專利名稱：乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種磷脂復合物及其制備方法，特別涉及一種去甲斑蝥素衍生物的磷 脂復合物及其制備方法，屬醫藥制備技術領域。
背景技術：
去甲斑蝥素為斑蝥素的合成衍生物，是由我國首先開發的治療肝癌的新藥，主要 用于原發性肝癌的治療。文獻“去甲斑蝥素的藥學研究與臨床應用進展”(吳建梅等，中國 藥學雜志，2002，37 (8) :566 一 569)研究表明，由于臨床應用時去甲斑蝥素的泌尿系統毒性 較大，其臨床最大用藥劑量有嚴格限制。文獻“肝靶向去甲斑蝥素修飾物的合成及其納米粒 的制備”(胡展紅等，中國藥學雜志，2009，44 (9) 679-684)和文獻“乳糖化-去甲斑蝥素納 米粒的肝靶向抗癌活性研究”(胡展紅等，中草藥，2010,41(12))中，公開了一種利用乙二 胺為連接臂，將去甲斑蝥素與乳糖酸偶聯，合成新的化合物乳糖化-去甲斑蝥素，其在體內 被肝細胞的去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycoprotein receptor, ASGP-R)特異性識別，從 而提高藥物肝靶向性，降低藥物的腎毒性。但是，將乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂制備成復合 物，目前國內外未見報道。

發明內容
針對現有技術的不足，本發明提供一種能有效改善乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的 乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物，且提供一種制備該復合物工藝簡單，生產成本低，產率高 的的方法。為達到上述目的，本發明采用的技術方案是提供一種乳糖化-去甲斑蝥素磷 脂復合物，乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的質量比為1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量為 700 800。其中，所述磷脂包括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂；磷脂優選平均分子量 為750的大豆卵磷脂。所述乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的質量比優選為1:1.5。所述乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物的制備方法，包括如下步驟
(1)將磷脂溶于適量溶劑A中，攪拌溶解；所述溶劑A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氫 呋喃及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；
(2)稱取與磷脂的質量比為1 1 1 5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入適量溶劑B中，超 聲分散；所述溶劑包括甲醇、乙醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；溶劑B的用量 為乳糖化-去甲斑蝥素的反應濃度為5 100mg/ml ；
(3)將乳糖化-去甲斑蝥素混懸液加至磷脂溶液中，在溫度為25 35°C的條件下攪
拌；
(4)將所得溶液過濾，濾液旋蒸除去溶劑，真空干燥，得到黃色粉末狀乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂復合物。
其中，所述溶劑A與溶劑B的用量體積比為1:1 1:5。本發明的原理是由于乳糖化-去甲斑蝥素的高水溶性和低滲透性，導致其口服 生物利用度低，使其臨床使用具有局限性，為改善高水溶性藥物的脂溶性，將藥物與磷脂按 一定配比在非質子傳遞體系溶劑中結合而形成復合物，通過制備藥物磷脂復合物，其理化 性質和生物學特性將發生很大改變，可改善藥物的脂溶性進而提高其在體內的吸收。具體 地說，其依據是(1)乳糖化-去甲斑蝥素抗癌作用的發揮在于其結構中氧橋結構的完整， 并且其末端的半乳糖殘基可被肝臟表明的去唾液酸糖蛋白受體專一性識別，達到肝臟的主 動靶向治療作用。(2)乳糖化-去甲斑蝥素結構中有大量羥基存在，磷脂可與其發生氫鍵締 和，反應容易進行，產率高，終產物保留了乳糖化-去甲斑蝥素的藥效基團。(3)利用藥物極 性基團與磷脂締和，使藥物極性基團受到屏蔽，達到提高乳糖化-去甲斑蝥素脂溶性的目 的。本發明所得復合物在HPLC上顯示與乳糖化-去甲斑蝥素相同的保留時間，說明形 成的是復合物，而不是新的化合物，但該復合物與乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂的物理混合 物在紅外光譜(IR)、差熱分析(DSC)及核磁共振分析(1H-NMR)中存在明顯差別頂中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1處的酚-OH寬峰帶已與磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1處的-C=O吸收峰也向低波數移動至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂復 合物的過程中，磷脂的-C=O與乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定強度的締和。磷脂復合 物與物理混合物-C=O吸收峰位置的差異，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指紋 區內磷脂復合物與物理混合物的差別，都可以說明制備的磷脂復合物并不是兩種物質的簡 單物理混合，其形成過程中有化學鍵締和；DSC中混合物在157°C 173°C之間表現出磷脂 的熱力學特性，但在189°C有較強烈的吸收峰，考慮為藥物吸熱峰。與藥物及磷脂相比，磷脂 復合物的DSC圖譜發生了明顯改變，藥物的吸熱峰消失，在119°C 182°C之間出現了多個 明顯的吸熱峰，提示形成磷脂復合物后，藥物和磷脂的熱力學性質已被明顯改變；1H-NMR中 顯示，乳糖化-去甲斑蝥素糖基上的各氫向高場發生了部分位移，推測是糖基上的羥基與 磷脂中的氫鍵供體結合，形成的磷脂復合物中各共軛基團使得電子云密度發生了改變。以 上四種圖譜說明了所制備的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物不是新生成的化合物，但也不 同于其二者的簡單物理混合物，而是以一種復合物的形式存在。由于上述技術方案的運用，本發明技術方案的優點在于
(1)制備乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物后，能夠有效提高藥物的脂溶性，從而改善口 服給藥后其在體內的吸收，提高生物利用度。(2)所用原料成本低，反應易于進行，產率高，容易實現工業化大生產；在制備過程 中的有毒物質二氯甲烷及甲醇都可通過旋蒸除盡；反應復合物率達到97. 2%，終產物不需 要進一步純化。因此，生產成本低，制備工藝簡單，終產物產率高，純度高，容易實現工業化 大生產。


圖1是本發明實施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素與混合物的HPLC分析結果比較； 圖2是本發明實施例提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物與混合物的頂分析結果
比較；圖3是本發明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物與混合物的DSC分析結果比較； 圖4是本發明提供的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物與混合物的UV分析結果比較。
具體實施例方式下面結合附圖和實施例對本發明作進一步描述。實施例一
稱取大豆磷脂0. 075g溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化_去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超聲分散后，加入到大豆磷脂溶液中，35°C水浴攪拌2小時，過 濾，濾液蒸去溶劑，真空干燥48小時，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物0. 122g(產率 97. 2%)。采用流動相條件為乙腈pH3. 2磷酸水=10:90對乳糖化-去甲斑蝥素，磷脂，乳糖 化-去甲斑蝥素磷脂復合物及物理混合物進行HPLC分析，其結果參見附圖1，圖中，a為乳 糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復合物，d為物理混合物；由圖1的結果表明，乳糖化-去 甲斑蝥素及其磷脂復合物在此條件下的色譜行為一致，保留時間為5. 188min,這說明乳糖 化-去甲斑蝥素與磷脂形成的是一種復合物，而不是新的化合物。對乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物及混合物進行紅 外掃描，其結果參見附圖2。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復合物，d為 物理混合物；圖a顯示了的乳糖化-去甲斑蝥素的特征吸收峰1. -0H, 3359. 98957^1 ； 2. -C=O, 1694. 31676cm-1 ；圖 b 顯示 了磷脂的特征吸收峰1. -0H, 3423. 64035cm-1; 2. -CH2, 2926. 00699cm-1 ； 3. -C=O, 1732. 07269cm-1 ；4. -P=O, 1234. 43934cm-1 ；圖 c 中乳糖 化-去甲斑蝥素在3359. 98957CHT1處的酚-OH寬峰帶已與磷脂的-OH吸收峰重合，而磷脂 在1732. 07269cm"1處的-C=O吸收峰也向低波數移動至1695. 42528CHT1，提示在形成磷脂復 合物的過程中，磷脂的-C=O與乳糖化-去甲斑蝥素-OH形成了一定強度的締和。磷脂復合 物與物理混合物-C=O吸收峰位置的差異，即1695. 42538CHT1和1737. 85913cm"1,以及指紋 區內磷脂復合物與物理混合物的差別，都可以說明制備的磷脂復合物并不是兩種物質的簡 單物理混合，其形成過程中有化學鍵締和。對乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂、乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物及混合物進行差 示熱分析，其結果參見附圖3。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復合物，d為 物理混合物；圖3結果表明，乳糖化-去甲斑蝥素在190°C左右有一強烈的吸熱峰，表明藥 物熔點為190°C。磷脂為一混合物，無明顯的熔點，在127°C 212°C內都有不明的吸熱峰 出現。物理混合物在157°C 173°C之間表現出磷脂的熱力學特性，但在189°C有較強烈的 吸收峰，考慮為藥物吸熱峰。與藥物及磷脂相比，磷脂復合物的DSC圖譜發生了明顯改變， 藥物的吸熱峰消失，在119°C 182°C之間出現了多個明顯的吸熱峰，提示形成磷脂復合物 后，藥物和大豆磷脂的熱力學性質已被明顯改變，磷脂復合物不是兩種物質的簡單混合物。對乳糖化-去甲斑蝥素、磷脂及乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物進行核磁 共振分析，其結果參見附圖4。圖中，a為乳糖化-去甲斑蝥素，b為磷脂，c為復合 物，圖4結果表明，乳糖化-去甲斑蝥素1H-NMR (400MHz，氘代DMSO)，δ (ppm) :1.619 (4H, s, 1-H) ； 2. 982 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3.146 (1H, t, J=6. 8, 5-H) ； 3. 236 (1H, t, J=6. 4，5-H) ； 3. 321 (4H, m, 12—H, 15—H, 10-2H) ； 3. 399 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 491 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 579 (2H, m, 13-H, 14-H) ； 3. 672 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 3. 961 (1H, s, 7-H) ； 4. 055 (1H, d, J=4. 4，6-H) ； 4. 255 (1H, d, J=6. 4，11-H) ； 4. 663 (2H, s, 2—H)；磷脂復合物 1H-NMR (400MHz, 氘代 DMS0)，δ (ppm) 1.629 (4H, s, 1-H) ； 2. 99 (2H, q, J=7. 2, 3-H) ； 3. 425 (4H, m, 12-H, 15-H, 10-2H) ； 3. 505 (2H, t, J=4. 4，4_H) ； 3. 518 (2H, t, J=5. 6，16-H) ； 3. 613 (2H, m ，13-H, 14-H) ； 3. 685 (2H, m, 8_H, 9-H) ； 0. 853 (4H, s, 6-H, 4_H)。實施例二
稱取大豆磷脂0. 05g溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化-去甲斑蝥素 0. 05g，加入IOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，25°C水浴攪拌1小時，過濾，濾液 蒸去溶劑，真空干燥48小時，得Lac-NCTD磷脂復合物0. 093g (產率93. 4%)。實施例三
稱取大豆磷脂1. Og溶于IOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化-去甲斑蝥素0. 5g， 加入IOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，30°C水浴攪拌1. 5小時，過濾，濾液蒸 去溶劑，真空干燥48小時，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物1. 42g (產率94. 7%)。實施例四
稱取大豆磷脂50. Og溶于IOOmL 二氯甲烷中，攪拌溶解；稱取乳糖化_去甲斑蝥素 10. 0g，加入IOOmL甲醇中，超聲分散，加至大豆磷脂溶液中，35°C水浴攪拌2小時，過濾，濾 液蒸去溶劑，真空干燥48小時，得乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物57. 84g (產率96. 4%)。
權利要求
1.一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物，其特征在于乳糖化-去甲斑蝥素與磷脂的 質量比為1:1 1:5 ；所述磷脂的平均分子量為700 800。
2.根據權利要求1所述的一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物，其特征在于磷脂包 括大豆卵磷脂或蛋黃卵磷脂或合成磷脂；磷脂優選平均分子量為750的大豆卵磷脂。
3.根據權利要求1所述的一種乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物，其特征在于乳糖 化-去甲斑蝥素與磷脂的質量比優選為1:1.5。
4.一種制備如權利要求1所述的乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物的方法，其特征在于 包括如下步驟(1)將磷脂溶于適量溶劑A中，攪拌溶解；所述溶劑A包括氯仿、二氯甲烷、甲醇、四氫 呋喃及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；(2)稱取與磷脂的質量比為1:1 1:5的乳糖化-去甲斑蝥素，加入適量溶劑B中，超 聲分散；所述溶劑包括甲醇、乙醇及其含有上述溶劑的各種比例的混合溶劑；溶劑B的用量 為乳糖化-去甲斑蝥素的反應濃度為5 100mg/ml ；(3)將乳糖化-去甲斑蝥素混懸液加至磷脂溶液中，在溫度為25 35°C的條件下攪拌；(4)將所得溶液過濾，濾液旋蒸除去溶劑，真空干燥，得到黃色粉末狀乳糖化-去甲斑 蝥素磷脂復合物。
5.根據權利要求4所述的一種制備乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物的方法，其特征在 于溶劑A與溶劑B的用量體積比為1 1 1 5。
全文摘要
本發明公開了一種利用磷脂與乳糖化-去甲斑蝥素的大量-OH形成氫鍵締和，得到乳糖化-去甲斑蝥素磷脂復合物，該新復合物在保留乳糖化-去甲斑蝥素原抗癌活性的同時，顯著改善其脂溶性，因此能改善其在體內的吸收，提高生物利用度。它是利用氫鍵將乳糖化-去甲斑蝥素和磷脂連接起來得到的新化合物，具有較好的脂溶性。其制備方法簡單，產率高，具有保持原有抗腫瘤作用的基礎上，提高藥物體內吸收，提高治療肝癌的療效的作用。
文檔編號A61P35/00GK102068702SQ20101061892
公開日2011年5月25日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者周奕, 張學農 申請人:蘇州大學