專利名稱：達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物及制備方法
技術領域：
本發明涉及到具有達瑪烷為母環結構的新的人參低元醇衍生物及其制備方法，以及此系列化合物作為藥物的應用。
三七皂甙具有多種重要生理活性，如對心臟血管疾病作用代謝，增加免疫作用等，但作用不夠強。又且分離各種皂甙單體的技術，不能適用于生產。使用總皂甙由于組成的皂甙單體不一致，多糖甙性疚不穩定導造成療效不穩定。所以分離三七中二種主要皂甙元人參二醇及人參三醇半合成性質穩定的衍生物，以增強其效果，穩定其療效，適用于生產及臨床應用，很有必要。
本發明的目的是提供一系列具有抗癌活性而且毒性低的化合物、化合物的制備方法以及作為藥物的應用。
本發明所述的達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物具有式Ⅰ的通式，式Ⅰ為 式Ⅰ中，R＝H、COCH2CH2COOK，COCH2CH2COONa、 (簡稱Ⅱ)，R′＝Ⅱ、H、OCOCH2CH2COONa。當R＝H時，R′＝Ⅱ，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇葡萄糖甙，分子式C36H62O9，白色晶體。當R＝COCH2CH2COOK時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇琥珀酸鉀，分子式C34H55O6K，白色晶體，360℃以上變色。當R＝COCH2CH2COONa時，R′＝OCOCH2COONa，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇琥珀酸鈉，分子式C38H58O10Na2，白色晶體，300℃以上變色。當R＝Ⅱ時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇葡萄糖甙，分子式C36H62O8，白色晶體，熔點223-226℃。
人參三醇葡萄糖甙C36H62O9的制備方法為取人參三醇4-5g，干燥乙醚90-190ml，二氯乙烷85-120ml混合，加熱溶解，加乙酰溴代葡萄糖6-12g，回流攪拌4-10小時，再加入碳酸銀4-7.9g回流攪拌4-10小時，過濾，濾液回收溶劑，殘余物溶于甲醇，過濾，濾液加入蒸餾水至溶液渾濁，再加入6-12ml三乙胺，室溫攪拌8-14小時，回收溶劑至干，通過硅膠柱層析，以氯仿-甲醇9∶1沖洗，即得成品。
人參二醇琥珀酸鉀C34H55O6K的制備方法a將人參二醇，琥珀酸酐，吡啶按1-3∶5-6∶15-20的比例混合，加熱攪拌回流，室溫放冷，傾入冷水中，有沉淀析出，過濾得灰白色沉淀物，將沉淀物溶于乙醇中，加熱溶解，加活性炭脫色，減壓過濾，回收乙醇，放冷，有白色簇狀結晶析出，濾干，得人參二醇琥珀酸;b、人參二醇琥珀酸加入丙酮中攪拌溶解，滴加KOH無水乙醇溶液，攪拌直至沉淀完全，靜置，過濾，沉淀物用丙酮洗滌，減壓過濾，即得成品。
人參三醇琥珀酸鈉C38H58O10Na2的制備方法為a、將人參三醇、琥珀酸酐、吡啶按1-2.5∶3-6∶9-12的比例混合，在134-135℃的油浴中回流3-5小時，然后將反應混合物傾入水中，靜置、過濾、干燥，得灰白色固體，將此固體溶于乙醇中，以活性炭脫色，過濾，濾液傾入水中，靜置，濾取析出物，制得人參三醇3，6-二琥珀酸。
b、將人參三醇-3，6-二琥珀酸溶于丙酮中，攪拌滴入NaOH甲醇溶液至沉淀完全，過濾，用丙酮洗滌，干燥，得成品。
本發明所述的人參三醇葡萄甙糖、人參二醇琥珀酸鉀、人參三醇琥珀酸鈉以及人參二醇葡萄糖甙(簡稱B′3)經實驗，具有較強的抑瘤效應和殺傷癌細胞的能力。上述化合物的人癌細胞體外培養殺傷試驗數據見表1，結果表明，上述化合物具有殺傷肺腺癌細胞的作用，并有明顯的濃度-效應依賴關系，最終濃度為100μg/ml以上時，殺傷率可超過50%。B′3對Lewis肺癌抑瘤作用如表2所示，結果表明連續給藥7天對Lewis肝癌有明顯的抑瘤作用，50mg/kg組抑瘤率為53.3%，達到規程要求。在同等條件下與順鉑相比其抑瘤作用稍低于順鉑。B′3對H22肝癌腹水型延壽作用如表3所示，結果表明，連續給藥7天H22肝癌有明顯延壽作用，50mg/kg組能延壽155.3%，達到規程要求，在同等條件下與順鉑相比，其抗腫瘤作用與化療藥相當。B′3對小鼠艾氏EAS抑瘤作用如表4所示，結果表明，連續給藥7天，對艾氏EAS有明顯的抑瘤作用，其作用強度與順鉑相當。
本發明所述的達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物分別以12-25mg/ml，可以制成醫藥上可接受的劑型制劑。
實施例1、人參三醇葡萄糖甙的制備人參三醇4.2克、乙酰溴代葡萄糖7.2克、乙醚(干燥)190毫升、二氯乙烷85毫升、碳酸銀7.9克制備方法
人參三醇，干燥乙醚，二氯乙烷混合物加熱溶解，加入乙酰溴代葡萄糖，回流攪拌10小時，加入碳酸銀回流攪拌10小時，過濾，回收溶劑，殘余物用20ml甲醇溶解，濾除不溶物，濾液加水至渾濁(加入水約10-15ml)，加12ml三乙胺攪拌12小時，回收溶劑至干，吸附在5克160-200目硅膠上通過85克硅膠濕法上柱，以9∶1氯仿沖洗，每份50毫升，第10-19份收集人參三醇葡萄糖甙。重0.94克。
2、人參三醇琥珀酸鈉的制備(A)人參三醇-3，6-二琥珀酸的制備4.76克人參三醇和20克琥珀酸酐溶于50ml吡啶中，在134-135℃的油浴中回流3.5小時，然后將反應混合物傾入800ml水中靜置過夜，過濾，干燥，得到6.57克灰白色固體。將此溶于200ml95%乙醇之中，以活性炭脫色，過濾，濾液傾入800ml水中(醇1∶水4-5)，靜置過夜，過濾，濃硫酸真空干燥器內真空干燥，得白色固體5.46克，產率80.8%。
(B)人參三醇琥珀酸鈉的制備3.0克的人參三醇-3.6-二琥珀酸溶于600ml丙醇中，在不斷攪拌下，滴入10ml1N的NaOH甲醇溶液，滴至沉淀完全，繼續攪拌1小時，過濾，真空干燥，得3.13g白色固體。
3、人參二醇琥珀酸鉀的制備人參二醇3克，琥珀酸酐6克，吡啶15毫升，裝入100ml三角錐形瓶中，水浴上攪拌回流，反應2小時，放冷，傾入300毫升冷水中，有沉淀析出，減壓抽濾，得白色沉淀物。TLC反應呈一點，上述反應物溶于200ml(95%)乙醇中，加熱溶解，活性炭適當脫色，減壓抽濾，回收乙醇至約30ml，放冷有白色簇狀針晶析出，抽濾、干燥，得3g產品，產率100%。
TLC條件展開劑CHC13-MeOH(9∶1)顯色劑15%硫酸乙醇溶液，105℃加熱。薄層板硅膠G板。
8克人參二醇琥珀酸置于500ml錐形瓶中，加入400ml丙酮，充分攪拌，緩緩滴入0.5mlKOH乙醇液，共30ml，繼續攪拌20分鐘，靜置片刻，待沉淀完全，減壓過濾，沉淀物用丙酮洗滌3次，每次10ml，沉淀自然干燥，研細，稱重得白色粉末7.5gm，得率94%。
4、人參二醇葡萄糖甙(B′3)的制備(A)溴代四乙酰葡萄糖的制備在500ml的三頸瓶中，裝上攪拌，加入乙酸酐及少許濃硫酸，攪拌情況下，分次加入葡萄糖，控制溫度60-80℃，加完后繼續攪拌30分，冰水冷卻至30℃以下，分次加入紅磷，加完后繼續攪拌30分鐘，30℃以下緩緩滴加Br2，加完后，瓶塞塞好，放冰箱中過夜。加入定量水，以氯仿提取，氯仿層水洗，加入CaC12干燥，過濾，濾液減壓收回氯仿，殘余物無水乙醇中重結晶，真空干燥。
(B)乙酰化B′3制備人參二醇，乙酰化溴代葡萄糖，無水乙醚，二氯乙烷溶液，水浴上加熱到40℃，加入碳酸銀，避光攪拌8小時，過濾，回收溶劑殘余物加20ml甲醇，過濾除去不溶物，蒸干甲醇，上硅膠柱，以石油醚-丙酮8∶2洗脫，得乙酰化B′3。得率約25%。
(3)B′3的制備乙酰化B′3加入甲醇溶解，滴加水至微渾，加入三乙胺，室溫攪拌10小時，蒸干溶劑，乙醇中結晶，薄層檢查B′3及人參二醇，結晶溶于甲醇，通過硅膠柱層析，石油醚-丙酮8∶2洗脫人參二醇，再以氯仿-甲醇9∶1沖洗得B′3，在醋酸乙酯中結晶，得率約10%。
表1.
表2.
權利要求
1.一種達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物，具有式Ⅰ的通式，式Ⅰ為 其特征在于式Ⅰ中，R=H、COCH2CH2COOK、COCH2CH2COONa、 (簡稱Ⅱ)，R′=Ⅱ、H、OCOCH2CH2COONa。
2.按照權利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝H時，R′＝Ⅱ，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇葡萄糖甙，分子式C36H62O9，白色晶體。
3.按照權利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝COCH2CH2COOK時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇琥珀酸鉀，分子式C34H55O6K，白色晶體，360℃以上變色。
4.按照權利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝COCH2CH2COONa時，R′＝OCOCH2COONa，式Ⅰ所表示的化合物為人參三醇琥珀酸鈉，分子式C38H58O10Na2，白色晶體，300℃以上變色。
5.按照權利要求1所述的衍生物，其特征在于當R＝Ⅱ時，R′＝H，式Ⅰ所表示的化合物為人參二醇葡萄糖甙，分子式C36H62O8，白色晶體，熔點223-226℃。
6.按照權利要求2所述的衍生物的制備方法，其特征在于所述的人參三醇葡萄糖甙C36H62O9的制備方法為取人參三醇4-5g，干燥乙醚90-190ml，二氯乙烷85-120ml混合，加熱溶解，加乙酰溴代葡萄糖6-12g，回流攪拌4-10小時，再加入碳酸銀4-7.9g回流攪拌4-10小時，過濾，濾液回收溶劑，殘余物溶于甲醇，過濾，濾液加入蒸餾水至溶液渾濁，再加入6-12ml三乙胺，室溫攪拌8-14小時，回收溶劑至干，通過硅膠柱層析，以氯仿-甲醇9∶1沖洗，即得成品。
7.按照權利要求3所述的衍生物的制備方法，其特征在于人參二醇琥珀酸鉀C34H55O6K的制備方法a將人參二醇，琥珀酸酐，吡啶按1-3∶5-6∶15-20的比例混合，加熱攪拌回流，室溫放冷，傾入冷水中，有沉淀析出，過濾得灰白色沉淀物，將沉淀物溶于乙醇中，加熱溶解，加活性炭脫色，減壓過濾，回收乙醇，放冷，有白色簇狀結晶析出，濾干，得人參二醇琥珀酸;b、人參二醇琥珀酸加入丙酮中攪拌溶解，滴加KOH無水乙醇溶液，攪拌直至沉淀完全，靜置，過濾，沉淀物用丙酮洗滌，減壓過濾，即得成品。
8.按照權利要求4所述的衍生物的制備方法，其特征在于人參三醇琥珀酸鈉C38H58O10Na2的制備方法為a、將人參三醇、琥珀酸酐、吡啶按1-2.5∶3-6∶9-12的比例混合，在134-135℃的油浴中回流3-5小時，然后將反應混合物傾入水中，靜置、過濾、干燥，得灰白色固體，將此固體溶于乙醇中，以活性炭脫色，過濾，濾液傾入水中，靜置，濾取析出物，制得人參三醇3，6-二琥珀酸;b、將人參三醇-3，6-二琥珀酸溶于丙酮中，攪拌滴入NaOH甲醇溶液至沉淀完全，過濾，用丙酮洗滌，干燥，得成品。
9.按照權利要求1所述的衍生物作為藥物的應用，其特征在于以所述的衍生物分別以12-25mg/ml，制成醫藥上可接受的劑型制劑。
全文摘要
本發明涉及到具有達瑪烷為母環結構的新的人參低元醇衍生物及其制備方法，以及此系列化合物作為藥物的應用。本發明所述的人參三醇葡萄糖甙、人參二醇琥珀酸鉀、人參三醇琥珀酸鈉以及人參二醇葡萄糖甙經實驗，具有較強的抑瘤效應和殺傷癌細胞的能力。用本發明所述的達瑪烷型皂甙人參低元醇衍生物分別以12—25mg/ml，可以制成醫藥上可接受的劑型制劑。
文檔編號A61K31/58GK1097194SQ93108189
公開日1995年1月11日 申請日期1993年7月6日 優先權日1993年7月6日
發明者魏均嫻, 陳業高, 張紅彬, 趙愛華 申請人:昆明醫學院