專利名稱：小鵝瘟卵黃抗體凍干保護劑的制作方法
技術領域：
本發明屬于家禽抗體保存技術領域，具體涉及一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護齊U、及其制備方法和應用。
背景技術：
小鵝瘟，又稱鵝細小病毒感染，是雛鵝的一種急性敗血性傳染病，可經消化道和呼吸道感染，并可經卵垂直傳播。患病鵝精神萎頓、食欲廢絕、嚴重下痢，有時出現神經癥狀。目前本病呈世界性分布，主要發生于20日齡以內的雛鵝，發病率和死亡率可達90-100%，且發病日齡越小，死亡率越高，對養鵝業的發展影響極大。雛番鴨亦可感染小鵝瘟病毒，并有類似的臨床表現。小鵝瘟卵黃抗體是用小鵝瘟疫苗多次免疫蛋禽，當達到一定程度后收集禽蛋經提取純化后制備的抗體制劑。其可有效預防和治療小鵝瘟病毒引起的鵝群相關疾病，減輕小 鵝瘟造成的危害，在臨床上得到廣泛應用。目前，國內小鵝瘟卵黃抗體都是經稀釋分裝而成的液體劑型，存在著體積大，運輸不便，需低溫保存和運輸。由于反復凍融和運輸不當很容易造成效價降低，而冷凍干燥能使萃取抗體在預先冷凍的狀態下，不經液態直接升華除去水分而獲得凍干制劑，它避免了液態下保存的抗體易失活易變性的缺點，使產品質量穩定，體積縮小，便于運輸及長時間保存。目前常用的凍干保護劑種類有多羥基化合物、糖類、蛋白質、聚合物、氨基酸、鹽和表面活性劑等。但鑒于畜禽養殖用藥開發的特點，凍干保護劑成本不能太高、凍干操作要簡單。因此，研發出一種配方簡單、成本低廉、能夠批量制備的小鵝瘟卵黃抗體凍干保護劑就顯得尤為迫切和重要。

發明內容
本發明的目的是提供一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護劑及其制備方法，從而彌補現有技術的不足。本發明的小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護劑，為包含有明膠、海藻糖、甘氨酸的蒸餾水溶液。上述的凍干保護劑，各組分濃度質量體積百分比g/ml為0. 5-2%明膠、4_7%海藻糖和O. 8-1. 2%甘氨酸。上述凍干保護劑配方各組分濃度優選為1%明膠、6%海藻糖和1%甘氨酸。上述的凍干保護劑中還加入有大豆蛋白胨，加入的大豆蛋白胨的質量體積百分比g/ml濃度為5-10%，優選為8%。將小鵝瘟卵黃抗體與上述凍干保護劑以提及比7:1比例混合，作為小鵝瘟卵黃抗體凍干液體。本發明的凍干保護劑組分簡單、成本低廉、易于制備。從而解決了小鵝瘟卵黃抗體的長途運輸、保存的低溫儲存難題。使用效果表明本發明的凍干保護劑可使小鵝瘟卵黃抗體在2-8°C下保存12個月以上，25°C下保存6個月以上。
具體實施例方式下面結合具體實施例來進一步描述本發明，但這些實例僅是范例性的，并不對本發明中應用的常規技術作限制。本領域技術人員應該理解的是，在不偏離本發明的精神和范圍下可以對本發明的技術方案的細節和形式進行修改或替換，但這些修改和替換均落入本發明保護范圍內。實施例I小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護劑配制在IOOml的蒸餾水中加入Ig明膠、6g海藻糖、Ig甘氨酸后，使各組分充分溶解后，調PH值至7. 2 7. 4，經滅菌處理后，2 8°C保存備用。實施例2小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護劑配制在IOOml的蒸餾水中加入Ig明膠、6g海藻糖、Ig甘氨酸和8g大豆蛋白胨后，使各 組分充分溶解，調PH值至7. 2 7. 4，經滅菌處理后2 8°C保存備用。實施例3小鵝瘟卵黃抗體的凍干將小鵝瘟卵黃抗體與上述實施例I制備的凍干保護劑以體積比7:1比例混合，作為小鵝瘟卵黃抗體凍干液體。預凍階段凍干液體常溫進箱，I小時將制品降至-40°C并維持4小時。升華階段1小時將制品從-40°C升至_8°C并維持14小時。解吸干燥階段0. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時，凍干全程30. 5小時。實施例4小鵝瘟卵黃抗體的凍干制劑的性狀、剩余水分和抗體效價將凍干后小鵝瘟卵黃抗體的凍干制劑分別放置2_8°C和25°C環境下保存，定期觀察抗體的性狀、剩余水分和效力。性狀、剩余水分檢測方法參見現行《獸用生物制品檢驗規程》，抗體效價采用雙向瓊脂擴散試驗(AGP)打孔將制備好的瓊脂板按模板用打孔器打孔，并挑出孔中的瓊脂。中心I孔，周圍6孔，孔徑3 mm,孔距4 mm,用熔化瓊脂補孔底。加樣中央孔加入標準瓊擴抗原，周圍孔分別加入2倍系列稀釋的待檢小鵝瘟卵黃抗體，各孔加樣25μ1。將加樣后的瓊脂板放入填有濕紗布的盒內，置20-25°C室溫或37°C溫箱，24 h初判，72 h終判。結果判定待檢小鵝瘟卵黃抗體與抗原孔之間也出現沉淀線，且與標準陽性血清沉淀線末端相吻合，即判為陽性。當待檢小鵝瘟卵黃抗體與抗原孔之間無沉淀線出現時，即判為陰性。當待檢小鵝瘟卵黃抗體最高稀釋度孔與抗原孔之間形成清晰沉淀線時，即判為瓊擴效價。結果小鵝瘟卵黃抗體凍干后和2_8°C保存12個月、25°C保存6個月，抗體物理性狀保持穩定，均為微黃色疏松團塊，易與瓶壁分離；剩余水分均為2. 12%左右；抗體效價均為1:128以上，未見下降。表I小鵝瘟卵黃抗體凍干制劑檢驗結果
權利要求
1.一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護劑，所述的凍干保護劑為包含有明膠、海藻糖和甘氨酸的蒸餾水溶液。
2.如權利要求I所述的凍干保護劑，其特征在于所述的明膠、海藻糖、甘氨酸的濃度如下0. 5-2%明膠、4-7%海藻糖和O. 8-1. 2%甘氨酸。
3.如權利要求2所述的凍干保護劑，其特征在于所述的明膠、海藻糖、甘氨酸的濃度如下1%甘露醇、6%海藻糖、I %甘氨酸。
4.權利要求I所述的凍干保護劑，其特征在于，在蒸餾水溶液中還加入有大豆蛋白胨。
5.如權利要求4所述的凍干保護劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的加入濃度為5-10%ο
6.如權利要求5所述的凍干保護劑，其特征在于所述的大豆蛋白胨的加入濃度為8%。
7.一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干制劑，其特征在于，所述的凍干制劑的制備方法如下首先將小鵝瘟卵黃抗體與權利要求I或權利要求4所述的凍干保護劑以7:1比例混合，作為小鵝瘟卵黃抗體凍干液體，然后將凍干液體常溫下放入冷凍箱，I小時將制品降至_40°C并維持4小時；然后在I小時內將制品從_40°C升至_8°C并維持14小時；最后在O. 5小時將制品從_8°C升至28°C并維持10小時完成制備。
全文摘要
本發明公開了一種小鵝瘟卵黃抗體的凍干保護劑、其制備方法和應用。本發明凍干保護劑由以下重量體積百分比的組分組成0.5-2%明膠、4-7%海藻糖、0.8-1.2％甘氨酸，剩余成分為蒸餾水。將以上各組分混合均勻，蒸汽滅菌即得本發明凍干保護劑。上述的凍干保護劑還加入了大豆蛋白胨。通過試驗結果表明，本發明凍干保護劑對小鵝瘟卵黃抗體的的保護效果良好，其保護效果要明顯優于現有保護劑的保護效果。
文檔編號A61P31/20GK102824645SQ20121031712
公開日2012年12月19日 申請日期2012年8月30日 優先權日2012年8月30日
發明者王宏華, 孫海新, 凌紅麗, 魏波, 董婷婷 申請人:青島康地恩藥業股份有限公司, 青島寶依特生物制藥有限公司