專利名稱：一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法
技術領域：
本發明涉及一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑，及其制備方法，屬于動物用疫苗生產領域。
背景技術：
新城疫(Newcastle disease, ND)也稱亞洲雞瘟或偽雞瘟，由新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV)引起的一種禽類急性、高度接觸性、致死性傳染病廣泛流行于世界許多國家，主要特征是呼吸困難，下痢、神經紊亂，黏膜和漿膜出血，嚴重危害世界養禽業，被世界衛生組織(OIE)列為A類傳染病。雞新城疫活疫苗一般是通過把雞ND疫苗毒接種9-11日齡雞胚，經過4-5天的繼續孵化，擴增病毒，然后收取含有大量雞新城疫疫苗毒的尿囊液冷凍干燥而成。其成本相對較小，適合大規模推廣使用。這類疫苗常能有效的刺激機體的免疫系統，全面快速的激發體液免疫和細胞免疫，給易感雞提供更全面的疫苗保護。疫苗毒還可從免疫雞傳給未免疫的雞，使其獲得部分免疫力。其使用方便，可作為群體免疫(飲水免疫、氣霧免疫)使用。但活疫苗的缺點主要表現在運輸、保存、使用時要求的條件較高。而冷凍干燥技術是生物學的一個重要應用技術，常用于生物制品的科研和生產中，以保持菌、毒種的生物學特性，穩定生物原料和半成品的生物活性，延長成品的有效期。凍干保護劑是活疫苗生產中的關鍵技術，對于疫苗的保存、運輸和使用具有很大的影響。國外活疫苗凍干制品在2 8°C的保存期為15個月以上，但保護劑配方是嚴格保密的，在我國動物用疫苗中，活的凍干疫苗占相當大的比例，國內常用的保護劑主要為牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單，對疫苗的保護功能差。如果在2°C 8°C條件下，保存期只有4 6月，多需要在_15°C以下保存。加上國內傳統的生物制品保護劑的研制相對滯后，使成品的長期保存和運輸受限。所以，耐熱凍干保護劑的研究是非常急需的，在20世紀80年代，發達國家就已開始進行耐熱凍干保護劑的研究。我國在耐熱凍干保護劑方面的研究起步較晚，加上中國市場巨大，國外生物制品涌入，市場競爭加劇。為了本國生物制品業的生存和發展，新型有效的耐熱凍干保護劑的研究和應用顯得尤為迫切。羧甲基纖維素鈉鈉(CMC)通常用作膠體和粘結劑，可作為安全的食品添加劑。上世紀七十年代我國開始采用，九十年代開始普遍使用。是當今世界上使用范圍最廣、用量最大的纖維素種類。CMC在食品應用中不僅是良好的乳化穩定劑、增稠劑，而且具有優異的凍結、熔化穩定性，特別是對動、植物油、蛋白質與水溶液的乳化性能極為優異，能使其形成性能穩定的勻質乳狀液。在醫藥工業中可作針劑的乳化穩定劑，片劑的粘結劑和成膜劑。有人經基礎及動物實驗證明CMC是安全可靠的抗癌藥載體。低聚木糖又稱木寡糖由2-7個木糖分子以￠-1, 4糖苷鍵結合而成的功能性聚合糖。酸、熱穩定性好，難發酵，與其他低聚糖相比，低聚木糖的突出特點是穩定性非常好。即使在酸性條件下(PH=2. 5-7)加熱至100°C也基本不分解，根據文獻，低聚木糖中的木三糖、木二糖和木糖都有還原性，木四糖以上沒有。亞硒酸鈉研究表明，硒顯著地影響免疫系統所包含的全部三種調節機制，即細胞免疫、體液免疫和非特異免疫。硒還能促進淋巴細胞產生抗體，使血液免疫球蛋白水平增高或維持正常，因此臨床中給腫瘤患者適量補硒，可有效提高患者機體免疫功能，增強機體防癌和抗癌能力。硒作為谷胱甘肽過氧化酶的成分，具有抗氧化作用；調節免疫、抗腫瘤作用。硒具有抗氧化作用，參與輔酶Qio的合成，保持細胞膜完整性，維持動物肌體的正常生長發育，缺硒可引發多種疾病和癌癥。硒是人體免疫調節營養素，既能激活細胞免疫中淋巴細胞，又能刺激免疫球蛋白及抗體產生。免疫調節作用是通過抗氧化劑輔酶Q、半胱氨酸、維生素E來完成，而這些都要在硒的參與下才能激活，缺硒必然導致免疫力下降，各類疾病相 繼出現。硒不但能維持動物體正常的生長發育，與機體抗氧化機制密切相關，還能提高動物的體液免疫和細胞免疫功能，增強機體對傳染性疾病的抵抗能力，是加強機體免疫系統和抗感染能力必不可少的微量元素之一。補硒能增強體液免疫。給動物補硒能夠提高羊紅細胞抗原，還能提高免疫球蛋白(IgM、IgA)的含量。雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的研究，常現用5%蔗糖脫脂奶為保護劑的凍干疫苗，在2°C 8°C保存僅12個月，加耐熱凍干保護劑疫苗，在2°C 8°C可保存2年后。說明耐熱凍干保護劑比常規的保護劑更能有效地保護疫苗，保存時間更長久。耐熱凍干保護劑的種類和配比是影響疫苗的質量和保存效果的重要因素。凍干保護劑可影響生物制品的質量、效價和穩定性，改變生物制品的生產工藝，提高產品預測能力并增大產品批次間的穩定性。

發明內容
本發明提供了一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑，目的是將疫苗耐熱凍干保護劑與活疫苗混合，解決雞新城疫活疫苗僅不能在2°C 8°C下長期保存和運輸的技術問題。本發明采用的具體技術方案如下
一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑，具體成分包括羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖2 8 %、山梨醇I 3 %、聚乙烯吡咯烷酮I 3 %、谷氨酰胺0. 5 0. 8 %、亞硒酸鈉0. I 0. 5 %，余量為注射用水。上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的配制方法包括如下步驟
1)將羧甲基纖維素鈉充分溶于注射用水作為A液；
2)將低聚木糖、山梨醇充分溶于注射用水，作為B液；
3)聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺、亞硒酸鈉充分溶于注射用水，作為C液；
4)將上述A液、B液和C液，按I:1 :1的體積比配制成耐熱凍干保護劑。上述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的應用，將疫苗凍干保護劑按3 5 : I的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合，然后經分裝后進行冷凍干燥。本發明的保護劑保護的疫苗在2 8 °C保存2 4 3 6個月，仍保持凍干后的外形，病毒含量均超過國家獸醫生物制品規程的標準。凍干前后病毒損失率低，凍干產品耐老化程度高，產品在2 8 °C保存2 4 3 6個月，病毒含量不發生改變，從而解決了雞新城疫活疫苗僅不能在2°C 8°C下長期保存和運輸的技術問題。
具體實施例方式實施例I
雞新城疫活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度5% (本發明所涉及的濃度除有特殊說明外，皆為質量百分比濃度)的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度12%，山梨醇 濃度3 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺，亞硒酸鈉，與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮3 %，谷氨酰胺濃度1.5%，亞硒酸鈉濃度1.5%。4)將A液、B液和C液，按I :1 1的體積比配制成疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按3:1與雞新城疫活疫苗病毒液混合。6)分裝后進行冷凍干燥。7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存34個月。實施例2
雞新城疫活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度3 %的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度6 %，山梨醇濃度9 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺，亞硒酸鈉，與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮3 %，谷氨酰胺濃度1.5%，亞硒酸鈉濃度0.3%。4)將A液、B液和C液，按I :1 1的體積比配制成疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按4:1的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合。6)分裝后進行冷凍干燥。7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存31個月。實施例3
雞新城疫活疫苗耐熱凍干疫苗的制備
I)將羧甲基纖維素鈉與注射用水混合，在98 100°C溫度下加熱I Q 2 Q分鐘，冷卻至室溫，配制成濃度6 %的A液。2)將低聚木糖、山梨醇與注射用水混合，配制成B液，低聚木糖濃度10%，山梨醇濃度3 %。3)將聚乙烯吡咯烷酮、谷氨酰胺，亞硒酸鈉，與去注射用水混合，攪拌混勻，配制成C液，聚乙烯吡咯烷酮3 %，谷氨酰胺濃度2.4%，亞硒酸鈉濃度1.2%。4)將A液、B液和C液，按I :1 1的體積比配制成疫苗凍干保護劑。5)將疫苗凍干保護劑按5:1的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合。
6)分裝后進行冷凍干燥。
7)密封、包裝，2°C 8°C可以保存3 6個月。
權利要求
1.一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑，具體成分包括羧甲基纖維素鈉I 2 %、低聚木糖2 8 %、山梨醇I 3 %、聚乙烯吡咯烷酮I 3 %、谷氨酰胺O . 5 0. 8亞硒酸鈉0. I 0. 5 %，余量為水。
2.權利要求I所述的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的配制方法，包括如下步驟 1)將羧甲基纖維素鈉充分溶于水作為A液； 2)將低聚木糖、山梨醇充分溶于水，作為B液； 3)谷氨酰胺、亞硒酸鈉充分溶于水，作為C液； 4)將上述A液、B液和C液，按I:1 :1配制成耐熱凍干保護劑。
3.權利要求I所述雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑的應用，將保護劑按3 5: I的體積比與雞新城疫活疫苗病毒液混合，然后經分裝后進行冷凍干燥。
全文摘要
本發明涉及一種雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法。本發明的雞新城疫活疫苗耐熱凍干保護劑,具體成分包括羧甲基纖維素鈉１～２％、低聚木糖２～８％、山梨醇１～３％、聚乙烯吡咯烷酮１～３％、谷氨酰胺０.５～０.８％、亞硒酸鈉0.１～0.５％，余量為注射用水。本發明的保護劑解決了雞新城疫活疫苗僅不能在2℃～8℃下長期保存和運輸的技術問題。
文檔編號A61P31/14GK102671209SQ20121017306
公開日2012年9月19日 申請日期2012年5月30日 優先權日2012年5月30日
發明者丁兆鵬, 曲寶涵, 楊芬芳, 苑國春, 郝智慧 申請人:青島農業大學