一種抗氧化大鯢多肽口服液及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種具有高抗氧化性能的大鯢多肽，該多肽分子量不大于5000 Da。本發(fā)明還提供了一種大鯢多肽抗氧化口服液，該口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：大鯢多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0.01-0.03%、β-環(huán)狀糊精0.5-1%、黃原膠0.05-0.15%，余量為純凈水；該大鯢多肽液中大鯢多肽的分子量不大于5000 Da，按質(zhì)量體積比，該大鯢多肽液中大鯢多肽的濃度為1%-2.5%。本發(fā)明還提供了制備該大鯢多肽抗氧化口服液的方法，該方法通過利用復(fù)合酶對大鯢肉進(jìn)行酶解處理，并控制分子量的分布范圍，得到了具有顯著抗氧化功能的口服液。本發(fā)明工藝簡單、適于規(guī)模生產(chǎn)。
【專利說明】一種抗氧化大鯢多肽口服液及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于口服液領(lǐng)域，具體涉及一種抗氧化大鯛多肽口服液及其制備方法。 技術(shù)背景
[0002] 大鯛（Giant Salamander)是世界上現(xiàn)存最大的也是最珍貴的兩棲動(dòng)物，被稱為 "活化石"。近年來，大鯛的人工養(yǎng)殖已越來越受人們重視，隨著大鯛人工飼養(yǎng)技術(shù)的成熟和 推廣，大鯛產(chǎn)量顯著提高，國家有關(guān)部門已經(jīng)批準(zhǔn)人工飼養(yǎng)大鯛二代可以進(jìn)行加工及銷售， 但目前市場上大鯛深加工產(chǎn)品基本沒有，研究報(bào)道也很少見。
[0003] 近年來，天然抗氧化肽因其安全無毒且具有一定的保健功能而備受人們的親睞。 天然抗氧化肽具有重金屬清道夫和過氧化氫分解促進(jìn)劑的作用，可降低自氧化速率，減少 脂肪過氧化氫含量，減少自由基的生成。其不僅具有較強(qiáng)的抗氧化性，而且具有很高的安全 性，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥及化妝品等行業(yè)。
[0004] 然而，在現(xiàn)有技術(shù)中，對大鯛是否可以制備抗氧化產(chǎn)品還沒有達(dá)成共識(shí)，這限制了 大鯛的利用。
[0005] 因此，對大鯛進(jìn)行深入研究，并利用大鯛開發(fā)出可抗氧化的產(chǎn)品，成為了迫在眉睫 的需求。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 針對現(xiàn)有技術(shù)的缺點(diǎn)，本發(fā)明的目的之一是提供一種具有抗氧化性能的大鯛多 肽，該多肽的分子量不大于5000 Da。
[0007] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種大鯛多肽抗氧化口服液，該口服液的原料，按質(zhì) 量百分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：大鯛多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、 β -環(huán)狀糊精0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為純凈水；所述大鯛多肽液中大鯛多肽的分 子量不大于5000 Da，按質(zhì)量體積比，所述大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1%-2. 5%。
[0008] 所述大鯛多肽液是以大鯛肉為原料制得，制備方法包括如下步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液； 4) 超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液。
[0009] 優(yōu)選的，所述口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，包括：大鯛多肽液50 %、白砂糖10 %、蘋果汁4 %、檸檬酸0. 025 %、β -環(huán)狀糊精1 %、黃原膠0. 1 % ;所述大鯛多肽液中大鯛多 肽的分子量不大于5000 Da，所述大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1%。
[0010] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種抗氧化大鯛多肽口服液的制備方法，該方法包括 步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液； 4) 超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液，備 用； 5) 先將大鯛多肽液、白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、β -環(huán)狀糊精和水混合均勻，再加入黃原 膠，并混合均勻，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，各組分的比例為：大鯛多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋 果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、β -環(huán)狀糊精0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為純凈水； 6) 將步驟5)所得物采用500目濾布過濾，然后進(jìn)行灌裝； 7) 將步驟6)所得物進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式為：升溫lOmin，110-115°C、0. 07MPa 殺菌15-40min，分級冷卻IOmin,冷卻至中心溫度小于40°C，即得大鯛多肽抗氧化口服液成 品； 所述復(fù)合酶，按質(zhì)量比計(jì)，由以下酶組成：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶 =2:1:1 復(fù)合酶中包含內(nèi)切酶、外切酶，可以控制分子量，提高低分子量肽的得率；采用優(yōu)化得 到的酶解工藝條件，可提高水解度和原料利用率； 通過復(fù)合酶的配置和酶解工藝的調(diào)整，本發(fā)明能獲得高的多肽得率，更重要的是，能獲 得較高的分子量低于5000Da多肽的得率，為有效利用大鯛制取抗氧化多肽奠定了基礎(chǔ)。 [0011] 采用微濾處理，是為了除去水解液中的大分子物質(zhì)和雜質(zhì)，防止堵塞超濾膜，提高 超濾分離效率。經(jīng)試驗(yàn)表明分子量低于5000的大鯛肽抗氧化性(清除DPPH自由基和羥基 自由基）比分子量高于5000分別高37. 6%和26. 3%左右； 口服液中添加白糖、檸檬酸、蘋果汁和β-環(huán)狀糊精是為了調(diào)節(jié)口服液口味，掩蔽異 味。添加黃原膠是為了保持口服液穩(wěn)定，防止口服液在儲(chǔ)藏期間出現(xiàn)沉淀。
[0012] 本發(fā)明的有益效果： 1、 本發(fā)明采用人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，通過控制酶解工藝和超濾，控制分子量分布，得 到大量的抗氧化肽，具有較強(qiáng)的抗氧化活性，再輔以白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、β -環(huán)狀糊精 和黃原膠，制成營養(yǎng)豐富、酸甜適中、風(fēng)味獨(dú)特，并具有顯著抗氧化功能的大鯛多肽抗氧化 口服液； 2、 多肽得率高，特別是可以獲得較高的分子量小于5000Da的多肽的得率； 3、 本發(fā)明用于制備大鯛多肽抗氧化口服液的方法工藝簡單、操作性強(qiáng)，適合于規(guī)模化 生產(chǎn)。

【具體實(shí)施方式】
[0013] 實(shí)施例1 一種大鯛多肽抗氧化功能口服液的制備經(jīng)過下列步驟： a、大鯛多肽液的制備 a. 1、原料的處理選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入其 質(zhì)量2倍的純凈水進(jìn)行勻漿處理； a. 2、酶解將步驟a. 1勻漿處理后的大鯛肉再加入其質(zhì)量2倍的水進(jìn)行稀釋，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，其酶用量為原料質(zhì)量的1% (w/w)，復(fù) 合酶其組成質(zhì)量比為：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶=2:1:1。酶解溫度為55°C，酶 解時(shí)間為5h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上保持滅酶15min，得大鯛酶解多肽液； a. 3、微濾將步驟a. 2得到的大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，即得透明的 大鯛多肽液，其中，按質(zhì)量體積比，大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1% ; a. 4、超濾將步驟a. 3得到的大鯛多肽液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛 多肽液，備用； b、 調(diào)配稱取步驟a. 4得到的大鯛多肽液50%，稱量白砂糖10%、蘋果汁5%、檸檬酸 0. 03%、β -環(huán)狀糊精1%和純凈水，混合后攪拌至全部溶解，最后按黃原膠0. 15%稱量黃原 膠溶液，攪拌混合均勻，所有組分的百分比加起來為100%，。
[0014] c、過濾、灌裝將步驟b調(diào)配好的混合液采用500目濾布過濾，然后進(jìn)行灌裝； d、殺菌、冷卻將步驟c灌裝好的口服液進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式：升溫lOmin， 115°C、0. 07MPa殺菌30min，分級冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得成品。
[0015] 實(shí)施例2 一種大鯛多肽抗氧化功能口服液的制備經(jīng)過下列步驟： a、大鯛多肽液的制備 a. 1、原料的處理選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入其 質(zhì)量2倍的純凈水進(jìn)行勻漿處理； a. 2、酶解將步驟a. 1勻漿處理后的大鯛肉再加入其質(zhì)量2倍的水進(jìn)行稀釋，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，其酶用量為原料質(zhì)量的2 %(w/w)，復(fù) 合酶其組成質(zhì)量比為：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶=2:1:1。酶解溫度為50°C，酶 解時(shí)間為6h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上保持滅酶20min，得大鯛酶解多肽液； a. 3、微濾將步驟a. 2得到的大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，即得透明的 大鯛多肽液； a. 4、超濾將步驟a. 3得到的大鯛多肽液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛 多肽液，備用； b、 調(diào)配稱取步驟a. 4得到的大鯛多肽液40%，稱量白砂糖8%、蘋果汁4%、檸檬酸 0. 015%、β -環(huán)狀糊精0. 8%和純凈水，混合后攪拌至全部溶解，最后按黃原膠0. 1%稱量黃 原膠溶液，攪拌混合均勻。
[0016] c、過濾、灌裝將步驟b調(diào)配好的混合液采用500目濾布過濾，然后進(jìn)行灌裝； d、殺菌、冷卻將步驟c灌裝好的口服液進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式：升溫lOmin， 115°C、0. 07MPa殺菌20min，分級冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得成品。
[0017] 實(shí)施例3 一種大鯛多肽抗氧化功能口服液的制備經(jīng)過下列步驟： a、大鯛多肽液的制備 a. 1、原料的處理選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入其 質(zhì)量2倍的純凈水進(jìn)行勻漿處理； a. 2、酶解將步驟a. 1勻漿處理后的大鯛肉再加入其質(zhì)量2倍的水進(jìn)行稀釋，加入中性 蛋白酶、木瓜蛋白酶和風(fēng)味蛋白酶的復(fù)合酶進(jìn)行酶解，其酶用量為原料質(zhì)量的〇. 5% (w/w)， 復(fù)合酶其組成質(zhì)量比為：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶=2:1:1。酶解溫度為60°C， 酶解時(shí)間為7h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上保持滅酶20min，得大鯛酶解多肽液； a. 3、微濾將步驟a. 2得到的大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 μ m微濾膜進(jìn)行微濾，即得透明的 大鯛多肽液； a. 4、超濾將步驟a. 3得到的大鯛多肽液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛 多肽液，備用； b、 調(diào)配稱取步驟a. 4得到的大鯛多肽液20%，稱量白砂糖12%、蘋果汁3%、檸檬酸 0. 01%、β -環(huán)狀糊精0. 5%和純凈水，混合后攪拌至全部溶解，最后按黃原膠0. 05%稱量黃 原膠溶液，攪拌混合均勻。
[0018] c、過濾、灌裝將步驟b調(diào)配好的混合液采用500目濾布過濾，然后進(jìn)行灌裝； d、殺菌、冷卻將步驟c灌裝好的口服液進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式：升溫lOmin， 115°C、0. 07MPa殺菌20min，分級冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得成品。
[0019] 試驗(yàn)例1 1、大鯛多肽清除DPPH自由基的能力測定 取 2mL 不同濃度（lmg/mL，2mg/mL，3mg/mL，4mg/mL，5mg/mL，6mg/mL，7mg/mL)的 樣液，加入2mL 0. lmmol/L DPPH溶液（DPPH溶于無水乙醇中），混合均勻后在室溫下避光反 應(yīng)20min，在波長517nm處測吸光值A(chǔ)i。空白組為2mL無水乙醇代替DPPH溶液，加入2mL樣 液，混合均勻后反應(yīng)20min，在波長517nm處測定吸光值A(chǔ)」。對照組為2mL DPPH溶液加入2 mL無水乙醇，在波長517nm處測定吸光值A(chǔ)。。
[0020] 計(jì)算公式：清除率=[1_ (Ai-Aj) /AJ*100% 2大鯛多肽清除OH ·能力的測定 取ImL 1. 865 mmol/L鄰二氮菲溶液(稱取0. 0369g鄰二氮菲溶解于IOmL無水乙醇中 中，并定容于IOOmL容量瓶中）和2mL不同濃度梯度（0. 5g/L，lg/L，2g/L，4g/L，8g/L) 的樣品液，充分混合均勻后加入ImL I. 865mmol/L的FeSO4 (取0. 0129g FeSO4. 7H20溶解于 蒸餾水中，并與25mL容量瓶中定容)，混合均勻后加入ImL 0.03% (V/V) H2O2，混合溶液在 37°C水浴60 min后，536 nm下測其吸光值為A#。以去離子水代替樣品液來重復(fù)以上操 作，在536 nm測得吸光度Affi;以去離子水代替樣品液和H2O2溶液重復(fù)上述操作，在536 nm 測其吸光值為A未損。
[0021] 清除率（％)= (A樣-A損v( A未損-A損）X 100%。式中：A樣為樣品組的吸光值；A $為損傷管的吸光值;為未損傷管的吸光值。
[0022] 試驗(yàn)結(jié)果見表1。

【權(quán)利要求】
1. 一種具有高抗氧化性能的大鯛多肽，其特征在于，所述大鯛多肽的分子量不大于 5000 Da〇
2. -種大鯛多肽抗氧化口服液，其特征在于：所述口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)， 包括：大鯛多肽液20-50%、白砂糖8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、0 -環(huán)狀糊精 0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為純凈水；所述大鯛多肽液中大鯛多肽的分子量不大于 5000 Da，按質(zhì)量體積比，所述大鯛多肽液中大鯛多肽的濃度為1%-2. 5%。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的口服液，其特征在于，所述大鯛多肽液是以大鯛肉為原料制 得，制備方法包括如下步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 y m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液；4)超 濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的口服液，其特征在于，所述口服液的原料，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)， 包括：大鯛多肽液50 %、白砂糖10 %、蘋果汁4 %、檸檬酸0. 025 %、0 -環(huán)狀糊精1 %、黃原 膠0.1 %;所述大鯛多肽液中大鯛多肽的分子量不大于5000 Da，按質(zhì)量體積比，所述大鯛多 肽液中大鯛多肽的濃度為1 %。
5. -種大鯛多肽抗氧化口服液的制備方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟： 1) 選取人工飼養(yǎng)大鯛肉為原料，剔除油脂及雜質(zhì)，洗凈浙干后，加入質(zhì)量為大鯛肉2倍 的純凈水進(jìn)行勻漿處理； 2) 按質(zhì)量比2:1的比例，將純凈水加入步驟1)勻漿處理后的大鯛肉，再加入復(fù)合酶進(jìn) 行酶解，復(fù)合酶用量為浙干大鯛肉質(zhì)量的〇. 5%-2%，酶解溫度為50-60°C，酶解時(shí)間為5-7h， 酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶10_20min，得大鯛酶解多肽液； 3) 微濾：將步驟2)所得大鯛酶解多肽液經(jīng)0. 45 y m微濾膜進(jìn)行微濾，取濾液； 4) 超濾：將步驟3)所得濾液采用5000分子量的超濾膜進(jìn)行超濾，得大鯛多肽液，備 用； 5) 先將大鯛多肽液、白砂糖、蘋果汁、檸檬酸、3 -環(huán)狀糊精和水混合均勻，再加入黃 原膠溶液，并混合均勻，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，各組分的比例為：大鯛多肽液20-50%、白砂糖 8-12%、蘋果汁3-5%、檸檬酸0. 01-0. 03%、0 -環(huán)狀糊精0. 5-1%、黃原膠0. 05-0. 15%，余量為 純凈水； 6) 將步驟5)所得物采用500目濾布過濾，然后進(jìn)行灌裝； 7) 將步驟6)所得物進(jìn)行高溫高壓殺菌，殺菌方式為：升溫lOmin，于110-115°C、 0. 07MPa殺菌15-40min，分級冷卻lOmin，冷卻至中心溫度小于40°C，即得大鯛多肽抗氧化 口服液成品； 所述復(fù)合酶，按質(zhì)量比計(jì)，由以下酶組成：中性蛋白酶：木瓜蛋白酶：風(fēng)味蛋白酶 =2:1:1。
6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟2)中，復(fù)合酶用量為浙干大鯛 肉質(zhì)量的2 %，酶解溫度為55°C，酶解時(shí)間為6 h，酶解完畢加熱酶解液到90°C以上滅酶15 min〇
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，步驟5)中，按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述各組分 的比例為：大鯛多肽液50 %、白砂糖10 %、蘋果汁4 %、檸檬酸0. 025 %、0 -環(huán)狀糊精1 %、 黃原膠0. 1 %，余量為純凈水。
【文檔編號】A61K9/08GK104432083SQ201510007657
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2015年1月8日 優(yōu)先權(quán)日:2015年1月8日
【發(fā)明者】冉旭, 徐陽, 李靜, 曾里, 孫強(qiáng) 申請人:四川大學(xué)