(1:1)溶液固定，4%(v/v)Giemsa-磷酸緩沖液染色，再用純水漂洗、晾干。油鏡下每片計數100個巨噬細胞，按下式計算吞噬率和吞噬指數。吞噬率(％ )=吞噬雞紅細胞的巨噬細胞數/計數的巨噬細胞數X 100%
吞噬指數=被吞噬的雞紅細胞總數/計數的巨噬細胞數
1.6.8NK細胞活性測定(LDH測定法)
將小鼠頸椎脫白處死，無菌取脾，制成脾細胞懸液，用Hank’s液洗2次，每次離心IOmin(1000r/min)。棄上清，將細胞漿彈起，加入0.5mL滅菌純水20秒，裂解紅細胞后再加入
0.5mL 2 倍 Hank，s 液及 8mL Hank，s 液，1000r/min 離心 IOmin,用 ImL 含 10% 小牛血清的RPMI1640完全培養液重懸，用I %冰醋酸稀釋后計數(活細胞數應在95%以上)，用臺酚蘭染色計數活細胞數，最后用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為2X107個/mL，此為效應細胞。取傳代后24h生長良好的YAC-1細胞，用RPMI1640完全培養液調整細胞濃度為4X IO5個/mL，此為靶細胞。取靶細胞和效應細胞各100 μ L(效靶比50:1)，加入U型96孔培養板中；靶細胞自然釋放孔加靶細胞和培養液各100 μ L，靶細胞最大釋放孔加靶細胞和1%NP40各100 μ L。上述各項各設3個平行孔，置5%C02、37°C二氧化碳孵箱中培養4h。然后將96孔培養板以1500r/min離心5min，每孔吸取上清100 μ L置平底96孔培養板中，同時加入LDH基質液100 μ L，反應8分鐘，每孔加入lmol/L的HCL30 μ L，在酶標儀490nm處測定光密度(OD)值。按下式計算NK細胞活性:
NK細胞活性(%) = (反應孔OD -自然釋放孔OD)/(最大釋放孔OD -自然釋放孔0D)X100%
1.7實驗數據統計:應用SPSS統計軟件進行方差分析統計處理。1.8結果判定:在細胞免疫功能、體液免疫功能、單核-巨噬細胞功能、NK細胞活性四方面任兩個方面結果陽性，可判定該受試樣品具有增強免疫力功能作用。2 結果
2.1樣品對小鼠體重的影響
表I 鐵皮石斛增強免疫力劑的功能實驗小鼠體重(
權利要求
1.一種增強免疫力的制劑，其特征在于由下列質量份的組分組成 鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份， 黃芪提取物I I. 5份，山茱萸提取物 O. 2 O. 5份， 丹參提取物O. I O. 4份，蜂蜜98 105份。
2.根據權利要求I所述的增強免疫力的制劑，其特征在于所述鐵皮石斛粉是將鐵皮石斛粉碎至細度為1200目的超微粉。
3.根據權利要求I所述的增強免疫力的制劑，其特征在于所述三七粉是將三七粉碎至細度為1200目的超微粉。
4.一種增強免疫力的制劑的制備方法，其特征在于經過下列各步驟 (1)按下列質量份備料 鐵皮石斛粉10 15份，三七粉4 10份， 黃芪提取物I I. 5份，山茱萸提取物 O. 2 O. 5份， 丹參提取物O. I O. 4份，蜂蜜98 105份； (2)將步驟(I)的細度為1200目的鐵皮石斛超微粉、細度為1200目的三七超微粉，與黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合，再加入蜂蜜攪拌均勻，即得到增強免疫力的制劑。
5.
根據權利要求4所述的增強免疫力的制劑的制備方法，其特征在于將步驟(2)所得制劑按常規成型工藝制備成具有增強免疫力作用的膠囊劑、顆粒劑、片劑、散劑或丸藥制劑。
全文摘要
本發明提供一種增強免疫力的制劑及其制備方法，由下列質量份的組分組成鐵皮石斛粉10～15份、三七粉4～10份、黃芪提取物1～1.5份、山茱萸提取物0.2～0.5份、丹參提取物0.1～0.4份、蜂蜜98～105份。將鐵皮石斛粉、三七粉、黃芪提取物、山茱萸提取物和丹參提取物混合均勻，再加入蜂蜜攪拌均勻，即得到增強免疫力的制劑。該制劑適宜于免疫力低下者，能增強人體免疫力，具有見效快、效果明顯、安全性高、成本低且操作簡便等優點。
文檔編號A61K35/64GK103251816SQ20131019779
公開日2013年8月21日 申請日期2013年5月25日 優先權日2013年5月25日
發明者許江 申請人:云南云尚生物技術有限公司