專利名稱：α-硫酸鋅在制備治療糖尿病并發癥藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，具體涉及α -硫酸鋅在制備治療糖尿病并發癥藥物中的應用。
背景技術：
糖尿病幾乎所有的慢性并發癥都與腎素-血管緊張素系統(RAS)有關，但研究并未發現糖尿病患者血液中腎素或是血管緊張素II有所增高，循環中RAS的組份不但不升高，甚至下降。隨著多組織包括胰腺組織、脂肪組織、心臟組織中表達RAS各成分的發現，人們發現組織細胞局部的RAS在糖尿病并發癥的發生過程中起到重要作用。
高糖引起氧化應激是糖尿病慢性并發癥發病的起始和中心機制。細胞內氧化應激隨著葡萄糖水平增加而升高，同時細胞局部RAS組份的基因表達被激活，研究發現阻斷氧化應激能減少RAS激活水平，阻斷RAS也能減少ROS產生。在局部阻斷RAS作用，不減少RAS相關基因在局部的表達。

發明內容
本發明的目的在于根據高糖與局部RAS的關系，提供一種抗氧化劑在制備糖尿病并發癥藥物中應用。實際上，本發明涉及α -硫辛酸在制備糖尿病并發癥藥物中的應用。涉及α-硫辛酸在制備糖尿病并發癥腎病藥物中的應用。涉及α -硫辛酸在制備糖尿病并發癥高血壓藥物中的應用。下面用α -硫辛酸的藥理實驗及結果證明其在制藥領域中的應用。將分化成熟的3T3-L1脂肪細胞株進行分組實驗(1)5. 5mM糖濃度將分化成熟的脂肪細胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養液中饑餓12小時。將分化成熟的脂肪細胞分為2組，I組為5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養液對照，另外I組加入含a-硫辛酸的5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養液，培養48小時；(2)15mM糖濃度將分化成熟的脂肪細胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養液中饑餓12小時。將分化成熟的脂肪細胞分為2組，I組為15mM糖濃度的無血清DMEM培養液對照，另外I組加入含a-硫辛酸的15mM糖濃度的無血清DMEM培養液，培養48小時；(3)25mM糖濃度將分化成熟的脂肪細胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養液中饑餓12小時。將分化成熟的脂肪細胞分為2組，I組為25mM糖濃度的無血清DMEM培養液對照，另外I組加入含a-硫辛酸的25mM糖濃度的無血清DMEM培養液，培養48小時。結果不同糖濃度對3T3-L1脂肪細胞局部RAS基因表達的影響誘導分化成熟的3T3-L1細胞在不同糖濃度包括5. 5mM, 15mM,25mM葡萄糖濃度作用48小時后，腎素、腎素結合蛋白、血管緊張素原、血管緊張素轉換酶、AT1R、AT2R基因表達水平的變化與5. 5mM糖濃度組比較，15mM葡萄糖濃度能顯著的降低3T3-L1脂肪細胞中腎素結合蛋白的表達，而腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉化酶、AT1R、AT2R表達呈增高的趨勢，但無統計學意義。25mM葡萄糖組中腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉化酶、AT1R、AT2R表達顯著增高，較5. 5mM葡萄糖組分別增高51.71倍(F=170. 7，Ρ〈0· 0001), 12. 86倍(F=31. 56，Ρ〈0· 0001),3. 04 倍(F=7. 132，P=O. 0037),4. 16 倍(F=5. 167，P=O. 0118),2. 62 倍(F=3. 698，P=O. 0349)，而腎素結合蛋進一步降低至76. 3% (F=8. 548，Ρ=0· 001)。由此可見，高糖濃度能夠增加腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉化酶、AT1R、AT2R表達，從而激活RAS系統。不同糖濃度對3T3-L1脂肪細胞ROS的影響誘導分化成熟的3T3-L1細胞在不同糖濃度包括5. 5mM, 15mM,25mM葡萄糖濃度作用48小時后細胞內ROS的表達15mM葡萄糖和25mM葡萄糖均能顯著增加細胞內ROS的表 達，與5. 5mM葡萄糖對照組比分別增加141. 1%和198. 5% (F=22. 36，Ρ〈0· 0001)。抗氧化劑對細胞內ROS及RAS各成分表達的影響為了明確高糖濃度下ROS變化對RAS各成分表達的影響，我們在誘導分化完全的3T3-L1脂肪細胞中加入抗氧化劑α -硫辛酸，培養48小時后檢測3T3-L1脂肪細胞中R0S、腎素、腎素結合蛋白、血管緊張素原、血管緊張素轉換酶、AT1R、AT2R表達的變化。α-硫辛酸能顯著降低25mM葡萄糖引起的細胞內ROS至69. l%(t=3. 184，P=O. 008)。而在5. 5mM葡萄糖組及15mM葡萄糖濃度條件下，α-硫辛酸對細胞內的ROS無顯著影響。在5. 5mM葡萄糖組及15mM葡萄糖組，α -硫辛酸對腎素、血管緊張素原mRNA表達無顯著性改變。在25mM葡萄糖組，給以α -硫辛酸處理后，腎素、血管緊張素原mRNA表達分別降至原來的 43. 8% (t=3. 953，P=O. 002),43. 5% (t=2. 803，P=O. 013)，并具有統計學差異。在15mM葡萄糖組及25mM葡萄糖組，α -硫辛酸對腎素結合蛋白均有顯著的降低作用(t=2. 803，P=O. 013)。α -硫辛酸在不同糖濃度條件下，對血管緊張素轉換酶、AT1R、AT2R變化均無顯著的改變。本發明結果表明高糖能顯著的增加AGT的表達。此外，高糖還能激活3T3-L1脂肪細胞中RAS其他各基因的表達，包括腎素，AGT, ACE, AT1R，AT2R，相反腎素結合蛋白的表達減少。同時，高血糖顯著增加細胞內活性氧，引起的氧化應激。應用抗氧化劑α-硫辛酸通過降低細胞內活性氧水平可降低腎素及ACT的表達，從而可用于糖尿病并發的腎病和高血壓的藥物制備。
具體實施例方式實施例(1)5. 5mM糖濃度將分化成熟的脂肪細胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養液中饑餓12小時。將分化成熟的脂肪細胞分為2組，I組為5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養液對照，另外I組加入含a-硫辛酸的5. 5mM糖濃度的無血清DMEM培養液，培養48小時；(2)15mM糖濃度將分化成熟的脂肪細胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養液中饑餓12小時。將分化成熟的脂肪細胞分為2組，I組為15mM糖濃度的無血清DMEM培養液對照，另外I組加入含a-硫辛酸的15mM糖濃度的無血清DMEM培養液，培養48小時；(3)25mM糖濃度將分化成熟的脂肪細胞分為3組，在無血清含有O. 2%BSA的DMEM培養液中饑餓12小時。將分化成熟的脂肪細胞分為2組，I組為25mM糖濃度的無血清DMEM培養液對照，另外I組加入含a-硫辛酸的25mM糖濃度的無血清DMEM培養液，培養48小時。相對于低葡萄糖組，中葡萄糖組與高葡萄糖組細胞內的活性氧均有顯著性增加。高葡萄糖組中腎素、血管緊張素原、血管緊張素轉換酶、血管緊張素I型受體、血管緊張素2型受體均有顯著性增加，中葡萄糖組也表現出相同的趨勢但不顯著性差異。而腎素結合蛋白在中葡萄糖組及高葡萄糖組均顯著降低；抗氧化劑α-硫酸鋅可阻斷高糖引起的細胞內活性氧的增加，從而阻斷高葡萄糖誘導的腎素及AGT表達的增加。
以上所述為本發明的較佳實施例而已，但本發明不應該局限于該實施例所公開的內容。所以凡是不脫離本發明所公開的精神下完成的等效或修改，都落入本發明保護的范圍。
權利要求
1.a-硫辛酸在制備治療糖尿病并發癥藥物中的應用。
2.a _硫辛酸在制備治療糖尿病并發癥腎病藥物中的應用。
3.a -硫辛酸在制備治療糖尿病并發癥高血壓藥物中的應用。
全文摘要
本發明公開了α-硫辛酸在制備糖尿病并發癥藥物中的應用。本發明結果表明高糖能顯著的增加AGT的表達。此外，高糖還能激活3T3-L1脂肪細胞中RAS其他各基因的表達，包括腎素，AGT，ACE，AT1R，AT2R，相反腎素結合蛋白的表達減少。同時，高血糖顯著增加細胞內活性氧，引起的氧化應激。應用抗氧化劑α-硫辛酸通過降低細胞內活性氧水平可降低腎素及ACT的表達，從而可用于糖尿病并發的腎病和高血壓的藥物制備。
文檔編號A61P9/12GK103006641SQ20121057676
公開日2013年4月3日 申請日期2012年12月26日 優先權日2012年12月26日
發明者寧光, 方萍, 湯正義, 崔斌, 王衛慶 申請人:上海市內分泌代謝病研究所