專利名稱：珍珠菜提取物及其提取方法和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，涉及一種珍珠菜提取物及其提取方法，該珍珠菜提取物具有保肝護肝作用。
背景技術(shù)：
肝損傷是多種因素如毒物(CCL4、AP、IC)的中間產(chǎn)物與大分子物質(zhì)共價結(jié)合、缺氧、脂質(zhì)過氧化、細胞內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)和內(nèi)毒素相互作用的結(jié)果，而非單一的作用。肝損傷引發(fā)的肝臟疾病已成為常見病、多發(fā)病，更為嚴重的是其引發(fā)的肝功能衰竭和肝性腦病等，發(fā)病率和死亡率高，極大地威脅著人類健康。很多因素都可引起肝損傷。體內(nèi)模型特別是化學性肝損傷模型在形態(tài)學、病理生理學的某些方面與人慢性肝病較為相似。腹腔注射CCl4 植物油溶液是目前常用的肝炎模型。CCl4引起肝損傷的機制是CCl4在肝微粒體細胞色素 P450激活下生成自由基CCI3·及Cl·，這些自由基可與肝細胞內(nèi)大分子發(fā)生共價結(jié)合，也可攻擊膜下不飽和脂質(zhì)，引起脂質(zhì)過氧化，從而使肝細胞損傷，細胞質(zhì)內(nèi)GPT、GOT滲入血液， 表現(xiàn)為血清中GPT、G0T活性升高。SOD活性及MDA含量常可反映體內(nèi)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)程度， 間接反映機體組織、細胞損傷的程度。通過檢測小鼠肝勻漿中的SOD活性及MDA含量可反映出藥物對肝細胞的保護作用。因此，以血清GPT、G0T、肝組織SOD活性及MDA含量作為指標來探討藥物對肝臟的保護作用是非常有意義的。目前，肝損傷的治療方法有很多，雖然均有一定的療效，但也存在著明顯的不足。 首先，西藥具有較大的毒副作用，且療效并不確切。其次，實驗和臨床研究證實，中藥在抗菌抗病毒、改善肝功能、抗氧化、改善微循環(huán)、調(diào)節(jié)免疫功能以及抗肝纖維化等方面顯示出良好的療效，安全、可靠、有效，進一步顯示出中醫(yī)辨證論治的合理性，突顯了中藥在治療肝損傷，尤其是內(nèi)毒素性急性肝損傷方面的良好前景。珍珠菜為報春花科植物珍珠菜Hysimachia clethroides Duby)的根或全草，在我國東北、華北、華東、中南、西南及河北、陜西等地均有分布，其味苦、辛，性平，具清熱利濕，活血散瘀、解毒消癰之功效。國內(nèi)外學者從20世紀60年代開始相繼從珍珠菜中分離得到黃酮及苷類和有機酸等化合物。藥理研究表明其具有良好的抗腫瘤作用，對大鼠W256、 Ll-皮下型、小鼠肉瘤S180、小鼠宮頸癌U14、小鼠肝癌H22實體瘤、肝癌腹水型HAC轉(zhuǎn)實體 HSC、艾氏腹水型EAC轉(zhuǎn)實體ESC以及小鼠L615白血病均有明顯的抑制作用；此外，其還有抗菌作用。但是，國內(nèi)外尚未見到有關(guān)于珍珠菜對急性肝損傷小鼠保護作用的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種珍珠菜提取物，該提取物具有保肝護肝作用，可用來制備保護急性肝損傷的藥物。本發(fā)明還提供了該提取物的提取方法。為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取如下技術(shù)方案
一種珍珠菜提取物，其選自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合。
所述珍珠菜提取物的提取方法，包括如下步驟取干燥的珍珠菜粉末用濃度不小于70V%的乙醇水溶液進行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。具體的，所述干燥的珍珠菜粉末用95V%的乙醇水溶液在室溫下浸泡2 — 4次，每次3天，合并所得浸提液并濃縮成浸膏。上述珍珠菜提取物在制備保肝護肝藥物方面的應(yīng)用，尤其是在制備具有保護急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。本發(fā)明提供的珍珠菜提取物選自報春花科植物珍珠菜ilysimachia clethroides Duby)的根或全草。為證實上述提取物的保肝護肝作用，本發(fā)明以聯(lián)苯雙酯為陽性對照，分別考察了珍珠菜三種不同部位的提取物對四氯化碳誘導(dǎo)的急性肝損傷小鼠的治療作用。實驗結(jié)果表明，珍珠菜三種不同部位的提取物均能夠顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GOT、 GPT及小鼠肝組織中的MDA含量，除珍珠菜正丁醇部位低劑量組外，其他劑量組均能顯著升高SOD活力。由此說明，本發(fā)明珍珠菜三種不同部位的提取物對急性肝損傷具有很好的保護作用。
具體實施例方式實施例1
一種珍珠菜有效部位，其選自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合；具體的提取方法為珍珠菜全草陰干、粉碎，取1000 g干燥的珍珠菜粉末，用體積分數(shù)95%的乙醇水溶液(乙醇水溶液的添加量為珍珠菜粉末重量的3 - 5 倍)，室溫下浸泡3次，每次3天，合并3次所得浸提液并濃縮成浸膏；將浸膏分散于IOOOml 蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚(3000ml)、乙酸乙酯(3000ml)和正丁醇(3000ml)進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到固態(tài)的石油醚部位(LCPE) 12 g、乙酸乙酯部位 (LCEA) 38 g和正丁醇部位(LCBU56 g)，對應(yīng)提取率分別為1. 2%、3. 8%和5. 6%。具體的萃取過程為先用石油醚萃取三次，萃取液分層，取上層石油醚部分(揮干后即為石油醚部位)，下層為水層；水層再用乙酸乙酯萃取三次，萃取液分層，取上層乙酸乙酯部分(揮干后即為乙酸乙酯部位)，下層為水層；水層最后用正丁醇萃取三次，萃取液分層，取上層正丁醇部分(揮干后即為正丁醇部位)。這樣操作的目的在于將浸膏中的有效成分按極性從小到大的順序依次萃取出來，因溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇的極性是遞增的。實施例2
用體積分數(shù)85%的乙醇水溶液替換體積分數(shù)95%的乙醇水溶液，其它同實施例1，分別得到固態(tài)的石油醚部位(LCPE) 14g、乙酸乙酯部位(LCEA) 39g和正丁醇部位(LCBU) 61g， 對應(yīng)提取率分別為1. 4%、3. 9%和6. 1%。效果試驗
(一)主要試劑與儀器
四氯化碳(分析純)購自開封化學試劑總廠；橄欖油購自上海衛(wèi)輝化學試劑廠；聯(lián)苯雙酯滴丸購自浙江萬邦藥業(yè)有限公司，批號090205 ；考馬斯亮藍G250購自上海化學試劑公司分裝廠，批號20050115;牛清蛋白購自北京奧博星生物技術(shù)有限責任公司，批號 20100526 ；其它試劑均為分析純。谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)試劑盒(20110613)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒(20110808)、丙二醛(MDA)試劑盒(20110803)、超氧化物歧化酶(SOD)測定試劑盒(20110802)均購于南京建成生物工程研究所。0. 4V%CC14油溶液取四氯化碳分散到橄欖油中，用磁力攪拌器強力攪拌2 h ；現(xiàn)用現(xiàn)配。UV 2000型紫外可見分光光度計(尤尼可上海儀器有限公司)；Multiskan MK3酶標儀(Thermo Electron) ；LRH-150恒溫培養(yǎng)箱(上海一恒科技有限公司)。(二)實驗方法
取健康的成年雄性昆明小鼠(4 6周齡，體重20 士 2 g)120只，隨機分為12組，每組 10只。分別為空白組、模型組、聯(lián)苯雙酯陽性對照組(70mg/kg)、石油醚部位(LCPE)高、中、 低劑量組(500、250、125mg/kg)、乙酸乙酯部位(LCEA)高、中、低劑量組(600、300、150mg/ kg)和正丁醇(LCBU)高、中、低劑量組(600、300、150mg/kg)。除模型組外，空白組用0. 5%的羥甲基纖維素鈉水溶液(CMC-Na)灌胃，其它試驗組用0. 5%CMC-Na分別配制成相應(yīng)濃度灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥8天。于末次給藥2 h后對小鼠進行造模(空白組除外)。禁食不禁水12 h后，摘除小鼠眼球取血，血漿室溫靜置30min，待血清分離后離心，得到血清，放置于冰箱0-3°C保存。快速分離肝臟，制備10%和1%的肝臟組織勻漿液。并用考馬斯亮藍法測定10%和1%組織勻漿液的蛋白含量。(三)實驗結(jié)果
權(quán)利要求
1.一種珍珠菜提取物，其特征在于，選自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合。
2.權(quán)利要求1所述珍珠菜提取物的提取方法，其特征在于，包括如下步驟取干燥的珍珠菜粉末用濃度不小于70 V %的乙醇水溶液進行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
3.如權(quán)利要求2所述的提取方法，其特征在于，所述干燥的珍珠菜粉末用95V%的乙醇水溶液在室溫下浸泡2 - 4次，每次3天，合并所得浸提液并濃縮成浸膏。
4.權(quán)利要求1所述珍珠菜提取物在制備保肝護肝藥物方面的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1所述珍珠菜提取物在制備具有保護急性肝損傷藥物方面的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種珍珠菜提取物，其選自珍珠菜醇提物的石油醚部位、乙酸乙酯部位或正丁醇部位中的一種或任意組合；具體的提取方法為取干燥的珍珠菜粉末用體積濃度不小于70%的乙醇水溶液進行浸提，浸提液濃縮得浸膏；將浸膏分散于蒸餾水中，然后依次用溶劑石油醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，各萃取三次；揮干溶劑后即分別得到石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。實驗證明，珍珠菜三種不同部位提取物均能顯著降低急性肝損傷小鼠血清中的GPT、GOT的含量以及小鼠肝組織中的MDA含量，并能顯著升高SOD活力，可用來制備保肝護肝藥物，尤其是制備具有保護急性肝損傷的藥物。
文檔編號A61P1/16GK102319274SQ201110281698
公開日2012年1月18日 申請日期2011年9月21日 優(yōu)先權(quán)日2011年9月21日
發(fā)明者尹震花, 鞏芳, 康文藝, 李園園, 魏金鳳 申請人:河南大學