專利名稱：一種人工合成的g4噬菌體及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及噬菌體領域，尤其是關于一種人工合成的噬菌體。
背景技術：
隨著微生物抗藥性的不斷增強，抗生素的發展已經越來越不能滿足要求，因此，開發一種新的抗菌療法已經變得越來越迫切。噬菌體對一些細菌具有高度的專一性，當噬菌體侵染細菌時，可在細菌中繁殖并殺死細菌；而對動植物沒有毒性。因此，噬菌體以其特有的自然特征有望成為較好的抗菌藥。
合成生物學“后基因組時代”生命科學研究的新興領域。該學科通過對多種天然的或人工設計的生物學元件進行合理、系統的組裝，實現生命系統的重構。該技術將“結構基因時代”的DNA建構發展為“后基因組時代”的生命建構。由于它以解決人類社會中的重大問題為出發點，具有不可估量的潛在價值。許多國家對其非常看好，并正在投入巨大力量進行研發。發明內容
本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種能夠治療大腸埃希菌引起的感染性疾病的人工合 成的G4噬菌體及其應用。
為實現上述目的，本發明采用了以下技術方案一種人工合成的G4噬菌體，所述 G4噬菌體的DNA序列為SEQ ID NO :1所示的第一序列。
進一步的，所述第一序列由SEQ ID NO :2所示的第二序列突變而成，所述突變位點位于所述第二序列從5’端起的第3016個核苷酸、第3328個核苷酸、第3358個核苷酸，其突變結果分別為由t突變為a、由t突變為C、由t突變為C。
一種所述的G4噬菌體在治療大腸埃希菌引起的感染性疾病上的應用。
一種所述的G4噬菌體在防控食品中大腸埃希菌污染上的應用。
一種所述的G4噬菌體在消殺大腸埃希菌病原菌上的應用。
一種組合物，包括所述的G4噬菌體作為活性成分。
進一步的，所述組合物被用作抗生素。
一種食品添加劑，包括所述的G4噬菌體作為活性成分。
一種清潔劑或消毒劑，包括所述的G4噬菌體作為活性成分。
本發明的有益效果是基于G4噬菌體特異性裂解細菌的特性，可以殺死具有耐藥性的大腸埃希菌，同時能夠防止菌株進化和耐藥毒株的產生，進而能夠有效增加大腸埃希菌的致死率。


圖1是本發明G4噬菌體基因組的環化結構圖2顯示本發明G4噬菌體感染大腸桿菌形成的噬菌斑；
圖3是本發明G4噬菌體顆粒電鏡圖。
具體實施方式
下面通過具體實施方式
結合附圖對本發明作進一步詳細說明。
發明人利用現有G4 噬菌體基因([NCBI Reference Sequence NC_001420. 2])突變后得到本發明G4噬菌體基因，現有G4噬菌體基因的DNA序列如SEQ ID NO :2所示的第二序列，本發明G4噬菌體基因的DNA序列如SEQ ID NO :2所示的第一序列。第二序列的突變位點分別是位于第二序列從5’端起的第3016個核苷酸、第3328個核苷酸和第3358個核苷酸，其突變結果分別是由t突變為a、由t突變為c和由t突變為C。
如圖1所示，第一序列具有EcoRl、Kpnl、Ncol限制性內切酶位點，該三個內酶切位點分別對應上述的第3328個、3358、3016個位點，該三個內酶切位點的序列分別為 gaattc、ggtacc、ccatgg。合成得到的本發明G4卩遼菌體能夠感染大腸埃希菌(即大腸桿菌) 形成噬菌斑，該噬菌斑為類圓形透明斑及大片融合斑，如圖2所示。合成得到的本發明G4 噬菌體顆粒如圖3中箭頭所示，該顆粒的直徑約40nm。設計酶切位點的目的是為了區別于野生型，表示本發明是用人工化學合成的方法制造的，而不是克隆別人的或天然的。
本發明G4噬菌體具有如下應用
I)人造G4噬菌體可以替代抗生素或與抗生素聯合使用治療人類大腸埃希菌感染性疾病。由此，可以以該G4噬菌體作為活性成分，制作出含有該活性成分的組合物，通過該組合物起到治療或預防大腸埃希菌引起的感染性疾病的作用，該組合物可以用作抗生素。
2)可以作為食品添加劑防控食品中的烈性大腸埃希菌污染。由此，可以以該G4噬菌體作為活性成分，制作出含有該活性成分的食品添加劑，通過該食品添加劑起到防止大腸埃希菌污染的作用。
3)在一定環境條件下，對水體、土壤、物體表面進行大腸埃希菌病原菌的殺滅。由此，可以以該G4噬菌體作為 活性成分，制作出含有該活性成分的消毒劑或清潔劑，通過該消毒劑或清潔劑起到消殺大腸埃希菌病原菌的作用。
以上內容是結合具體的實施方式對本發明所作的進一步詳細說明，不能認定本發明的具體實施只局限于這些說明。對于本發明所屬技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干簡單推演或替換，都應當視為屬于本發明的保護范圍。
序列表<110>蔡志明楊銳林唐愛發劉宇辰韓永華葉藝旺段永剛<120>一種人丄合成的G4噬菌體及其應用 <130〉DHC1110326<160>2<170>PatentIn version 3.3<210>I<211>5577<212>DNA<213>G4噬菌體突變基因序列<400>
權利要求
1.一種人工合成的G4噬菌體，其特征在于所述G4噬菌體的DNA序列為SEQ ID NO:1所示的第一序列。
2.如權利要求1所述的G4噬菌體，其特征在于所述第一序列由SEQID N0:2所示的第二序列突變而成，所述突變位點位于所述第二序列從5’端起的第3016個核苷酸、第3328個核苷酸、第3358個核苷酸，其突變結果分別為由t突變為a、由t突變為C、由t突變為C。
3.—種權利要求1或2所述的G4噬菌體在治療大腸埃希菌引起的感染性疾病上的應用。
4.一種權利要求1或2所述的G4噬菌體在防控食品中大腸埃希菌污染上的應用。
5.一種權利要求1或2所述的G4噬菌體在消殺大腸埃希菌病原菌上的應用。
6.一種組合物，其特征在于包括權利要求1或2所述的G4噬菌體作為活性成分。
7.如權利要求6所述的組合物，其特征在于所述組合物被用作抗生素。
8.一種食品添加劑，其特征在于包括權利要求1或2所述的G4噬菌體作為活性成分。
9.一種清潔劑或消毒劑，其特征在于包括權利要求1或2所述的G4噬菌體作為活性成分。
全文摘要
本發明公開了一種人工合成的G4噬菌體及其應用，所述G4噬菌體的DNA序列為SEQ ID NO1所示的第一序列。所述第一序列由SEQ ID NO2所示的第二序列突變而成，所述突變位點位于所述第二序列從5’端起的第3016個核苷酸、第3328個核苷酸、第3358個核苷酸，其突變結果分別為由t突變為a、由t突變為c、由t突變為c。基于G4噬菌體特異性裂解細菌的特性，可以殺死具有耐藥性的大腸埃希菌，同時能夠防止菌株進化和耐藥毒株的產生，進而能夠有效增加大腸埃希菌的致死率。
文檔編號A61P1/00GK102994457SQ201110273749
公開日2013年3月27日 申請日期2011年9月15日 優先權日2011年9月15日
發明者蔡志明, 楊銳林, 唐愛發, 劉宇辰, 韓永華, 葉藝旺, 段永剛 申請人:蔡志明, 楊銳林, 唐愛發, 劉宇辰, 韓永華, 葉藝旺, 段永剛