專利名稱：人干擾素在制備治療或預防hpv相關疾病的藥物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及醫藥領域，特別涉及人干擾素在制備治療HPV相關疾病的藥物中的用途。
背景技術：
宮頸糜爛是婦科臨床最常見的一種疾病，是慢性宮頸炎的一種常見病理改變。表現為宮頸外口處的宮頸陰道部外觀呈細顆粒狀的紅色區。近年國內外研究表明人乳頭瘤病毒(HPV)感染與宮頸糜爛的發病有關，而宮頸HPV感染是宮頸癌的主要致病原因，因此，合并HPV感染的宮頸糜爛有進展為宮頸癌的可能，與宮頸癌的發病密切相關。臨床研究表明，宮頸糜爛患者HPV感染與宮頸局部病變輕重，是否合并其他感染及患者的年齡、職業、生育史等諸多因素有關。傳統的宮頸糜爛的治療主要以物理療法為主，將宮頸糜爛面柱狀上皮破壞，使其脫落壞死而被新生的復層鱗狀上皮所覆蓋，治愈宮頸糜爛。而對于合并有病毒感染的宮頸糜爛來說，目前較新的治療方法為局部應用抗病毒藥物如干擾素等進行治療，取得了一定的治療效果。干擾素通過其特異性的抗病毒作用，有效清除宮頸局部病毒感染的同時，提高機體免疫功能，促進宮頸糜爛的愈合。宮頸癌早期及宮頸不典型增生臨床上均表現為慢性宮頸炎的改變，持續性宮頸HPV感染最終可能導致宮頸癌的發生。因此，對合并HPV感染的宮頸糜爛進行早期有效的治療，可預防病變的進一步發展，使病變在早期階段即得到治療，可能在預防其向宮頸癌的進一步轉變方面起作用。宮頸癌(cervical cancer)是最常見的婦科惡性腫瘤之一,在全球婦女癌癥死亡率中位居第二，嚴重威脅著婦女的健康和生活質量。其發生發展已呈現出年輕化的趨勢，每年約有50萬新發病例，其中80%在發展中國家，由于地區間的不同宮頸癌發病有很大差異，我國約占世界1/3，嚴重危害著我國婦女的健康與生命安全。在近年來的研究中發現，HPV(人乳頭瘤病毒)與宮頸炎的發生關系密切，尤其一些高危型的HPV是引起宮頸癌的重要因素，在宮頸癌的活檢組織中幾乎都能找到HPV感染。我國作為一個發展中國家是子宮頸癌的高發地區，每年平均有132300例新發病例，總發病率為0.27%。。大量流行病學調查和分子生物學研究表明，人乳頭瘤病毒(HumanPapillomavirus，HPV)，尤其是高危型HPV(high-risk HPV，hr_HPV)生殖道持續感染是引發子宮頸癌及的CIN重要病原學因素。據統計，在所有子宮頸癌的病例中超過99%可被檢測到高危型HPV DNA。HPV感染后從正常宮頸細胞向宮頸上皮內瘤變及宮頸癌的轉化是多因素參與、漸進發展的過程，高危型人乳頭瘤病毒持續感染是宮頸細胞惡性轉化中的必要因素。大量流行病學和分子生物學研究資料表明，HPV與子宮頸癌及癌前病變密切相關，尤其是高危型HPV(high-risk HPV, hr-HPV)生殖道持續感染是引發子宮頸癌及CIN的重要病原學因素。大部分HPV感染無臨床癥狀或亞臨床感染，但可致嚴重后果，HPV感染預示宮頸上皮內瘤變(CIN)的存在。也有研究發現，持續攜帶HPV強烈提示感染者處于繼發癌前病變的高度危險中。據統計，在所有子宮頸癌的病例中超過99%可被檢測到高危型HPV DNA。研究表明，伴有HPV感染的宮頸上皮內瘤變(CIN)進一步可發展為宮頸癌。
人類乳頭瘤病毒(HPV)屬乳頭瘤病毒家族，是特殊的DNA病毒，具有將正常細胞永生化的能力及高度種屬特異性和特殊嗜上皮性，病毒DNA以整合形成存在于宿主細胞中。HPV是一種無包膜的雙鏈閉環小分子DNA病毒,屬乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬。其感染具有種屬特異性，HPV與多種疾病密切相關，是迄今已被肯定的DNA腫瘤病毒之一，HPV主要感染人的皮膚或粘膜上皮細胞，引發感染部位的良、惡性病變。目前已知HPV6、11、42、43、44等與性傳播疣或尖銳濕疣有關，屬低危型，一般不誘發癌變；而HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68屬高危型，與子宮頸癌及子宮頸上皮內瘤變(CIN)的發生相關。分子生物學研究結果顯示，90%以上宮頸癌伴有HPV感染，主要為HPV16、18亞型。由于從HPV感染一宮頸上皮內瘤變-宮頸癌，需要一個較為漫長的過程，一般為10年時間，且宮頸上皮內瘤變是可以逆轉的病變，而早期宮頸癌5年治愈率高達90%。因此，積極防治HPV感染，特別是高危型HPV感染對預防和降低子宮頸癌的發生具有重要的臨床意義。

發明內容
本發明要解決的技術問題為提供人干擾素在制備治療HPV相關疾病的藥物中的用途。優選地，所述人干擾素選自人干擾素α、人干擾素β和人干擾素Y。優選地，所述人干擾素α選自人干擾素a lb、人干擾素a 2a、人干擾素a 2b和所述三種蛋白的衍生物及類似物。 優選地，所述人干擾素為天然人干擾素或重組人干擾素。優選地，所述HPV相關疾病為單純型HPV感染。在本發明的具體實施方式
中，針對單純型HPV感染，研究本發明所述復方制劑組和對照組在第6個月時轉陰率之間的差異，結果顯示單純型HPV感染在6個月治療后，復方制劑組的總有效率和轉陰率明顯高于對照組。總有效率=FAS集，復方制劑組為69. 81%,對照組為57. 89%，復方制劑組大于對照組；而PPS集對照組大于復方制劑組，復方制劑組為77. 62%，對照組為62. 26%，復方制劑組和對照組有明顯統計學差異。轉陰率FAS集，復方制劑組為69. 18 %，對照組為52. 63 % ；PPS集，復方制劑組為76. 92 %，對照組為56. 60 %。可見本發明所述復方制劑組對單純型HPV感染有顯著的治療效果。優選地，所述HPV相關疾病為高危型HPV生殖道持續感染。更優選地，所述HPV相關疾病為宮頸糜爛、尖銳濕疣、生殖器皰疹或口唇皰疹、帶狀皰疫、皮膚癌、宮頸癌、扁平撫、宮頸上皮細胞瘤變。在本發明的具體實施方式
中，所述藥物的制備方法如下步驟I :在人干擾素原液中加入人血白蛋白得到混合溶液，使白蛋白終濃度為1% -5%，加入與混合溶液等體積的穩定劑混勻，水浴加熱O. 5-3min，冷凍干燥成粉末；所述穩定劑選自SDS，尿素和巰基乙醇的混合物，甘氨酸，肝素，海藻糖，維生素C或還原型谷胱甘肽。步驟2 :稱取羧甲基纖維素鈉50-200g、甘油500_1500ml、山梨酸10_20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至60-100°C混勻，待基質冷卻至10-40°c時，調pH至4. 0-9. 5，備用;步驟3 :將步驟I人干擾素粉末加至步驟2制備的基質混合均勻，分裝即得。優選地，所述藥物的制備方法中每IOOOg基質中加入干擾素粉末
I.OXlO6-L OXlO9 國際單位。優選地，所述人干擾素為人干擾素a 2b。 本發明實施例制備的制劑為人干擾素，具有抗病毒，抗腫瘤及免疫調節活性，增強機體抗病毒能力，同時還具有消除DNA結構損傷的功能，從而導致細胞遺傳機制的恢復，使損傷修復。它通過激活靶細胞的抗病毒基因，產生抗病毒蛋白，抑制病毒DNA的復制和mRNA的轉錄，從而起到抑制病毒的作用。而且干擾素尚可激活自然殺傷細胞、巨噬細胞，調控主要組織相容性抗原的表達。臨床試驗顯示，本發明制得的藥物制劑治療HPV感染有一定療效，而對高危型及單純型HPV病毒感染有顯著的治療效果。與現有的注射用干擾素相比，本發明所述制劑具有無痛、方便、有效、無副作用等優點，其透皮吸收性好，能達到局部抗病毒有效抑制細胞増殖的作用；另外，其穩定性佳，常溫保存3個月效價幾乎沒有變化，具有良好的臨床應用前景。本發明對于防治HPV感染，特別是高危型HPV感染，預防和降低子宮頸癌的發生具有重要的臨床意義。
具體實施例方式本發明公開了人干擾素在制備治療HPV相關疾病的藥物中的用途，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進エ藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技木。為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進ー步的詳細說明。實施例I、制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為5% (W/V)，然后根據加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩定劑SDS，混勻，水浴加熱O. 5-3min，冷卻，分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備精確稱取羧甲基纖維素鈉200g、甘油500ml、山梨酸20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至100°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至40°C時，調pH至7. 5，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO9國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例2、制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為1% (W/V)，然后根據加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩定劑還原型谷胱甘肽，混勻，水浴加熱O. 5min，冷卻，分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備 精確稱取羧甲基纖維素鈉50g、甘油1500ml、山梨酸IOg混合后，加注射用水至IOOOOg,加熱至60°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至10°C時，調pH至4. 0，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO6國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例3制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為3% (W/V)，然后根據加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩定劑維生素C，混勻，水浴加熱2min,冷卻，分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備精確稱取羧甲基纖維素鈉100g、甘油750ml、山梨酸15g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至80°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至30°C時，調pH至9. 5，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO8國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例4制劑處方エ藝(I)人干擾素原液的處理根據人干擾素原液體積加入人血白蛋白，使人血白蛋白終濃度為2% (W/V)，然后根據加過白蛋白的人干擾素溶液的總體積加入等體積的穩定劑肝素，混勻，水浴加熱
2.5min,冷卻,分裝后進行冷凍干燥成粉末。(2)基質制備精確稱取羧甲基纖維素鈉80g、甘油600ml、山梨酸18g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至90°C充分攪拌混勻，待基質冷卻至20°C時，調pH至6. 0，備用。(3)人干擾素制劑的制備將人干擾素粉末加入至基質中(每IOOOg基質中加入人干擾素粉末I. OXlO7國際單位)，不斷攪拌至完全混合均勻。實施例5、HPV轉陰率臨床研究I.試驗總體設計本試驗采用多中心、隨機、開放、平行、空白對照設計。試驗組(實施例I的制劑組)和對照組(安慰劑組)入組患者的比例為2 I。計劃共入選432例病例，其中試驗組為288例，對照組為144例。實施例I制備的試驗藥物的用法為一次一支，隔日用藥一次，連續使用10次為I個療程。2.治療周期的確定試驗目的主要是探索人干擾素對于HPV轉陰率的影響，根據文獻報道HPV病毒的復制周期是8-12周，因此用藥周期為3個月。
3.樣本量估算3. I計劃共入選432例病例，其中試驗組為288例，對照組為144例。研究實施步驟按照下表進行。
權利要求
1.人干擾素在制備治療或預防HPV相關疾病的藥物中的用途。
2.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述人干擾素選自人干擾素α、人干擾素β和人干擾素Y。
3.根據權利要求2所述的用途，其特征在于，所述人干擾素α選自人干擾素alb、人干擾素a 2a、人干擾素a 2b和所述三種蛋白的衍生物及類似物。
4.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述人干擾素為天然人干擾素或重組人干擾素。
5.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相關疾病為單純型HPV感染。
6.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相關疾病為高危型HPV生殖道持續感染。
7.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述HPV相關疾病為宮頸糜爛、尖銳濕疣、生殖器皰疹或口唇皰疹、帶狀皰疹、皮膚癌、宮頸癌、扁平疣、宮頸上皮細胞瘤變。
8.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述藥物的制備方法如下 步驟I :在人干擾素原液中加入人血白蛋白得到混合溶液，使白蛋白終濃度為1% -5%,加入與混合溶液等體積的穩定劑混勻，水浴加熱O. 5-3min，冷凍干燥成粉末； 步驟2 :稱取羧甲基纖維素鈉50-200g、甘油500-1500ml、山梨酸10_20g混合后，加注射用水至lOOOOg，加熱至60-100°C混勻，待基質冷卻至10-40°C時，調pH至4. 0-9. 5，備用； 步驟3 :將步驟I人干擾素粉末加至步驟2制備的基質混合均勻，分裝即得。
9.根據權利要求I所述的用途，其特征在于，所述藥物的制備方法中每IOOOg基質中加入干擾素粉末I. OX IO6-L OX IO9國際單位。
10.根據權利要求8或9所述的用途，其特征在于，所述人干擾素為人干擾素a2b。
全文摘要
本發明涉及醫藥領域，公開了人干擾素在制備治療或預防HPV相關疾病的藥物中的用途。臨床試驗顯示，人干擾素治療HPV感染有療效，尤其是單純型HPV感染和高危型HPV生殖道持續感染有顯著的治療效果。本發明對于防治HPV感染，特別是單純型HPV感染，預防和降低宮頸糜爛、宮頸癌的發生具有重要意義，具有良好的臨床應用前景。
文檔編號A61P17/12GK102614497SQ20121010494
公開日2012年8月1日 申請日期2012年4月11日 優先權日2012年4月11日
發明者凌娟, 吳艷, 張國輝, 戴向榮, 李小羿 申請人:兆科藥業(合肥)有限公司