專利名稱：取代的二環[3.3.1]壬烷－2,4,9三酮作為活性藥物成分的制作方法
技術領域：
本發明是涉及取代的二環[3.3.1]壬烷-2，4，9三酮的使用，特別是克魯西(clusianone)或克魯西的衍生物作為活性藥物成分或藥劑中的活性成分，特別是用于產生用來預防性和/或治療性(醫療性)處理腫瘤或癌癥疾病以及病毒疾病的藥物。即，本發明是涉及取代的二環[3.3.1]壬烷-2，4，9三酮作為藥物或藥物組合物的藥物活性成分，特別是細胞抑制的和抗病毒的組合物(病毒抑制)。本發明進一步涉及取代的二環[3.3.1]壬烷-2，4，9三酮作為拓撲異構酶抑制物和/或端粒酶抑制物以及作為MAP激酶信號轉導通路的調控物。
腫瘤或癌癥疾病不是一種單一的病理狀態，而是對于大量不同類型的惡性疾病的總稱。實際上機體的每個組織都可能發生癌性病變，有時甚至是幾種不同類型。反過來，每種病癥都有其自身的特征。導致這種疾病的原因經常是不同的。
盡管有這種多樣性，實際上所有腫瘤或癌性病變都由非常相似的基本分子或細胞過程所產生。過去二十年的研究已經在分子水平使人們對癌癥發生和腫瘤發生的基本過程的知識有驚人的進展。
遺傳信息是由細胞核內的染色體的DNA分子所攜帶。僅占細胞中總量的很小一部分的兩類基因在癌癥的發展中起了重要的作用，即原癌基因(癌基因前體)和抑癌基因(抑制腫瘤的基因)。在它們正常的形態中，它們指導細胞的生命周期，它們控制著過程的復雜順序，使細胞變得更大，或者如果必要，使細胞分解。這兩類基因共同作為人腫瘤中大量的的未受控制的細胞增殖過程的根源例如，在調控區域或在結構區域的原癌基因發生突變，然后可能有大量的生長促進蛋白產生，或者是該生長促進蛋白具有過度的活性；原癌基因已經成為一類刺激細胞能夠過度增殖的促進癌癥的致癌基因。與之相對比，抑癌基因如果因突變失去活性，會導致癌癥的發展；結果細胞失去具有功能的抑癌蛋白，以及能夠正常防止細胞不正常增殖的關鍵性生長阻滯物。
一種針對無限制性增殖的應急機制包括在正常的細胞之中，其還包括一類計數器能夠記錄每個細胞分裂并在一定數量傳代后使之停止。在經歷一定數量的細胞分裂或倍增后，該過程可以被大致的預計，正常細胞的生長停止。該過程被稱之為細胞的老化或衰老。
在細胞水平負責細胞老化或衰老過程的是染色體末端的DNA片段稱之為端粒。它們記錄著細胞群經歷多少個增殖循環過程，并在特定的時間后，啟動衰老或臨界。通過這種方式它們限制著細胞群無限制生長的能力。在最健康的人類細胞中，當每次細胞分裂染色體發生復制時，端粒被縮短一個片段。當它們被縮小到特定的臨界長度時，這對于細胞是進入衰老階段的信號；如果細胞忽視這個警告，端粒被進一步縮短直到最終的臨界點發生當端粒非常短時，染色體或其片段就相互連接并誘發對細胞致死的遺傳紊亂。
正常細胞所經歷的老化或衰老過程，即失去分裂的能力，依賴于正常死亡的細胞中染色體在每個細胞分裂后在其端粒末端失去50到200個DNA核苷酸。這些末端核苷酸(端粒)的丟失具有有絲分裂時鐘的功能，其記錄著細胞分裂的數目。端粒的保留表現出對于細胞逃避衰老過程并能夠無限分裂是必須的。
上述的保護性機制在多數癌癥和腫瘤細胞的惡化過程中被去活化，特別是通過活化一個包含能夠產生端粒酶的基因。這種酶能夠系統性的補充被縮短的端粒部分，并永久的維持從而使細胞能夠沒有限制的分裂。因此，在多數腫瘤或癌癥疾病中，細胞的永生性是由于端粒酶的活性產生的短的但穩定的端粒的保留。所產生的細胞潛在的永生性在幾個方面都是不利的首先，它對腫瘤變得非常大有作用；第二，它給予前體癌細胞或已經為真性癌細胞以時間去積累進一步的突變使得它們具有能夠增殖以及進入其它組織并最終轉移的能力。
已經發現在約80％的腫瘤性疾病中，惡化細胞的無限性生長是基于被損害的端粒酶的調控功能。通過端粒酶抑制物治療腫瘤或癌癥疾病表現出可能是對這些疾病的一種有前景的療法。隨后，已在本領域進行許多努力來發展抑制端粒酶的活性成分。
因此，WO 00/74667 A2建議端粒酶抑制物(如AZT)結合能夠誘導端粒破壞的活性組分(如紫衫醇)用于癌癥的治療。WO 99/65875 A1和US-A-5 863936建議異二環系統作為端粒酶抑制物用于癌癥疾病的治療。如在歐洲公開的專利EP 0 938 897 A1所描述的兒茶酚可以作為端粒酶抑制物用于癌癥治療。
在腫瘤或癌癥細胞內分子或細胞水平通過其它機制也嘗試在本領域進行干預。因此，本領域目前用很多烷基化物治療腫瘤或癌癥疾病，通過DNA的烷基化，最終誘導腫瘤或癌細胞DNA的直接破壞(環磷酰胺，異環磷酰胺，卡氯芥，苯丁酸氯芥等)。類似的用于腫瘤或癌癥治療的為通過抑制拓撲異構酶來干涉腫瘤或癌癥細胞復制的物質(喜樹堿，9-氨基喜樹堿，依連洛特肯，阿霉素等)(參照，如佩奇克萊夫<Clive Page>等的《綜合藥理學》，莫斯比<Mosby>，1997)。
但是，除烷基活化成分外，在臨床使用的還有一些拓撲抑制物；目前在不同腫瘤的臨床治療中，沒有通過抑制端粒酶或結合抑制拓撲異構酶和端粒酶特性的活性成分。
本發明的目的是來發現和提供適合于治療腫瘤或癌癥疾病的活性成分和藥物，但也適用于其它疾病(如病毒性疾病)。
本申請已經令人驚訝的發現取代的二環[3.3.1]壬烷-2，4，9三酮的分子式(I)。
其中·R1，R2，R4和R5，相同或不同，獨立的為下述基團中之一 但其附帶限制條件為如果自由基R1或R2或R4或R5為苯?；?，這些自由基中的其它則不是苯酰基。
·R3為氫原子。
·R6和R7都同為甲基或同為氫基，R8和R9都同為甲基或同為氫基。
但其附帶限制條件為如R6和R7為甲基，則R8和R9為氫基；如R8和R9為甲基，則R6和R7為氫基；以及它們的生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，特別是產生用來預防性和/或治療性(醫療性)處理腫瘤或癌癥疾病以及病毒疾病的藥物，特別是對于人和動物，即屬于人用及獸用藥物部門。
分子式(I)的化合物的生理耐受性或可接受性鹽溶液可以為含有如礦物酸，羧基酸或磺基酸的鹽溶液；特別優選的例子為含有鹽酸，氫溴酸，硫酸，磷酸，甲磺酸，乙磺酸，甲苯磺酸，苯磺酸，萘磺酸，乙酸，丙酸，乳酸，酒石酸，檸檬酸，反乙烯丁二酸，馬來酸或安息香酸的鹽溶液。但是，含有常規的堿的溶液也可以作為生理耐受性或可接受性鹽溶液，例如，堿性金屬鹽(如鈉或鉀鹽)，堿性土壤金屬鹽(如鈣或鎂鹽)或從氨水衍生的銨鹽，或有機鹽如二乙胺，三乙胺，乙烷二異丙基乙胺，普魯卡因，二芐基胺，N-甲基嗎啉，二氫松香乙胺，1-麻黃胺，甲基哌啶。
本發明還包括分子式(I)的化合物的水合物。上述分子式(I)的化合物的形式，其根據發明被命名為水化物，在固體或液體狀態，通過與水起水合作用形成分子化合物(水化物)。在水合物中，水分子通過分子間作用力特別是通過氫鍵結合。固態水合物包含以化學計量或非化學計量比例的結晶狀態的水，以及與它們的結合狀態不是等量相關的水分子。水合物的例子為一個半水合物，一水合物，二水合物，三水合物等。根據本發明分子式(I)的化合物的水合鹽也是同等適用的。
本發明也包括分子式(I)的化合物的異構體。用于本發明的異構體的概念也被用作所有可能的異構體的綜合命名。本發明的非限定性的異構體的例子特別的為立體異構體，互變異構體和結構異構體。
因此，根據取代模式，分子通式(I)的化合物可以發生在出現在異構體形式中，特別是立體異構體，例如該立體異構體與像和其鏡像相關(對映異構體)，或該立體異構體與像和其鏡像不相關(非對映異構體)。本發明包括分子式(I)的化合物所有的立體異構體，即包括無論是對映異構體或是非對映異構體，以及其各自的混合物。對映異構體形式能夠，如非對映異構體一樣，被用已知的方法分別分離成單一的成分。
分子式(I)的化合物也可以存在于互變異構體中。這已為熟練的技術人員所了解，這種化合物也包含在本發明的范圍中?；プ儺悩嬻w的例子為，如下述的酮烯醇互變異構體 如果R5為，如苯甲酰基團，則更進一步類型的酮烯醇互變異構體是可能的。
分子式(I)的化合物還可以存在結構異構體，特別是位置異構體(取代異構體)。這已為熟練的技術人員所了解，這種化合物也包含在本發明的范圍中。
本發明還包括分子式(I)的化合物的衍生物(舉例來說，為醚類如為烷基醚，例如甲基醚，其能夠通過互變異構體形式(I′)和形式(I″)的烷化得到)。分子式(I)的化合物的衍生物，其根據本發明為特別優選的，為互變異構體形式(I′)和形式(I″)的聚乙二醇化的衍生物，特別聚亞烷基二醇醚，優選的為聚乙二醇醚(PEG醚)。此外，化學修飾也是可能的，特別是與R1到R9取代相關(如側面基團衍生作用)。
本發明還同等的包括分子式(I)的化合物的原藥和代謝物。上述分子式(I)的化合物的形式，其根據本發明被稱為原藥，其可以為生物活性的或為非活性的，但能夠被轉化為合適的生物活性形式(如通過代謝作用，溶解作用或其它方式)。分子式(I)的化合物的產品根據本發明被稱為代謝物，其特別的為在代謝作用中由代謝作用或轉化作用所產生。
分子式(I)的化合物為天然產物，其能夠通過例如從加勒比蜜蜂的蜂膠提取物中用色譜層析去除法得到。蜂膠為微黑黃色到淡棕褐色，樹脂狀物質能夠在指間變得柔軟，并且具有香料-香脂狀氣味，并能夠被蜜蜂通過花的蓓蕾來收集并被用在蜂巢內作為巢壁的包被以加固蜂巢。蜂膠具有非常復雜的化學結構并且其組合物依賴于當地的植物區系。蜂膠包含超過200種化學物質，包括相對大比例部分的蜂蠟和樹脂，精煉的和芬芳的油類，以及大量的其它化學物質，包括如類黃酮，咖啡酸衍生物以及，如果為加勒比蜂膠，還包括分子式(I)的化合物的組合物。
分子式(I)的化合物還能夠直接從不同的藤黃種(藤黃科或產樹脂藤黃科家族(如<重瓣克魯西>Clusia grandiflora，<一種生長于夏威夷觀賞性植物>Clusia rosea or<？>Clusia renggerioides))中的植物樹液或樹脂中分離(如從樹脂中，從植物乳膠中，從葉中，從花中等)因此，A.J.Marsaioli等在《完全應用化學》第70，11卷第2116頁(1998)上發表的“從化學的角度看由微生物，蜜蜂和藤黃科植物樹脂和油類組成的生態系統”。C.M.A.de Oliveira等在植物化學50(1999)第1073-1079頁上發表的“從三種藤黃種中得到的兩種多異戊二烯化苯氧酚酮”以及A.L.M.Porto等在植物化學55(2000)第755-768頁上發表的“從藤黃種中得到的多異戊二烯化苯氧酚酮”描述了通過色譜層析方法從藤黃種(藤黃科或產樹脂藤黃科家族)的不同植物的樹脂或組分中起始分離得到上述分子式(I)的化合物的不同克魯西(clusianone)衍生物(樹脂與重氮甲烷在二乙醚中反應并隨后進行柱狀層析，該層析柱裝有硅膠和己烷/乙酸乙醚或己烷/乙醚作為洗提液(梯度柱)，隨后通過在預先準備的硅膠/硝酸銀和苯/乙酸乙醚作為洗提液上進行薄層層析)。
從藤黃科或產樹脂藤黃科即聚花克魯西<Clusia congestiflora>中起始分離克魯西<clusianone>本身以及其結構的闡明都在L.E.McCandlish et al.“二環(3，3，1)壬烷-2，4，9-三酮兩種派生物的結構。一個自然產品克魯西、C33H42O4及三甲基臨苯二酚酸，C18H20O6””in Acta Cryst.(1976)，B32，第1793-1801頁中有描述。
M.H.Santos等在巴西制藥科學雜志第35卷第2冊1999年7月/12月第297-301頁上發表的“Efeito de constituintes químicos extraidos do fruto deRheedia gardneriana(bacuparí)sobre bactérias 以及在Acta Cryst.(1998)，C54，第1990-1992頁上發表的“Epiclusianon由二環(3，3，1)壬烷-2，4，9-三酮派生的一種新自然產品”中描述了從藤黃科家族中的一種植物Rheedia gardneriana(bacuparí)的花提取物中分離epiclusianone。
F.delle Monache等在植物化學第30卷第6冊第2003-2005頁(1991)上發表的“Prenylated Benzophenones From Clusia Sandiensis”描述了通過液相色譜層析(隨后用預先準備的薄層層析進行柱狀層析)從Clusia Sandiensis的植物樹脂中起始分離不同的克魯西衍生物。
與分子式(I)的化合物的制備和分離相關的先前領域的上述文獻的全部公開內容作為文獻包含于本發明中。
本申請已經令人驚訝的發現分子式(I)的化合物包括其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，表現出未曾預料到的藥理學效果，因此適于產生用來預防性和/或治療性(醫療性)處理各種類型的腫瘤或癌癥疾病以及各種類型的病毒疾病的藥物。
分子式(I)的化合物包括其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物能夠相應優選的用來預防性和/或治療性(醫療性)處理疾病，優選的為腫瘤或癌癥疾病(抑制細胞生長的)以及病毒性疾病(抗病毒組分或抑制病毒生長的)。本發明還進一步關系到藥物學組分或藥物，特別是抑制細胞生長的抗病毒組分(抑制病毒生長的)，其包括至少一種如上所描述的分子式(I)的化合物以及/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，特別是以藥物有效量與藥物可接受的，本質是非毒性的載體或賦形劑結合。
本發明申請人令人驚訝的發現分子式(I)的化合物作為拓撲異構酶抑制物特別是作為拓撲異構酶I的抑制物來與其它事物相互作用。此外，它們通常表現出端粒酶抑制效果。最終，分子式(I)的化合物根據本發明可以用來誘導在腫瘤或癌癥細胞中DNA的破壞。
根據本發明所使用的分子式(I)的化合物的拓撲異構酶抑制效果和端粒酶抑制效果顯著高于本領域已知的化合物。例如，分子式(I)的化合物在體外實驗中表現出比常規治療試劑(如羥基喜樹堿)明顯更強的對拓撲異構酶I的抑制效果。此外，分子式(I)的化合物也作為在MAP激酶信號轉導途徑中的調控物。
分子式(I)的化合物將拓撲異構酶抑制作用和端粒酶抑制作用相結合的特性說明它們具有有價值的特性并特別適合用于預防性和/或治療性(醫療性)處理各種腫瘤或癌癥疾病(原發腫瘤，轉移腫瘤，癌癥的癌前或早期階段，良性和惡性腫瘤，等)。與之對比，在本領域已知還沒有活性成分或藥物將拓撲異構酶抑制作用和端粒酶抑制作用同時在一個分子中。
根據本發明所使用的分子式(I)的化合物的活性成分表現出不盡具有抗腫瘤的效果，同時還具有抗轉移腫瘤的效果。
根據本發明所使用的分子式(I)的化合物的活性成分令人驚訝的表現出沒有預期到的良好的抑制細胞生長的效果，即使在已經表現出對以確定的化學治療試劑有抵抗力的腫瘤中。此外，還沒有觀察到對分子式(I)的化合物的活性成分有抵抗力。而且，根據本發明所使用的分子式(I)的化合物的活性成分具有一定優勢，即其對已經建立的藥物或化學治療試劑沒有交叉抵抗作用。
被提及的疾病作為分子式(I)的化合物能被用于治療的腫瘤或癌癥疾病的非限定性例子為下述腸內癌癥(結腸癌)，乳腺癌癥(乳癌)，卵巢癌，子宮癌，肺癌，胃癌，肝癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，前列腺癌，睪丸癌，骨癌，皮膚癌，卡波西肉瘤，腦瘤，肌肉瘤，成神經細胞瘤(即成視網膜細胞瘤)，淋巴瘤和白血病。
根據本發明，優選的使用下列具有分子式(Ia)，(Ib)，(Ic)和(Id)的化合物，包括它們的生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物。
根據本發明特別優選的是使用下述分子式為(Ic)的化合物，包括其的生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物。
分子式為(Ic)的化合物為一對相互平衡共存的烯醇互變異構體中的一個。
根據本發明對于分子式為(Ic)的化合物特別優選的具有下列構型。
本申請還發現在某些情況下，使用或給予分子式(I)的化合物以及/或它們的生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，同時結合至少一種化學治療試劑，特別是蛋白酶抑制物，優選的為MAP激酶抑制物是有利的。將分子式(I)的化合物以及/或它們的生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物結合蛋白酶抑制物，優選的為MAP激酶抑制物能夠在癌癥或腫瘤疾病的治療中取得良好的結果。這種結合具有驚人的協同效果。
因此本發明還關系到一種藥物組合，特別是抑制細胞生長的組合，其包括(A)至少一個如上面所描述的分子式(I)的化合物，以及/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物；以及(B)至少一個化學治療試劑，特別是蛋白酶抑制物，優選的為MAP激酶抑制物。
本發明的由組分(A)和組分(B)結合的組合能夠被同時給予或可順序給予。藥物組合可以包括包含組分(A)和組分(B)作為其功能單元，特別是或以一種混合物或一種配制或一種混合的形式，或者是兩者分離的形式(空間上)。
蛋白激酶抑制物，正如其名稱所示，抑制效果與蛋白激酶的活性相關，即該酶能夠將γ-磷酸基團從ATP轉移到酪氨酸或絲氨酸或蘇氨酸側鏈上。適合于治療特別是腫瘤和癌癥疾病的本發明的藥物組合物和本發明的組合治療為各種類型的蛋白激酶抑制物，如本領域已知的蛋白激酶抑制物(如特定低分子量的雜環抑制物如星形胞菌素，2′-氨基-3′-甲氧氟烷，1，4-雙氨-2，3-[2-氨基苯硫]丁二烯，SB 203580，自SmithKline Beecham公司等)。在這些例子中可以觀察到協同效應。
特別優選的是使用MAP蛋白激酶抑制物作為本發明的藥物組合物以及作為本發明的腫瘤和癌癥疾病的組合治療。MAP蛋白激酶抑制物，如其名稱所示，抑制效果與MAP激酶活性相關(MAP＝有絲分裂原活化蛋白)，即在有絲分裂期間具有活性的酶，其將末端的磷酸殘基從三磷酸核苷轉移到適當的底物上。通過這種方式，MAP激酶抑制物阻止有絲分裂以及癌癥或腫瘤細胞的細胞分裂。適合于治療特別是腫瘤和癌癥疾病的本發明的藥物組合物和本發明的組合治療為各種類型的MAP激酶抑制物，即本領域已知的所有MAP蛋白激酶抑制物。根據本發明可以被使用的MAP蛋白激酶抑制物的例子在下述出版物中被作為例子涉及，其全部內容作為文獻的方式被包含于此處WO99/32111 A，WO 99/64400 A，WO 98/52941 A，WO 98/52937 A，WO 97/44467 A，WO 98/27098 A，WO 98/52558 A，WO 98/52940 A，WO 99/32110 A，WO99/32463 A，WO 99/58502 A，WO 99/58523 A和WO 99/00357 A。
本申請還令人驚訝的發現上述分子式(I)的化合物還表現出在MAP蛋白激酶信號轉導通路中的調控活性，即作為在MAP蛋白激酶信號轉導通路中的調控物。
分子式(I)的化合物還適用于治療病毒性疾病并作為抗病毒組合物(抑制病毒生長)的活性成分(如治療皰疹病毒疾病或HIV)。如上所描述的，本發明還進一步關系到分子式(I)的化合物，以及生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物用于預防性和/或治療性(醫療性)處理各種類型的病毒疾病。
本發明還關系到一種用于預防和/或治療人或動物身體疾病的方法，特別是各種類型的腫瘤和癌癥疾病或病毒性疾病，用分子式(I)的化合物包括其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，在治療有效劑量下，同時在適合時結合另一種活性成分，特別是化學治療試劑(即蛋白激酶抑制物，如MAP激酶抑制物)。
根據本發明所使用的活性組分或活性組分組合可以依賴于被治療疾病的性質，被全身性給藥或部分給予，特別是局部給予。
根據本發明所使用的適合于給藥的活性組分或活性組分組合為所有常規的給藥形式?？赡艿慕o藥途徑的例子為口部、舌部、舌下、頰部、腸內或腸胃外(即避開腸部管道，即靜脈內，動脈內，心臟內，皮內，皮下，經皮，腹膜內或肌肉內)，并且口部和靜脈給藥是特別適合；口部給藥是更為優選的。表面給藥也是可以的(如治療黑素瘤)。
根據本發明為進行應用，活性成分或活性成分的組合可以用已知的方式轉化成常規的劑型，例如各種類型的無包膜藥品，包膜藥品，藥丸，顆粒，氣溶劑，糖漿，乳劑，懸浮液，溶液，藥膏，油膏和凝膠，特別使用無活性的，本質上非毒性的制藥上可適用的載體或溶劑。將活性成分或活性成分的組合引入作為進入脂質體“包裝物”也是可以的，即其被包埋或密封到脂質體中，該脂質體也可選擇性的被進一步修飾(如用PEG進行酯化)。在這種連接中，根據本發明所使用的活性成分或活性成分的組合可以在各種情況都以治療有效濃度存在，特別是在完全混合物中重量比從為0.0001到99％的濃度范圍內，優選的0.01到95％，即為達到指示的或需要的劑量范圍的有效量。然而，適當的偏離上述量也是必須的，特別是作為身體重量或給藥類型的一種功能，作為個體對藥物反應的一種功能，作為劑型的類型以及給藥發生的時間或間隔的一種功能。因此，在一些情況下低于上述最小劑量的為充分的，然而在另一些情況下所述上部限制一定被超過。當多量被給予時，將這些分成多個單一劑量并在一段特定的時間內，如在一天內分別給予是可取的。
劑型可以被延伸，如通過擴展活性成分或活性成分組合與溶劑(舉例來說，油類如蓖麻油)和或/載體，當適合使用乳化劑和/或分散劑時，使用這些是可行的，舉例來說在適當的有機溶劑作為輔助溶劑處，水可以作為稀釋劑。
根據給藥的模式，為達到治療效果，以身體重量的0.0001到500mg/kg特別是0.0001到100mg/kg，有效的為0.01到50mg/kg的劑量給予根據本發明所使用的活性成分或活性成分組合被證明是有利的。然而，適當的偏離上述量也是必須的，特別是作為身體重量或給藥類型的一種功能，作為個體對藥物反應的一種功能，作為劑型的類型以及給藥發生的時間或間隔的一種功能。因此，在一些情況下低于上述最小劑量的為充分的，然而在另一些情況下所述上部限制一定被超過。當多量被給予時，將這些分成多個單一劑量或作為持續給藥(舉例來說，如持續輸注)并在一段特定的時間內，如在一天內分別給予是可取的。在慢性病中的應用(舉例來說，如藥品形式)是同樣可行的。
本發明的進一步精練，修飾和變化能夠在熟練的技術人員在閱讀本說明書后在不偏離本發明范圍內進行確定并直接實施。
本發明可以通過下列實施例來進行說明，但不意味著對本發明的限制。
實施例從加勒比蜜蜂的蜂膠中得到的1-苯甲酰-8，8-2甲基-2-羥基-3，5，7-三羥甲基氨基甲烷-(3甲基-2-丁烯)二環[3，3，1]non-2-雙鍵-4，9-二酮(Ic’))(1-Benzoyl-8，8-dimethyl-2-hydroxy-3，5，7-tris-(3-methyl-2-butenyl)bicyclo[3.3.1]non-2-ene-4，9-dione(Ic’)<non-2-ene-4，9-dione(Ic’)) 分子式(Ic’)的化合物的生理學活性如下所描述。
分子式(Ic’)的化合物存在于分子式(Ic)和(Ic″)結構的互變異構平衡之中。
但是，為了簡化，下面只稱之為分子式(Ic’)的化合物。
蜂膠溶液的制備從加勒比蜜蜂的蜂巢中收集的蜂膠溶于乙醇中，并通過過濾去除不可溶的蜂蠟。干燥得到一定體積的粉末以一定的濃度重新懸浮在乙醇中。在避光室溫的條件下保存溶液。
蜂膠溶液的半制備性HPLC分離用Waters GmbH(Eschborn)(Waters the Separator Module Alliance 2690，Waters PDA 996 Detektor，Waters Millennium Chromatography Manager)提供的RP-HPLC系統進行分離。在40℃用梯度系統用Macherey-Nagel(Nucleosil100-7 C18，250×21mm)提供的分離柱進行分離(表1)。液相由0.01M的甲酸銨溶液組成(pH＝7.00)。
表1梯度系統
在這種方式得到的每8毫升部分(2分鐘)被干燥并重新懸浮在乙醇中并在避光室溫的條件下保存。
每個分離部分的細胞毒性在媒介中用稀釋可比較體積進行檢測并按下面描述的SRB實驗來研究。其中所使用的目標細胞為人源的腸癌細胞系。(HCT8WT)。
細胞毒性部分的純化在SRB實驗中具有細胞毒性活性的部分要進行進一步純化。為此目的，梯度稀釋系統被用于待純化部分的極化。在SRB實驗中對用制備性RP-HPLC得到的片段進行更新和檢測，可以分離均質的物質(Ic’)。物質(Ic’)的純度通過UV分光光度數據來顯示(

圖1b)。一個包含修飾的C18相(250mm×4.6mm)水對稱柱被選擇作為分析分離柱。結果如圖1a所示。
圖1a顯示了物質(Ic’)在254nm，流速＝1毫升/分鐘，T＝40℃，梯度系統作為指示的分析性RP-HPLC(純度檢測)中的代表性色譜圖。上面的線對應甲醇的濃度(％)，中間的線對應水相的濃度(％，甲酸銨0.01M)。乙腈的濃度(％)維持在穩定的5％(更下面的線)。
圖1b顯示圖1a所示的PDA分析數據。所得到的物質(Ic’)為均質的。在這些洗脫條件下的UV光譜展示了兩個最大值(254鈉米和308鈉米)。
結構闡明分子式(Ic’)的化合物的最初分離和特征描述發生可以不存在任何衍生作用(舉例來說，如和重氮甲烷)。蜂膠(在加勒比海收集)的乙醇萃取物可以按照如上所描述的通過RP-HPLC來進行純化，通過這種方式可以第一次提供分子式(Ic’)的化合物，其為非衍生的形式以進行進一步的NMR光譜研究，特別是在充分高的純度下(＞98％，LC-MS；用LC-PDA進行的UV光譜研究；MS)。
為進一步確認結構，分子式(Ic’)的化合物被通過和重氮甲烷反應來轉化成相應的甲基醚。O-甲基化化合物以40/60的比例被分離(RP-HPLC)。
NMR研究的結果(1H-NMR，13C-NMR，DEPT135，DEPT90，HMQC，HMBC，H，H-COSY90(gs)，1D-NOE差異光譜)如下表所示·DEPT代表通過極化轉移的無失真增強。
·COSY代表相關光譜。通過這種常用方法，1H，1H-COSY，也隨著其發明者的名字被稱為Jeener實驗，其代表了在NMR的歷史中的第一個2D脈沖序列。
·HMQC代表異核多量子一致。
·HMBC代表異核多鍵相關。
·NOE代表核Overhauser效應。
圖1c，1d和1e為分子式(Ic’)的化合物的1H-NMR光譜(測量頻率500MHz，溶劑CD3OD)。
圖1f描述了分子式(Ic’)的化合物的13C-NMR光譜(測量頻率125MHz，溶劑CD3OD)。
圖1g描述了分子式(Ic’)的化合物的13C-DEPT光譜(測量頻率125MHz，溶劑CD3OD)。CHs和CH3s點向上，CH2s點向下。
圖1h，1i，1j和1k為分子式(Ic’)的化合物的H，H-COSY光譜(測量頻率500MHz，溶劑CD3OD)。
圖1l描述了分子式(Ic’)的化合物的HMBC光譜(測量頻率125MHz，溶劑CD3OD)。
表1a化合物(Ic’)的NMR數據
H，H-COSYH6a-H7，H6e-H7，H7-H29，H7-H29’(w)＝弱，(br)＝寬；
相應的，分子式(Ic’)或(Ic″)或(Ic)的非衍生化合物存在于酮/烯醇平衡中，其由系信號的化學轉化和2，4碳原子的13C信號的寬度來確證。

表1b對于甲基醚的NMR數據(II)
H，H-COSYH6a-H7，H7-H29 (w)＝弱

表1c對于甲基醚的NMR數據(III)
H，H-COSYH6a-H7，H6e-H7，H7-H29 (w)＝弱
絕對構型在如上所詳細描述的NMR數據的基礎上，對分子式(Ic’)或(Ic″)或(Ic)的化合物指定為下列絕對構型是可能的 細胞培養六個特征明確的人源腫瘤細胞系(天然細胞系以及那些被轉化為抗性的亞克隆)以及兩個非腫瘤細胞系被用于進一步的研究(表2)。
表2細胞系，細胞系的組織學特征及其來源
SRB實驗細胞系對于物質的敏感度(Ic’)可以通過被稱為磺基若丹明(SRB)的實驗來測定。這是在NCI(國家癌癥研究所，美國)已經建立的有力并且高度可重復的標準方法(Skehan et al.1990)。
實驗的結果顯示在表3中。抑制50％細胞生長的物質(Ic’)的濃度(IC50，由半對數劑量對效果的曲線圖所決定)被指出。顯示在表3中的結果為至少三次獨立實驗的平均值以及它們的標準偏差。對于所指示的細胞生長抑制活性沒有交叉抗性。物質(Ic’)對于非腫瘤細胞系(纖維原細胞系3T3和MCR5)的細胞毒性被證明是非常少的。
表3在不同細胞系中物質(Ic’)的IC50濃度測定
拓撲異構酶I抑制作用的研究物質對拓撲異構酶I的作用效果被通過稱之為TopoI解旋實驗來研究。此實驗是基于螺旋型的pBR322質粒DNA二聚物在拓撲異構酶I的作用下發生的ATP非依賴性解旋。質粒DNA的兩種不同的拓撲類型，螺旋型以及未卷繞的松散型被通過瓊脂糖凝膠分離。為此目的從腫瘤細胞系的細胞核提取物中得到拓撲異構酶I。
得到細胞核提取物通過Danks等修改的Sullivan的方法可以得到細胞核提取物。
物質(Ic’)對拓撲異構酶I的抑制作用如圖3所示(柱1對照)，需要160ng含有拓撲異構酶I的細胞核提取物來將高度纏繞的pBR322質粒DNA二聚物(陰性對照)轉變為松散的拓撲型(陽性對照)。物質(Ic’)在100ug/ml的濃度下能夠100％的抑制拓撲異構酶I活性。相應的需要20倍該濃度來抑制相應細胞系50％的腫瘤生長(IC50，圖2)。和羥基喜樹堿的體外抑制活性的數據對照表明，已經在臨床確定應用的羥基喜樹堿需要1000倍的IC50。圖3表明物質(Ic’)對拓撲異構酶I的抑制作用。
細胞周期分析到目前為止，對于物質(Ic’)作用于細胞生長的效果已被證實為改變細胞周期。使用Tsugita M.等的一種適合的方法來進行流式細胞術研究分析。
指數生長的HCT8 WT腸癌細胞被用已確定IC50濃度的物質(Ic’)來處理24小時，然后細胞和BrdU共同孵育。用甲醇固定的細胞經清潔劑(TritonX-100/HCl)處理以使DNA鏈變性。與熒光標記的抗體(抗-BrdU單克隆抗體，FITC-標記)共同孵育后，加入第二個熒光染色劑(碘化丙啶)。
用Coulter流式細胞儀(Coulter EPICS XL)來測定DNA含量(碘化丙啶熒光)和BrdU的總量(FITC熒光)。實例的結果如圖4a和4b所示。
圖4a和4b表明HCT8 WT細胞的DNA對BrdU和PI的吸收，未處理(對照，圖4a)的和經物質(Ic’)處理的(IC50，24小時，圖4b)。圖示的結果為n＝3次獨立實驗的代表。
顯然用物質物質(Ic’)處理會導致合成期的抑制。這一點從DNA含量的圖看的很清楚(圖4a和4b，BrdU吸收)。
DNA降解的分析研究物質(Ic’)對DNA的降解是通過其作用于人的細胞支氣管癌(H460WT)和結腸癌(HT29 WT)作為實例來進行的。在用物質(Ic’)處理細胞不同的時間后，用凝膠電泳分析分離的DNA。
DNA雙鏈斷裂的測定是用14C標記的DNA來完成的。為此，[14C]d-胸腺嘧叮標記的細胞用不同濃度的物質(Ic’)來處理。DNA用Chia Chiao等的適合的方法進行分離。
在用GeneQuant分光光度計測定分離的DNA的總量和純度后，用瓊脂糖凝膠分離可比較量的DNA。通過凝膠電泳分離的DNA隨后用溴化乙啶來染色。
在透射儀上(302鈉米)，用提取的方法將在電場中沒有遷移的完整的DNA和在凝膠中遷移的片段DNA分開。分離的凝膠和DNA片段在鹽酸存在下在80℃使之液化。在加入閃爍劑后，可以用液體閃爍儀(TPI-CARB 2100RT)來測定測定放射活性。標準的放射活性用每分鐘裂變次數(cpm)來指示。
圖5表明在與支氣管癌細胞(H480 WT)孵育6個小時后，物質(Ic’)誘導的雙鏈斷裂。圖5表明在[14C]d-胸腺嘧叮標記的H460WT細胞在用物質(Ic’)處理6個小時后所誘導產生的DNA雙鏈斷裂。結果代表了n＝3次獨立實驗的平均值和它們的標準偏差。
用超過10倍的已確定的IC50濃度處理腫瘤細胞超過6個小時誘導產生大量的雙鏈的斷裂，其對于腫瘤細胞來說明顯造成不能全部修復，即使在IC50濃度時也如此，從而誘導了細胞的死亡。
圖6表明在腫瘤細胞的DNA中誘導雙鏈斷裂的進一步例子，在這個例子中為結腸腫瘤(HT29 WT)。關于支氣管癌細胞系，有顯著的大量雙鏈斷裂，其不能被腫瘤細胞的修復機制所修正，最終作為誘導腫瘤細胞凋亡，即程序性細胞死亡的作用因素。
物質(Ic’)對于人端粒酶的抑制活性的測定物質(Ic’)對于人端粒酶的作用通過基于N.W.Kim等的方法，被稱為端粒重復擴增實驗(TRAP)ELISA來進行測定。
該方法是基于聚合酶鏈式反應(PCR)。這使得第一步，一定量的(GGTTAG)序列通過聚合酶的活性被結合到生物素標記的寡核苷酸的3’末端(TS＝端粒酶底物)。第二步中，這種方式延伸的產物被用TS和RP(R＝反向)引物通過PCR技術擴增。在這種方式中，以6個堿基為一“階梯”的方式增加從而產生產物(初始的尺寸等于50個核苷)。在擴增的過程中，DNP標記的dCTP被包含到PCR產物中。用三文治ELISA方法來對合成的端粒酶產物進行測定和定量是端粒酶酶活性的標準。
端粒酶產物攜帶生物素標記的TS引物并結合到預先包被有抗生素的微滴度板的表面上。在擴增過程中包含一個結合有POD的抗DIG抗體結合到DNP標記的核苷酸上。在底物TMB加入后，端粒酶的活性通過熒光光度計經酶POD介導的顏色反應的發生變得可以觀察。在這種情況下，測定的吸收值直接和端粒酶的活性成比例相關。
物質(Ic’)對人端粒酶活性的作用效果為確保物質(Ic’)對端粒酶的作用效果，物質(Ic’)對DNA聚合酶的作用效果必須被排除。在用TSR8作為內部對照的預實驗中，不同濃度水平的物質(Ic’)的作用效果被排除。
TSR8模板的擴增僅依賴于DNA聚合酶。這個酶的每個抑制物可以通過底物來檢測。
圖7表明用TSR8模板進行的預實驗的結果。實驗進行三次。圖7表明即使用物質(Ic’)的最大濃度，50ug/ml，在此實驗中不能導致對Taq聚合酶明顯的抑制作用。
研究物質(Ic’)對端粒酶抑制作用的實驗如圖8所示。所述的濃度范圍在10到50ug/ml之間。在50ug/ml的濃度下觀察到對人端粒酶的完全抑制。圖8表明TRAP實驗的結果用物質(Ic’)在結腸癌細胞(HCT8 WT)上取得的對人端粒酶劑量依賴性抑制作用。結果代表三次獨立實驗的平均值和標準偏差。
ERK1/2的磷酸化作用(MAP蛋白激酶途徑)某些信號轉導途徑的磷酸化在細胞生長和基因表達的調控中扮演關鍵性的作用。蛋白ERK1/2(MAP蛋白激酶)屬于MAP蛋白激酶信號轉導途徑。
用物質(Ic’)處理人結腸癌細胞(HCT8 WT)導致這種蛋白的磷酸化，其通過Western blot分析來檢測(圖9)。圖9表明ERK1/2蛋白的Western blot分析結果；含有對照的在更下面的線中。
用物質(Ic’)處理導致蛋白ERK1/2的劑量依賴性磷酸化。即使在相應于IC50的劑量，可以展現物質(Ic’)的磷酸化作用。作為此過程的結果-目前文獻中解釋為活化作用-腫瘤細胞處于細胞周期停止，這通過細胞周期分析來表明(見上)。
為檢查這些發現，即通過物質(Ic’)對ERK1/2的活化所得到的結果在多大程度上可被加入ERK1/2抑制物來拮抗，可以用物質(Ic’)和特異性ERK1/2抑制物(MAP蛋白激酶抑制物)共同融合實驗。在此例中，腫瘤細胞，舉例來說為結腸癌細胞(HCT8 WT)，其在每個例子中與活性成分在不同的劑量中共同融合24小時(圖10)。圖10代表用物質(Ic’)和特異性ERK1/2抑制物(MAP蛋白激酶抑制物)共同融合實驗的細胞毒性。HCT8 WT細胞被共同融合。顯示的點代表兩種活性成分之間的相應的比率(代表性IC50的濃度的百分比)。
然而，通過這種方式進行的實驗導致在任何劑量比例中沒有廢除標準的細胞毒性。相反的，兩個活性成分在共同融合上顯著的協同效應是明顯的。
所有的劑量組合低于二等分因此其在明確的協同效應范圍內。將物質(Ic’)的IC50濃度的30％和特異性ERK1/2抑制物的IC50濃度的30％相結合導致對從結腸癌(HCT8 WT)分離的腫瘤細胞生長的抑制作用。
權利要求
1.分子式(I)的取代的二環[3.3.1]壬烷-2，4，9三酮的應用 其中·R1，R2，R4和R5，相同或不同，獨立的為下述基團中之一 但其附帶限制條件為如果自由基R1或R2或R4或R5為苯?；?，這些自由基中的其它則不是苯?；3為氫原子，·R6和R7都同為甲基或同為氫基，R8和R9都同為甲基或同為氫基，但其附帶限制條件為如R6和R7為甲基，則R8和R9為氫基；如R8和R9為甲基，則R6和R7為氫基；以及它們的生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，特別是產生用來預防性和/或治療性(醫療性)處理腫瘤或癌癥疾病以及病毒疾病的藥物。
2.根據權利要求1中的應用，其特征為分子式(I)的組合物選自下列化合物中的基團
3.根據權利要求1或2中的應用，其特征為分子式(I)的組合物為下列分子式(Ic)的化合物
4.根據權利要求3中的所要求的應用，其特征為分子式(Ic)的化合物具有下列特征
5.根據權利要求1到4中的任何一個所要求的應用是為預防性和/或治療性處理腫瘤和/或癌癥疾病，特別是在原發性腫瘤和轉移灶，和/或初癌狀態(癌癥的早期階段)。
6.根據權利要求1到5中的任何一個所要求的應用是為預防性和/或治療性處理良性腫瘤和惡性腫瘤。
7.根據權利要求1到6中的任何一個所要求的應用是為預防性和/或治療性處理腸內癌癥(結腸癌)，乳腺癌癥(乳癌)，卵巢癌，子宮癌，肺癌，胃癌，肝癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，前列腺癌，睪丸癌，骨癌，皮膚癌，卡波西肉瘤，腦瘤，肌肉瘤，成神經細胞瘤(即成視網膜細胞瘤)，淋巴瘤和白血病。
8.根據權利要求1至6中的任何一個所要求的應用，其特征為分子式(I)的化合物被全身性給藥和/或局部給藥。
9.根據權利要求1至8中的任何一個所要求的應用，其特征為分子式(I)的化合物抑制和/或停止腫瘤和/或癌細胞的細胞生長和細胞分裂。
10.根據權利要求1至9中的任何一個所要求的應用，其特征為分子式(I)的化合物誘導腫瘤和/或癌細胞的DNA破壞。
11.如上所描述的分子式(I)的化合物，以及其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物作為拓撲異構酶抑制物和端粒酶抑制物的應用。
12.根據權利要求1到11中的任何一個所要求的應用，其特征為如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物與至少一種化學治療試劑結合使用，特別是蛋白激酶抑制物，優選的為MAP蛋白激酶抑制物。
13.根據權利要求12中所要求的應用，其特征為如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，以及另外至少一種化學治療試劑或同時或依次的被使用或給藥。
14.一種制藥組合物或藥物，特別是抑制細胞生長或抑制病毒生長的組合物，包含如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，以及一種藥劑上可接受的，本質為無毒的載體或賦形劑。
15.根據權利要求14中所要求的制藥組合物或藥物，包含至少一種處于有效治療劑量的如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物。
16.根據權利要求14或15中所要求的制藥組合物或藥物可以全身性和/或局部使用。
17.一種制藥組合物，特別是抑制細胞生長的組合，其包括(A)至少一種如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物；以及(B)至少一種化學治療試劑，特別是蛋白激酶抑制物，有效的為MAP蛋白激酶抑制物。
18.根據權利要求17中所要求的藥物組合物，特征為組分(A)和組分(B)存在或者作為功能單元，特別是以一種混合物或一種配制或一種混合的形式，或者是兩者分離的形式(空間上)。
19.根據權利要求17或18中所要求的藥物組合物，其中組分(A)和組分(B)能夠被或同時性或依次性的使用或者給藥。
20.根據權利要求17到19中的任何一個所要求的藥物組合物，包含分別為治療有效量的組分(A)和組分(B)。
21.根據權利要求17到20中的任何一個所要求的藥物組合物可以全身性和/或局部使用。
22.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物用來預防性和/或治療性處理疾病。
23.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物作為活性藥物成分和/或藥物的活性藥物成分。
24.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物用于預防性和/或治療性處理腫瘤和/或癌癥疾病，特別是在原發性腫瘤和轉移灶，和/或初癌狀態(癌癥的早期階段)，特別是腸內癌癥(結腸癌)，乳腺癌癥(乳癌)，卵巢癌，子宮癌，肺癌，胃癌，肝癌，胰腺癌，腎癌，膀胱癌，前列腺癌，睪丸癌，骨癌，皮膚癌，卡波西肉瘤，腦瘤，肌肉瘤，成神經細胞瘤(即成視網膜細胞瘤)，淋巴瘤和白血病。
25.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，特別是權利要求22到24中的任何一個所要求的，用來抑制拓撲異構酶和/或端粒酶。
26.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，特別是權利要求22或23中的任何一個所要求的，用來治療性處理病毒性疾病。
27.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，特別是權利要求22到26中的任何一個所要求的，可以全身性和/或局部使用。
28.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，作為MAP蛋白激酶信號轉導途徑中的調控物。
29.根據如上所定義的分子式(I)的化合物，和/或其生理耐受性鹽，水化物，異構體，特別是立體異構體，互變異構體和結構異構體，衍生物，原藥和代謝物，用來產生預防性和/或治療性病毒疾病的藥物。
全文摘要
本發明是涉及取代的二環[3.3.1]壬烷－2，4，9三酮的使用，特別是克魯西(clusianone)或克魯西的衍生物作為活性藥物成分或藥劑中的活性成分，特別是用于產生用來預防性和/或治療性(醫療性)處理腫瘤或癌癥疾病以及病毒疾病的藥物。上述組合物可以用于細胞抑制劑的和抗病毒劑(病毒抑制劑)。特別是作為拓撲異構酶抑制物和/或端粒酶抑制物以及作為MAP激酶信號轉導通路的調控物，從而可以在細胞水平上對腫瘤或癌細胞增殖和病毒的復制進行干預。
文檔編號A61K38/00GK1615127SQ02827411
公開日2005年5月11日 申請日期2002年11月20日 優先權日2001年11月21日
發明者西伯 西格弗雷德, 阿克塞爾 希爾格 拉爾夫, 戴茲卡巴羅 大衛 申請人:西伯 西格弗雷德