專利名稱：A型肉毒毒素的液態產品的制作方法
技術領域：
本發明涉及A型肉毒毒素的液態產品和保存肉毒毒素效價的方法，更確切地說，涉及利用右旋糖溶液的A型肉毒毒素的新液態產品和保存A型肉毒毒素效價的方法。肉毒毒素(botulinumtoxin)是肉毒桿菌(Clostridum botulinum)病毒產生的一種蛋白質，非可逆地附在突觸前神經終端，以抑制神經接合部分泌乙醢膽堿，從而阻止肌肉的收縮，即起肌肉松弛的效果。另外，肌肉被露在毒素后2天之內在其外側開始造出附隨的無髓鞘神經分支，這些神經分支在肌肉纖維的周圍形成新的肌肉神經接合。基于這個理由，為了保持理想的臨床效果，每隔3-6個月需要反復注射。基于這些藥理性質，目前肉毒毒素的肌肉注射使用在各種神經肌肉疾病，且其應用范圍正在逐步擴大。于免疫學上的特征，肉毒毒素存在八種(A，B，Cl，C2，D，E，F，G)血清型 (serotype)，據報道其中A型的效果最好，且本發明是涉及A型肉毒毒素的新液態產品和保存A型肉毒毒素效價的方法。背境技術肉毒毒素是人類知曉的最致命的自然生物學作用劑。肉毒毒素的定量注入，例如利用在以提供肌肉麻痹而治療過于敏感的骨骼肌為特征的神經肌肉性障礙，并以A型肉毒毒素治療的癥狀有面部痙攣、成人疾病痙攣性斜頸、肛裂、眼瞼痙攣、腦性麻痹、頸部肌張力異常、偏頭痛、斜視、顳顎關節障礙及各種肌肉痙攣等。近來使用在如皺紋、面部肌肉痙攣、收縮治療及面部整形等。到現在為止，作為如皺紋、肌肉張力、偏頭痛、汗液分泌過多、以及上述癥狀等的各種臨床癥狀治療劑的現有肉毒毒素，尤其為了長時間保持A型肉毒毒素產品的保存期限，添加白蛋白或明膠等的穩定劑后以凍干粉的形態上市銷售。然而，上述粉末形態的現有產品在臨床上必須以生理食鹽水加以稀釋后放入注射器才能使用。因此，上述現有產品的使用不只麻煩，在以生理食鹽水稀釋的過程中發生污染和誤差的可能性高，并含有從人的血清中提取的白蛋白蛋白質或從牛中提取的明膠蛋白質而不能完全排除被愛滋病、瘋牛病等病毒交叉感染的可能性，此外，蛋白質的含量越是增力口，發生抗體形成或過敏反應的可能性也隨著增加而在臨床對患者使用時，存在不能確保100%安全性的問題。此外，使用上述現有產品時，必須以生理食鹽水稀釋，但因稀釋后其效價繼續減少(稀釋同時效價約減少50% )，必須在稀釋后4小時內使用，更是因效價不穩定而存在其治療結果不一致的問題。而且，改進上述現有技術問題的技術已經揭示在韓國專利申請第10-2008-0049914號，但在上述韓國專利申請第10-2008-0049914號揭示的“改進肉毒毒素穩定性的藥物學液體構成”是由肉毒毒素、多乙氧基醚20 (polysorbate 20)、及蛋氨酸、依需要選擇的異白氨酸組成，因其由多種成分組成，不只提高制造成本，且構成成分中還包含多乙氧基醚20環境荷爾蒙，由此確定實際廣品很難上市。

發明內容
以解決上述現有技術問題，本發明的目的在于提供以右旋糖溶液為穩定劑及保存劑添加在A型肉毒毒素，使A型肉毒毒素的效價不會減少，且以100%的效價長期保存的方法。本發明的另一目的是不以白蛋白或明膠蛋白質作為穩定劑而完全排除被病毒交叉感染的可能性。此外，本發明的另一目的是提供不使用對人體有害的多乙氧基醚20環境荷爾蒙，而使用對人體無害的右旋糖溶液作為穩定劑及保存劑的A型肉毒毒素。

此外，本發明的另一目的是以右旋糖溶液作為天然防腐劑及穩定劑，使A型肉毒毒素在液態狀態下效價沒有任何減少，并在2-8 °C低溫下可長期保管分銷促成商業化。為了實現上述目的，本發明人經長久多次反復實驗，使用對人體無害的右旋糖溶液作為穩定劑及保存劑，并確認能使A型肉毒毒素的效價能長期保存不變，從而完成本發明。本發明的主要特點是在A型肉毒毒素上添加右旋糖溶液。在本發明的特點是用作穩定劑及保存劑的右旋糖溶液濃度是6_12%，較佳是8-10%。根據本發明提供的A型肉毒毒素的液態產品是在A型肉毒毒素上添加右旋糖溶液，并以右旋糖溶液接觸含有上述A型肉毒毒素的容器內壁一邊慢慢添加，一邊混合溶解來制造的。根據本發明提供的A型肉毒毒素的液態產品的特點是每A型肉毒毒素IOOunit含右旋糖溶液2-6ml，較佳是3 5ml。根據本發明提供的A型肉毒毒素的液態產品的特點是在治療疾病時，為了緩和疼痛依需要可包含例如利多卡因、丁卡因、地布卡因、或普魯哌卡因(provacaine)等麻醉劑。根據本發明，第一特點，在A型肉毒毒素的制造步驟中，添加右旋糖溶液可生產使用液態產品；第二特點，A型肉毒毒素和右旋糖溶液生產成套裝產品，治療時可混合溶解兩種產品使用；第三特點，現有的A型肉毒毒素產品(保妥適)，以右旋糖溶液稀釋使用，可避免效價的減少；尤其是稀釋使用后的剩余產品，并不減少效價，可長期保管使用。據此，根據本發明的A型肉毒毒素的液態產品，因以右旋糖溶液作為穩定劑及保存劑添加于A型肉毒毒素，其效價不會減少且保持100%不變，具有長期(12-15個月)保管的優點。根據本發明，因為不以白蛋白或明膠等蛋白質作為穩定劑，具有制造時可完全排除被愛滋病、瘋牛病等病毒交叉感染的可能性之優點。另外，根據本發明，A型肉毒毒素和右旋糖溶液以液態產品形式生產保存，治療時無須借助生理食鹽水可直接使用，不僅具有容易使用的優點，還具有可避免在現有技術上以生理食鹽水稀釋過程中減少效價的優點.在本發明使用的右旋糖溶液作為天然防腐劑及穩定劑，具有使A型肉毒毒素在液態狀態下效價沒有任何減少且在2-8°C低溫下可長期(12-15個月)保管分銷，且保持效價不變，治療結果均無偏差保持一定的優點。根據本發明，A型肉毒毒素的液態產品不僅構成簡單，且治療時不須使用如生理食鹽水的溶媒，其具有使用容易且生產成本便宜的優點。根據本發明具有在A型肉毒毒素的制造步驟中，添加右旋糖溶液可容易生產液態產品的優點；A型肉毒毒素和右旋糖溶液生產成套裝產品，治療時可混合兩種產品使用的優點；及現有的A型肉毒毒素產品(保妥適)，以右旋糖溶液稀釋使用，可避免效價的減少；尤其是稀釋使用后的剩余產品，并不減少效價，可長期保管使用的優點。
具體實施例方式本發明涉及肉毒毒素的液態產品和保存肉毒毒素效價的方法，更確切地說，涉及利用右旋糖溶液的A型肉毒毒素的液態產品和保存A型肉毒毒素效價的方法。本發明的A型肉毒毒素的液態產品，以A型肉毒毒素和右旋糖溶液構成為特點，且 藥物治療時，根據疾病為了緩和疼痛可多包含例如利多卡因、丁卡因、地布卡因、或普魯哌卡因(provacaine)等麻醉劑。本發明的A型肉毒毒素的液態產品包含的右旋糖是輸液，對人體無害的成分，且以類似體液的滲透壓濃度制造，使得注射時減少疼痛亦可防止肌肉組織的損傷。另外，右旋糖是自然防腐劑及保存劑，并具有穩定蛋白質的作用，使得A型肉毒毒素的液態產品的效價不會減少而可長期保管分銷。此外，本發明不添加為了保持現有A型肉毒毒素產品的保存期限而使用的白蛋白或明膠等的穩定劑，不僅可完全排除交叉感染的可能性，并省略以現有生理食鹽水稀釋的過程，亦可完全避免稀釋過程中發生的效價減少及污染。本發明的A型肉毒毒素的液態產品的特點是每A型肉毒毒素IOOunit含右旋糖溶液2-6ml，較佳是3-5ml，且右旋糖溶液的濃度是6_12 %，較佳是8_10 %。一般來講，肉毒毒素以凍干的狀態銷售，在臨床上使用A型肉毒毒素時，對能使用的期限制造商建議以0. 9%的生理食鹽水稀釋后4小時之內使用，其理由是時間過后A型肉毒毒素的效價會減少，不能取得期待的效果。可是A型肉毒毒素昂貴，對患者使用的量也不多，在實際臨床上的實情是冷藏保管1-2周使用。因此，本發明考慮這些實情研究開發，結果了解了省略以生理食鹽水稀釋的現有技術過程，提供只有A型肉毒毒素和右旋糖溶液溝成本發明的液態產品，且效價保持100%不變且可長期保管一年以上(例如12個月至15個月)。根據本發明的實施例，詳細說明于下文。實施例I(A型肉毒毒素液態產品的制造)在A型肉毒毒素添加右旋糖溶液，并均勻混合溶解，準備老鼠實驗，在每A型肉毒毒素IOOunit添加10%右旋糖溶液5ml制造A型肉毒毒素的液態產品。(A型肉毒毒素液態產品的效價評價)對如上述制造根據本發明的A型肉毒毒素液態產品，經過一定時間后，評價了其效價。肉毒毒素的單位以unit表示,這是指腹腔注射老鼠的致死量(L/D 50)。Iunit表示以I老鼠單位(lmouse unit)重20g老鼠致死率50%的效價。
按80只實驗動物每次10只，把根據本發明制造的A型肉毒毒素液態產品，依即時、2周后、4周后、8周后、16周后、24周后、48周后、60周后，分別在老鼠腹腔內注射2unit(0. 2ml)后評價效價的結果，發現各情況效價均沒有減少且保持100%不變。此外，把用后剩余的本發明的液態產品，以上述相同的方法做實驗評價效價的結果，發現效價一樣的毫無減少。上述結果是由于本發明中以穩定劑及保存劑添加的右旋糖溶液的獨特作用，是明確的重大發明。實施例2本實施例是顯示本發明和現有技術效果的實驗結果，本實驗分成對照I群、實驗I群(現有技術)、實驗2群(本發明)及對照2群做如下實驗，在各實驗群10只老鼠中72小時后評價死亡的個數。(實驗I、老鼠腹腔注射Iunit) 對照I群實例，在老鼠腹腔注射生理食鹽水0. Iml,結果10只老鼠中72小時后死亡的個數是零(0);實驗I群(現有技術)實例，注射以生理食鹽水稀釋的保妥適(botox) Iunit (0. Iml),結果死亡個數是零(0);實驗2群(本發明)實例,注射以10%右旋糖溶液稀釋的A型肉毒毒素Iunit (0. Iml)，結果死亡個數是4只；對照2群實例，注射10%右旋糖溶液0. 1ml，結果死亡個數是零(0)。(實驗2、老鼠腹腔注射2unit)對照I群實例，在老鼠腹腔注射生理食鹽水0. 2ml，結果10只老鼠中72小時后死亡的個數是零；實驗I群實例，注射以生理食鹽水稀釋的保妥適2unit (0. 2ml)，結果死亡個數是4只；實驗2群實例，注射以10%右旋糖溶液稀釋的A型肉毒毒素2unit (0. 2ml)，結果死亡個數是10只；對照2群實例，注射10%右旋糖溶液0. 2ml，結果死亡個數是零。(實驗3、把實驗2中使用的溶液在4°C冷藏保管2周后，老鼠腹腔注射2unit)對照I群實例，在老鼠腹腔注射生理食鹽水0. 2ml，結果10只老鼠中72小時后死亡的個數是零；實驗I群實例，注射以生理食鹽水稀釋的保妥適2unit (0. 2ml)，結果死亡個數是零；實驗2群實例，注射以10%右旋糖溶液稀釋的A型肉毒毒素2unit (0. 2ml)，結果死亡個數是10只；對照2群實例，注射10%右旋糖溶液0. 2ml，結果死亡個數是零。實施例3(額頭皺紋治療效果的比較實驗)適用部位現有產品(以生理食鹽水2ml稀釋現有保妥適的溶液)實例，在人的右眉毛內側上眉角處上方2. 5cm的位置設定注射刺入點的部位及由此注射刺入點向外劃延長線在距3cm的位置再設定一個注射刺入點的部位；本發明的產品(以10%右旋糖溶液4ml稀釋A型肉毒毒素的溶液)實例，在人的左眉毛處以上述同樣的方式在設定注射刺入點的部位。注射方法現有產品(以生理食鹽水2ml稀釋現有保妥適的溶液)實例，把上述溶液在上述右額頭上設定的兩個注射刺入點分別注射2. 5unit (0. 05ml)，且垂直于皮膚表面以2-3mm的深度實施注射；本發明的產品(以10%右旋糖溶液4ml稀釋A型肉毒毒素的溶液)實例，以與上述現有產品的注射方法相同的方法，把上述本發明的產品在上述左額頭上設定的兩個注射刺入點分別注射I. 25unit(0. 05ml)(第I次注射)。然后，在治療效果充分顯示的2周后，比較左右額頭皺紋的治療效果，且第I次注射的實驗結果如下表I。6個月后，把現有產品(以生理食鹽水2ml重新稀釋現有保妥適的溶液)在右額頭上的上述兩個注射刺入點分別注射2. 5unit(0. 05ml);把第I次注射使用剩余的本發明的產品，經6個月在4°C冷藏保管，在左額頭上設定的上述兩個注射刺入點分別注射
I.25unit (0. 05ml)(第2次注射)。然后，2周后比較左右額頭皺紋減少的效果，且第2次注射(第I次注射后6個月)的實驗結果如下表I。再過6個月后(即12個月后)，把現有產品(以生理食鹽水2ml重新稀釋現有保妥適的溶液)在右額頭上的上述兩個注射刺入點分別注射2. 5unit (0.05ml);把第I次注射使用剩余的本發明的產品，經12個月在4°C冷藏保管，在左額頭上設定的上述兩個注射刺入點分別注射I. 25unit (0. 05ml)(第3次注射)。然后，2周后比較左右額頭皺紋減少的效果，且第3次注射(第I次注射后12個月)的實驗結果如下表I。
表I
使用的溶液使用的溶液右側(；現有左右側治療效__(右額頭)__(左額頭)產品)效果果比較
現有產品本發明的產品笛^ (以生理食鹽水(以10%右旋糖溶皺紋減少效果^ ^ m 2ml稀釋現有保液4ml稀釋A型肉良好 @ #__妥適的溶液)毒毒素的溶液)___
^ ,第I次注射時皺紋減少效果
(兎I次汪射后同上/擊m千,丨、片、亦^同等
使用剩余的裕攸良好 6個月)_____
^,第I次注射時皺紋減少效果
r±使用剩余的猶良好_
12個月)_____皺紋減少效果分類分類成無效果、效果不足、效果良好、效果過多4個等級。實驗結果評價 I、左側相對于右側使用了 50 %的效價，但左右側的臨床治療效果相同。通常，注射
I.25unit時效果不足但以10%右旋糖溶液稀釋的本發明產品顯出良好的臨床效果。這就證明右旋糖溶液是保持A型肉毒毒素效價100%的強力穩定劑。2、以10%右旋糖溶液稀釋的本發明產品經6個月、12個月后顯出與初次同等的效果。這就證明右旋糖溶液不僅是穩定劑，而且也是保存劑，把這些結合到A型肉毒毒素的技術性構成及技術性思想是本發明的特點。3、以生理食鹽水稀釋的現有方法稀釋時，做完稀釋就立即減少50%的效價且再繼續減少至經過2周后，在臨床上不能使用。以上所述對本發明做了詳細的說明，并非限制本發明于此，故舉凡運用本發明的思想及范圍所為之多種變形，均應同理包含于本發明之專利范圍內。
權利要求
1.一種A型肉毒毒素的液態產品，在含有A型肉毒毒素的容器里添加右旋糖溶液，每A型肉毒毒素IOOunit以6-12%右旋糖溶液2-6ml的量接觸上述容器的內壁一邊添加，一邊混合溶解，使A型肉毒毒素保持100%的效價不變，并具有12-15個月的保存期間。
2.如權利要求I所述的A型肉毒毒素的液態產品，還包含如利多卡因、丁卡因、布比卡因、普魯哌卡因或地布卡因的麻醉劑。
3.如權利要求I所述的A型肉毒毒素的液態產品，其中，上述A型肉毒毒素和上述右旋糖溶液生產成套裝產品，使用時混合溶解兩種產品。
4.使用為A型肉毒毒素的穩定劑及保存劑的右旋糖溶液。
全文摘要
本發明涉及肉毒毒素的液態產品及保存肉毒毒素效價的方法，更確切地說，涉及利用右旋糖溶液的A型肉毒毒素的液態產品。根據本發明的A型肉毒毒素的液態產品與現有的A型肉毒毒素產品不同，其特點是為了保持保存期間不添加如白蛋白或明膠等的穩定劑而完全排除被愛滋病、瘋牛病等病毒交叉感染的可能性；使用時省略了以生理食鹽水稀釋的過程而沒有污染并保持100％的效價不變，使得治療結果一致；且不含現有液態產品制造時所使用的環境荷爾蒙而非常安全。
文檔編號A61K31/445GK102793661SQ20121012752
公開日2012年11月28日 申請日期2012年4月26日 優先權日2011年5月25日
發明者咸鐘旭 申請人:咸鐘旭