專利名稱：獼猴桃籽油脂質體口服液及其制備方法
技術領域：
本發明屬于保健品制劑領域，具體涉及一種獼猴桃籽油脂質體口服液及其制備方法。
背景技術：
稱猴桃iActinidia chinensis)又名楊桃、藤梨、仙桃、毛桃等,新西蘭稱基維果(kiwifruit)，是一種藤本植物，是我國特產珍貴水果之一。隨著獼猴桃加工業的發展，水果殘渣量增多。獼猴桃殘渣中主要是水果粗纖維和種子。這些工廠在加工生產過程中，產生大量果渣，其中含有大量的獼猴桃種子籽粒。據黃倬偉等(黃倬偉，易明華.獼猴桃籽提煉優質食用油的研究[J].糧油食品科技，1992，(4) 12)報道，每個獼猴桃野果中的籽粒少則250多粒，多達800余粒，平均500粒左右。經測定，籽粒中含油率為28. 85%，獼猴桃籽油中不飽和脂肪酸含量高達90. 37%，其中亞油酸、亞麻
酸含量占74. 83%;動物實驗結果顯示，獼猴桃籽油具有明顯的降血脂作用，口服安全無毒。姚茂君(姚茂君，李加興，張永康.獼猴桃籽油的開發利用探討[J].食品與發酵工業，2001,27 (12):28 30，]姚茂君，李嘉興，張永康.獼猴桃籽油理化特性及脂肪酸組成[J].無錫輕工大學學報，2002，2 (3):307 309)、張永康(張永康，蔣劍波，陳莉華.獼猴桃果仁油脂肪酸的測定及其利用[J]·吉首大學學報(自然科學版)，2001，22 (4):37 38，82)等研究了湖南湘西“米良一號”獼猴桃的種子，發現含油率為23. 5%，氣相色譜測定脂肪酸組成，a-亞麻酸含量高達63. 99%。因此獼猴桃籽油可作為補充不飽和脂肪酸的重要保健油資源加以開發利用。猴桃籽油中含亞麻酸與亞油酸，是目前發現的除蘇子油外亞麻酸含量最高的天然植物油。亞油酸和亞麻酸是兩種對人體健康特別重要的必需脂肪酸，只能從外界攝取而不能在人體內自行合成。α -亞麻酸是EPA和DHA的前體物質，因而獼猴桃籽油具有降低血脂、膽固醇和血壓，預防心血管疾病，抑制血小板凝集，防止血栓形成，防止癌癥發生，抗氧化和延緩衰老等多種作用。所以獼猴桃籽油是一種優質的功能食品、藥品和美容化妝品的原料。但是，獼猴桃籽油中含量高達90%的不飽和脂肪酸給油脂的保存帶來了問題。不飽和脂肪酸分子含有多個雙鍵，因而對氧氣、光線和熱極為敏感，極易氧化變質。油脂的氧化不僅使其失去了應有的保鍵功能，而且還會產生一些對人體有害的物質。脂質體(liposome)是Bangham在1965年發現的一種由磷脂構成的一種類脂小球體。是將藥物包封在脂質(磷脂與膽固醇)雙分子層形成的薄膜中制成的微型球狀體(Bangham ad. difusion of univalent ions aeross the lamellae of swollenPhosphlipids [J].Mol. Biol, 1965 13:238 252.)。雙分子層內外分別包封脂溶性和水溶性藥物，其理化性質和結構類似細胞膜，又稱為人工生物膜。脂質體作為一種新穎的功能成分制劑而備受關注，近年來，脂質體制劑研究與應用取得很大發展。脂質體制劑的作用特 點主要有(陸彬.藥物新劑型與新技術[M].第二版.北京人民衛生出版社，2005. 5):
(I)保護功能成分提高穩定性一些不穩定的功能成分被脂質體包封后，可受到脂質體雙層膜的保護被包裹的功能成分在體內轉運過程中不受酶和免疫系統所破壞。(2)降低功能成分毒性
脂質體本身對人體無毒，功能成分被包裹后在心、腎中累積量比游離功能成分低，對心、腎有毒性的功能成分包封脂質體后，可明顯降低毒性。(3)緩釋作用
控制功能成分的釋放速率，達到長效緩釋。(4)革巴向性
進入體內后被網狀內皮系統吞噬，使功能成分主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中蓄 積，實現被動靶向給藥。脂質體在醫藥行業應用成熟，但在食品領域尚屬起步階段。脂質體作為一個優良的載體，通過磷脂的包覆，既可提高包埋物質的穩定性，又使其具有靶同性，可提高功能成分的生物利用率。目前，脂質體的制備方法及其例子如下
I.機械分散法(mechanical dispersion)通常是先將脂質溶于有機溶劑中，減壓旋轉蒸發使之在玻璃容器的內壁形成均勻的脂質膜，然后加入水相介質通過振搖將脂質分散并形成脂質體。例如水飛薊油脂質體制備將處方量卵磷脂、膽固醇、水飛薊油溶解于5ml氯仿，在旋轉蒸發儀上減壓蒸干有機溶劑，達膠態后，加入適量體積的磷酸鹽緩沖溶液 (PBS)，于35°C水浴恒溫振蕩至完全水化，用O. 45 μ m微孔濾膜過濾3次，即得。采用此方法制備脂質體較為普遍，但采用氯仿等有機試劑，毒性大，不適合用于食品領域。2.溶劑分散法
溶劑分散法(solvent dispersion)是先將脂質溶于有機溶劑中，再加入到含有被包裹藥物的水相中，在有機相與水相交界面上磷脂質以單分子層(即脂質體雙分子層膜的一半)排列。例如茶樹油脂質體的制備稱取處方量的卵磷脂、膽固醇、茶樹油、VE、去氧膽酸鈉、吐溫-80等，向其中加入適量無水乙醇，超聲至懸液均勻，得類脂混懸液；水合介質置于恒溫磁力攪拌器上以保持規定的溫度和攪拌速度。將類脂混懸液慢慢滴入水合介質中，得脂質體初懸液(其中乙醇的體積分數為10%)，將此初懸液置于水浴式超聲儀中超聲20 min,即得茶樹油脂質體懸液。卵磷脂的質量濃度為10 g · L'卵磷脂與膽固醇的質量比為5: I、茶樹油的質量濃度為I. O g · L' VE的質量濃度為I. O g · L'去氧膽酸鈉的質量濃度為O. 5 g 吐溫-80的質量濃度為4. O g 水相介質是pH值為6. 8的PBS緩沖溶液。采取此方法制備脂質體的案例較少，主要是因為工藝參數必須控制精確，否則制得的脂質體不穩定。針對獼猴桃籽油容易氧化的特點，馮衛華等采用噴霧干燥法對獼猴桃籽油進行微膠囊化研究(獼猴桃籽油微膠囊化技術研究，農業工程學報，2004，20 (1) 234 236)。姚茂軍等制備了獼猴桃籽油軟膠囊(獼猴桃油軟膠囊的研究，發酵與食品工業，29 (12)2003，58 61)。噴霧干燥法仍需較高溫度(進風口 180°C，出風口 80°C)，因此對獼猴桃籽油有損失。目前尚未有制備獼猴桃籽油脂質體的公開報道
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種獼猴桃籽油脂質體口服液及其制備方法，用本發明方法制備得到的獼猴桃籽油脂質體口服液，獼猴桃籽油的的穩定性高，安全，避免了獼猴桃籽油中的不飽和脂肪酸被氧化，從而達到方便運輸和長期保藏的目的。本發明提供的技術方案是一種獼猴桃籽油脂質體口服液的制備方法，該方法包括如下步驟
(1)量取磷酸鹽緩沖液置于恒溫振蕩器中，水浴加熱至55-65°C，并保持恒溫；
(2)以無水乙醇為溶劑,分別配制濃度為15-25mg/ml的卵磷脂、5 20mg/ml的膽固醇、5^20mg/ml的獼猴桃籽油混合溶液；
(3)將步驟(2)中所述的三種溶液混合均勻后注入到步驟(I)中的磷酸鹽緩沖液中，于恒溫水浴20-40min，除去殘留乙醇，然后進行超聲處理20_40min，加蒸餾水定容，密封，滅菌后即得獼猴桃籽油脂質體口服溶液。所述的制備方法，優選地，步驟(I)中，量取pH6. 8的磷酸鹽緩沖液置于恒溫振蕩器中，水浴加熱至60°C，并在150r/min轉速下保持恒溫；步驟(3)中，于60°C恒溫水浴30min，除去殘留乙醇，然后進行超聲處理30min (超聲功率80W)，加蒸餾水定容，密封，滅菌后即得獼猴桃籽油脂質體口服溶液。所述的制備方法，優選地，步驟(I)中，配制卵磷脂溶液濃度為20mg/ml ;步驟(3)中三種溶液混合后，其中的卵磷脂與膽固醇的質量比為2:1，卵磷脂與獼猴桃籽油的質量比為 4:I。。所述的制備方法，優選地，步驟(3)中，60°C恒溫水浴30min，蒸發揮盡殘留乙醇，然后進行超聲處理，30min，超聲功率為80W。本發明的方法優選采用湖南老爹農業科技開發股份有限公司提供獼猴桃籽油，例如產品批號為20111230。本發明還提供由上述制備方法制備得到的獼猴桃籽油脂質體口服液。本發明具有以下有益效果
獼猴桃籽油是常用的獼猴桃籽利用的重要組分，由于其所含的亞麻酸的保健作用，提高獼猴桃籽油的穩定性，實現獼猴桃籽油中亞麻酸的靶向輸送，提高其吸收和利用已經成為國內外研究的熱點。獼猴籽油難溶于水，口服生物利用度低，極大的限制了其臨床療效，由于獼猴桃籽油中的亞麻酸的含高達60%以上，極其容易被氧化，本發明結合脂質體的靶向性和緩釋性，將獼猴桃籽油制備成脂質體口服溶液，可以提高獼猴桃籽油的的穩定性，安全性，避免獼猴桃籽油中的不飽和脂肪酸被氧化，并且可以實現獼猴桃籽油的靶向運輸，達到提高獼猴桃籽油吸收率的作用。從而達到方便運輸和長期保藏的目的，推廣了獼猴桃籽油脂質體技術的商業價值。本發明采取較低的溫度，克服了微囊化過程中噴霧干燥溫度較高的缺點，同時釋放速度較軟膠囊慢，可進一步作為緩釋制劑的原料。
具體實施例方式下面通過具體實施方式
的詳細描述來進一步闡明本發明，但并不是對本發明的限制，僅僅作示例說明。實施例I
I、獼猴桃籽油脂質體包封率的測定采用透析-紫外分光光度法測定獼猴桃籽油的含量。移取20ml獼猴桃籽油脂質體放入透析袋中，透析17h后，將袋中溶液倒入IOOml容量瓶，選用乙醇為破乳劑，結合超聲，力口入石油醚提取，將混合溶液進行離心(3000r/min, 3min),取IOml上清液于25ml容量瓶中，用石油醚定容，在233nm處測定其吸光度A1;同法測定空白脂質體吸光度Atl，計算ΛΑ，由標準曲線求出所包封獼猴桃籽油的含量。包封率％= Δ A* IOOA1
2、配方與工藝優選
脂質體口服溶液的技術關鍵在于脂質體的制備。以包封率為指標，考察配方中卵磷脂與膽固醇的質量比(L:C)、卵磷脂與油的質量比(L:0)、水浴時間(t)、加熱溫度(T)等四個因素對包封效果的影響。根據單因素試驗結果，選用L9(43)正交表進行脂質體配方正交試驗設計。
表I 正交設計因素表
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UM
素等LOW >#湯__HV)
11:1iimm
21:121Sft騎 i 4i 4:1 m 鎌
表2正交設計表及結果L (9) 34 ___
分組_L:C(w/w)L:Q(w/w) 7_K浴時間(min)T(°C )包封率(％)
1—II —II36Γ34
2—I2 —2238 54
3—I3 —3345Γ67
4—2I —23 ~45
5—22 —3I65Γ35
6—23 —I266Γ36
7—3I —325θΓ56
8—32 —I345 57
9—33 —2I55 20 Kl— 40. 18350. 783 _ 49.42352.297 —
Κ2— 68. 72049.820 _ 56.06351.820 —
Κ3— 50.44355. 743 ^ 53.86055.230 —
最優水平_2~32~3—
R—28. 537 5.923 ^ 6.6403.410 —
顯著性 ^(ρ<0. 05)_____
通過直觀分析，可知最佳處方及工藝條件為因此，獼猴桃籽油脂質體最佳制備工藝為
卵磷脂與膽固醇的質量比(2:1)、卵磷脂與油的質量比(4:1)、水浴時間301^11、加熱溫度
60°C。配方中卵磷脂與膽固醇的比例對脂質體形成的影響最大。實施例2
將恒溫振蕩器溫度設置為60°C，預熱。準確量取100mlpH6. 8的磷酸鹽緩沖液置于恒溫振蕩器中，水浴加熱至60°C，并在150r/min轉速下保持恒溫。以無水乙醇為溶劑，分別配制卵磷脂(LC)濃度為20mg/ml，膽固醇(CH)濃度為10mg/ml，獼猴桃籽油(KFO)濃度為15mg/ml，純度99. 0%。將各溶液混合均勻后用注射器均勻注入到恒溫振蕩器中的磷酸鹽緩沖液中。60°C恒溫水浴30min，除去殘留乙醇，超聲處理30min (超聲功率80W)，加蒸餾水定容至250ml，密封，輻照滅菌后即得獼猴桃籽油脂質體口服溶液。
本發明的方法優選采用湖南老爹農業科技開發股份有限公司提供獼猴桃籽油，本實施例所用產品批號為20111230。實施例3
用乙醇作為溶劑分別配制卵磷脂(LC)濃度為16mg/ml,膽固醇(CH)濃度為12mg/ml,獼猴桃籽油(KFO)濃度為10mg/ml，制備方法同實施例2。實施例4
用乙醇作為溶劑分別配制卵磷脂(LC)濃度為20mg/ml，膽固醇(CH)濃度為20mg/ml，獼猴桃籽油(KFO)濃度為5mg/ml，制備方法同實施例2。實施例5
用乙醇作為溶劑分別配制卵磷脂(LC)濃度為23mg/ml,膽固醇(CH)濃度為6mg/ml,稱猴桃籽油(KFO)濃度為18mg/ml，制備方法同實施例2。
權利要求
1.一種獼猴桃籽油脂質體口服液的制備方法，其特征在于該方法包括如下步驟 (O量取磷酸鹽緩沖液置于恒溫振蕩器中，水浴加熱至55-65°C，并保持恒溫； (2)以無水乙醇為溶劑，配制濃度為15 25mg/ml的卵磷脂溶液，濃度為5 20mg/ml的膽固醇，濃度為5 20mg/ml的獼猴桃籽油混合溶液； (3)將步驟(2)中所述的三種溶液混合均勻后注入到步驟(I)中的磷酸鹽緩沖液中，于恒溫水浴20-40min，除去殘留乙醇，然后進行超聲處理20_40min，超聲處理(超聲功率80W)，加蒸餾水定容，密封，滅菌后即得獼猴桃籽油脂質體口服溶液。
2.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于步驟(I)中，量取pH6.8的磷酸鹽緩沖液置于恒溫振蕩器中，水浴加熱至60°C，并在150r/min轉速下保持恒溫；步驟(3)中，于60°C恒溫水浴30min，除去殘留乙醇，然后進行超聲處理30min，超聲功率為80W，加蒸餾水定容，密封，滅菌后即得獼猴桃籽油脂質體口服溶液。
3.根據權利要求I所述的制備方法，其特征在于步驟(2)中，配制卵磷脂溶液濃度為20mg/ml。
4.根據權利要求I至3任一項所述的制備方法，其特征在于步驟(3)中三種溶液混合后，其中的卵磷脂與膽固醇的質量比為2:1，卵磷脂與獼猴桃籽油的質量比為4:1。
5.一種獼猴桃籽油脂質體口服液，其特征在于其由權利要求I至4任一項所述的制備方法制備得到。
全文摘要
本發明公開了一種獼猴桃籽油脂質體口服液及其制備方法，該方法包括如下步驟(1)量取pH6.8的磷酸鹽緩沖液置于恒溫振蕩器中，水浴加熱至60℃，并保持恒溫；(2)以無水乙醇為溶劑，配制濃度為15~25mg/ml的卵磷脂，5~20mg/ml的膽固醇，5~20mg/ml的獼猴桃籽油混合溶液；(3)將步驟(2)中的混合溶液注入到步驟(1)中的磷酸鹽緩沖液中，60℃恒溫水浴，然后進行超聲處理，加蒸餾水定容，密封，滅菌后即得獼猴桃籽油脂質體口服溶液。用本發明方法制得的獼猴桃籽油脂質體口服液，獼猴桃籽油的的穩定性高，安全，避免了獼猴桃籽油中的不飽和脂肪酸被氧化，從而達到方便運輸和長期保藏的目的。
文檔編號A61P35/00GK102641311SQ20121015727
公開日2012年8月22日 申請日期2012年5月21日 優先權日2012年5月21日
發明者傅冬和, 劉仲華, 張盛, 張勝, 李適, 肖文軍 申請人:湖南農業大學