專利名稱：墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物制備方法及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥，特別是一種墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物制備方法及應(yīng)用。
背景技術(shù)：
生物大分子與微量元素金屬離子在一定條件下反應(yīng)形成的生物大分子金屬絡(luò)合物顯示出特異的生物活性，如氨基酸、核酸金屬絡(luò)合物。氨基酸金屬絡(luò)合物作飼料添加劑已有專利。如氨基酸與銅絡(luò)合物(波蘭格旦斯克大學(xué)Kaczmarek等人)，甘氨酸和三價鐵離子形成的絡(luò)合物(美國懷俄明州大學(xué)化學(xué)系Devore EC等人)。德國公開專利號為2209616 的藥用半胱氨酸和鋅形成的絡(luò)合物作為補(bǔ)鋅劑，該方法是把氧化鋅水溶液加入到半胱氨酸溶液中，用NaOH溶液調(diào)節(jié)pH而形成絡(luò)合物。又如美國專利號為3821192的說明書中公開了一種用葡萄糖、麥芽糖、低分子右旋糖苷與三氯化鐵反應(yīng)形成糖鐵絡(luò)合物，其制備方法用三價鐵離子的水溶液與右旋糖苷溶液混合，并加入堿溶液直到三氯化鐵完全沉淀，此時PH低于7，經(jīng)攪拌加入堿使pH上升到 11以上溶液呈均一狀態(tài)為止，反應(yīng)過程中溫度保持在80°C，不要超過95°C。為了使糖鐵絡(luò)合物充分沉淀出來要加入醇類溶液，經(jīng)離心分離、干燥、粉碎成所需顆粒。從上述專利文獻(xiàn)描述的產(chǎn)物是用氨基酸、葡萄糖、麥芽糖經(jīng)與金屬離子加熱反應(yīng)，整個過程均需保持較高的反應(yīng)溫度，而且制備出的絡(luò)合物作用單一，只用于治療仔豬缺鐵性貧血。墨旱蓮為菊科植物鱧腸的全草，因為搓揉它的莖葉時，可見黑色的汁液流出，所以又叫“墨旱蓮”。莖園柱形，綠褐色或帶紫紅色，有縱棱。葉對生，近無柄，線狀矩圓形至披針形，全緣或稍具齒，基部楔形，先端短尖或鈍，兩面密被白色粗毛，浸水后搓揉莖葉呈黑色。 花序頭狀，具有滋補(bǔ)肝腎，涼血止血的功效，用于牙齒松動、須發(fā)早白、眩暈耳鳴、腰膝酸、陰虛血熱、吐血、血衄、尿血、血痢、崩漏下血、外傷出血，但作為墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物的制備及應(yīng)用至今未見有公開報道。

發(fā)明內(nèi)容
針對上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，本發(fā)明的目的就是提供一種墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物制備方法及應(yīng)用，可有效解決墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物的制備，并有效用于食品添加劑和提高機(jī)體免疫力以及制備治療缺鐵性貧血的藥物中的問題。本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，將干燥的墨旱蓮粉加蒸餾水溫浸、過濾，得墨旱蓮多糖溶液；在墨旱蓮多糖溶液中加入NaOH離子溶液調(diào)pH值，再加入檸檬酸三鈉及!^Cl3,邊滴加邊攪拌，同時由NaOH溶液調(diào)pH為8-10，當(dāng)反應(yīng)液中出現(xiàn)紅色不溶物質(zhì)時，立即停止滴加 FeCl3溶液和NaOH溶液，離心除去沉淀，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液；然后進(jìn)行透析、醇沉， 得沉淀物，對沉淀物進(jìn)行洗滌，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物，有效作為食品添加劑或制備藥物用。本發(fā)明的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物是利用中藥材墨旱蓮為原料，在不需加壓的條件下，在水溶液中絡(luò)合反應(yīng)快速獲得該產(chǎn)物。該產(chǎn)物作為食品添加劑或醫(yī)藥用，能夠有效提高機(jī)體免疫和治療缺鐵性貧血有著實用價值。以天然中藥材為原料，可以確保所生產(chǎn)的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物無毒無副作用，另外生產(chǎn)方法簡單，易于大規(guī)模生產(chǎn)。本發(fā)明的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物可做食品添加劑，也可以藥用，它是一種預(yù)防和治療缺鐵性貧血的藥物，還可以有效提高機(jī)體的免疫力。
具體實施例方式以下結(jié)合具體情況，對本發(fā)明的具體實施方式
作詳細(xì)說明。本發(fā)明在具體實施中是由以下步驟實現(xiàn)的①將干燥的墨旱蓮粉加入蒸餾水或飲用水中，墨旱蓮粉與蒸餾水或飲用水的重量比為 1 10-25(具體還可采用 1 12，1 14，1 16，1 18，1 20，1 22，1 24 的重量比)，60-95°C (具體還可采用 65°C，70°C，75°C，8(TC，85°C，9(rC )溫浸 1-3 次，每次 2-6h (根據(jù)溫度的高低和墨旱蓮粉數(shù)量的多少，具體還可采用池，4h，5h,原則是溫度越高， 物料少，浸泡的時間越短，反之亦然)，過濾后得墨旱蓮多糖溶液；②將!^eCl3加入水中，配制成濃度為211101/1的!^(13離子溶液；將NaOH加入水中， 配制成濃度為2mol/L的NaOH離子溶液；③在步驟①制備的墨旱蓮多糖溶液中逐滴加入濃度為2mol/L的NaOH離子溶液至 PH值為8-10，每IOOg干燥的墨旱蓮制成的墨旱蓮多糖溶液中加入檸檬酸三鈉0. 5-5g，攪拌溶解，60-80°C水浴下逐滴加入濃度為2mol/L的FeCl3溶液，邊滴加邊攪拌，同時滴加濃度為2mol/L的NaOH溶液保持pH為8_10，進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，當(dāng)反應(yīng)液中出現(xiàn)紅色不溶物質(zhì)時，立即停止滴加FeCl3溶液和NaOH溶液，離心除去沉淀，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液；④對墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液裝入透析袋進(jìn)行透析，透析袋的截留分子量為 8000-14000，透析液加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇至乙醇含量達(dá)到80%，靜置10-1 過夜， 棄去上清液，得沉淀物，先用無水乙醇將沉淀物洗至上清液無色，再用丙酮和乙醚各洗滌一次，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物。必要時，根據(jù)需要，將墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物粉碎制成所需的顆粒。本發(fā)明制備方法穩(wěn)定可靠，并經(jīng)多次(12次以上)實驗得到了相同或相近似的結(jié)果，而且所制備的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物經(jīng)試驗取得了突出的有益技術(shù)效果，有關(guān)實驗資料如下以低鐵飼料輔以少量放血，快速建立缺鐵性貧血的大鼠模型。實驗組灌服墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物，對照組灌服與墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液濃度相當(dāng)?shù)牧蛩醽嗚F溶液。1.墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物提高缺鐵性貧血大鼠免疫力的實驗健康SPF級雄性SD大鼠共50只，4周齡，體重100士20g血紅蛋白(Hb)彡IlOg/ L。大鼠用不銹鋼籠子及器皿使其生活在無鐵環(huán)境，并嚴(yán)防外來鐵污染及彼此間的交叉污染。設(shè)空白對照組(10只)，將造模組大鼠按體重隨機(jī)分為4組，分別為①低劑量治療組， 每天每只大鼠給藥量為20mg/Kg。②中劑量治療組，每天每只大鼠給藥量為40mg/Kg。③高劑量治療組，每天每只大鼠給藥量為60mg/Kg。④模型對照組，不予給藥。每6天眼眶靜脈采血測血常規(guī)、Si、紅細(xì)胞免疫相關(guān)指標(biāo)。各組大鼠紅細(xì)胞免疫功能的情況比較見表1，中、高劑量的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物能顯著提升貧血大鼠體內(nèi) RBC-C3bR(P < 0. 05)，各劑量墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物均能有效降低RBC-IcR(P < 0. 01)，說明其能改善紅細(xì)胞免疫功能。表1墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物對IDA大鼠紅細(xì)胞免疫功能的影響
RBC-C3bR (%)RBC-IcR (%)
治療前治療后P治療前治療后P
空白對照組 13 3127±4.1632.56±1338> 0. 0520.92±10581794±6. 51> 0. 05模型對照組 13 31.06 ±13853115±9.74> 0. 053524±3.533228±4. 31> 0. 05低劑量治療組 13 2531±9.592082 ±9.14> 0. 0536.97±10161253±5. 88< 0. 01中劑量治療組 13 2261±7.123238 ±9.80< 0. 053482±5.371767 ±8. 40< 0. 01高劑量治療組 13 25.38±101139.62±1189< 0. 014873±8.2614.39±13. 27< 0. 01上述藥理實驗結(jié)果表明，本發(fā)明所制得的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物能使貧血大鼠紅細(xì)胞C3bR受體逐漸恢復(fù)活性，使其RBC-IcR逐漸降低，較自然恢復(fù)的程度更為明顯，且通過短期的治療即有顯著的效果。墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物對IDA大鼠紅細(xì)胞免疫力的提高具有顯著效果。2.墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物用藥后的鐵代謝實驗按照墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物提高免疫的藥理實驗的方法，取健康SPF級雄性SD大鼠共30只，4周齡，體重100士20g血紅蛋白(Hb)彡110g/L。大鼠用不銹鋼籠子及器皿使其生活在無鐵環(huán)境，并嚴(yán)防外來鐵污染及彼此間的交叉污染，造IDA大鼠模型。將IDA大鼠模型隨機(jī)分成兩組，分別為①墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物組②硫酸亞鐵組。每6天眼眶靜脈采血測 Hb值、血清鐵、血清鐵蛋白，結(jié)果見表2.表2墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物的代謝情況
墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物組(n=15)^硫酸亞鐵組(11=15)^ 組間比較
-Pl值 -P2值
評價指標(biāo)治療前_治療后_治療前_治療后_P值
91.6±12. 75 189. 6±13. 92 <0.001 94. 2±10. 55 138. 8±12. 71 <0.05 <0.01 5. 33±1. 14 24. 62±1. 38 <0.001 6. 87±1.46 15. 16±1.57 <0.05 <0.01
8. 2±5. 24 11. 5±6. 16 <0.05 9. 0±4. 8611. 2±6. 17 <0.05 <0.05實驗大鼠對墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物的吸收顯著優(yōu)于硫酸亞鐵組。墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物是較好的補(bǔ)鐵藥物。3.墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物毒性實驗NIH系小鼠(體重20_30g) 20只，雌雄混合，分二組，一組為對照組，一組為墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物實驗組，兩組所用飼料相同，以4. 5g/Kg的劑量給實驗組小鼠灌服墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物(自制)。灌胃15天，無一死亡。觀察其外觀行為無異常，將小鼠處死，觀察內(nèi)臟無異常，并將其心、肝、腎做成石蠟切片，在顯微鏡下進(jìn)行鏡檢，結(jié)果未發(fā)現(xiàn)任何異常。僅算出口服最大耐受量為10. 4g · Kg-1KD5tlKg-1,屬無毒物質(zhì)。4.作為食品添加劑的實驗經(jīng)在餅干、饅頭等食品中添加總原料重量的0. 01-0. 05%的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物， 每天食用1-2次，經(jīng)對食用者500人一年內(nèi)統(tǒng)計，患感冒者僅31人，而未服用以本發(fā)明產(chǎn)品作為添加劑的食品的500人中，患感冒者163人，遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于食用添加劑的患者，患感冒是身
Hb(g/L)
血清鐵(μ mol/L) SI 鐵蛋白 (ng/ml)體免疫力低下的具體表現(xiàn)，表明本發(fā)明的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物可有效提高人體免疫力，防止疾病的發(fā)生。 總之，實驗結(jié)果表明，本發(fā)明方法簡單，穩(wěn)定可靠，易操作，成本低，所制備的墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物用途廣，不但可有效用于制備治療疾病用的藥物中，而且還可在食品中作添加劑使用，提高人體免疫力。
權(quán)利要求
1.一種墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物制備方法，其特征在于，由以下步驟實現(xiàn)①將干燥的墨旱蓮粉加入蒸餾水或飲用水中，墨旱蓮粉與蒸餾水或飲用水的重量比為 1 10-25，60-95°C溫浸1_3次，每次2_6h，過濾后得墨旱蓮多糖溶液；②將!^Cl3加入水中，配制成濃度為2mol/L的!^Cl3離子溶液；將NaOH加入水中，配制成濃度為2mol/L的NaOH離子溶液；③在步驟①制備的墨旱蓮多糖溶液中逐滴加入濃度為2mol/L的NaOH離子溶液至pH 值為8-10，每IOOg干燥的墨旱蓮制成的墨旱蓮多糖溶液中加入檸檬酸三鈉0. 5-5g，攪拌溶解，60-80°C水浴下逐滴加入濃度為2mol/L的FeCl3溶液，邊滴加邊攪拌，同時滴加濃度為 2mol/L的NaOH溶液保持pH為8-10，進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，當(dāng)反應(yīng)液中出現(xiàn)紅色不溶物質(zhì)時，立即停止滴加FeCl3溶液和NaOH溶液，離心除去沉淀，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液；④對墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液裝入透析袋進(jìn)行透析，透析袋的截留分子量為 8000-14000，透析液加入質(zhì)量濃度為95%的乙醇至乙醇含量達(dá)到80%，靜置10-1 過夜， 棄去上清液，得沉淀物，先用無水乙醇將沉淀物洗至上清液無色，再用丙酮和乙醚各洗滌一次，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物。
2.一種墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物在制備防治缺鐵性貧血藥物中的應(yīng)用。
3.—種墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物在制備提高機(jī)體免疫力藥物中的應(yīng)用。
4.一種墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物在制備食品添加劑中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明涉及墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物制備方法及應(yīng)用，可有效解決墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物的制備，并有效用于食品添加劑和提高機(jī)體免疫力以及制備治療缺鐵性貧血的藥物中的問題，其解決的技術(shù)方案是，將干燥的墨旱蓮粉加蒸餾水溫浸、過濾，得墨旱蓮多糖溶液；在墨旱蓮多糖溶液中加入NaOH離子溶液調(diào)pH值，再加入檸檬酸三鈉及FeCl3，邊滴加邊攪拌，同時由NaOH溶液調(diào)pH為8-10，當(dāng)反應(yīng)液中出現(xiàn)紅色不溶物質(zhì)時，立即停止滴加FeCl3溶液和NaOH溶液，離心除去沉淀，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物溶液；然后進(jìn)行透析、醇沉，得沉淀物，對沉淀物進(jìn)行洗滌，得墨旱蓮多糖鐵絡(luò)合物，本發(fā)明可做食品添加劑，也可以藥用，是預(yù)防和治療缺鐵性貧血的藥物，還可以提高機(jī)體的免疫力。
文檔編號A61P37/04GK102268098SQ201110191988
公開日2011年12月7日 申請日期2011年7月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月8日
發(fā)明者劉富崗, 楊云 申請人:河南中醫(yī)學(xué)院