專利名稱：含氣金屬配合物作為超聲造影劑的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及在權利要求書中所表征的主題，即其中配位至少一個原子或分子的金屬配合物在超聲診斷中的應用，而所述原子或分子在從配合物上解離后為氣體形式的。
在病理狀況診斷中，超聲診斷的使用正逐漸增加，這是因為與X-射線診斷或者放射診斷法相比，它可以避免使用非常麻煩的離子線，而且與磁共振成象相比是經濟的。
在此情況下，成象時要利用組織或者體液之不同聲學性質(所謂的聲密度)。
通過在檢查區域中引入與該身體組織/體液之聲密度明顯不同的介質(造影劑)，可提高超聲造影。氣體即是該種介質。因此，大多數的超聲造影劑基本上基于包含氣泡和/或含氣體之物質的懸浮液。
在最簡單的情況下，可通過如搖動或者聲輻射的方法在大多數含水懸浮介質中引入小氣泡，添加劑如表面活性劑或者增粘劑可選擇性地使小氣泡穩定在懸浮介質中。例如EP 0 077 752描述了此類造影劑。
其他造影劑的制備由其中配入“預制”之氣泡的固態載體開始。該氣泡在用合適的稀釋劑重新懸浮后釋放出來，并產生可使用的氣泡懸浮液(見例如EP 0 122 624)。
在最簡單的情況下，氣泡可如上所述通過表面活性劑(EP 0 077752)來穩定。其他制備方法由脂質雙層(WO 94/28780)開始。但是如EP 0 327 490 B1或者EP 0 441 468中所述，也可通過或多或少呈柔性的聚合物壁來確保穩定作用。
除糖類(EP 0 052 575)外，所述(EP 0 357 163)的固態載體也可包括主體-客體配合物，該配合物可在使用前溶解或者懸浮或者乳化在合適的載體中，并產生可使用的氣泡分散液。
氣體也可僅在制備制劑時產生。這樣，可從碳酸鹽和碳酸氫鹽中釋放出酸誘導的二氧化碳，而且如此產生的氣泡可用各種方法穩定(EP 0077 752、WO 91/09629)。
氣泡也可在體內通過溫度誘導的方式例如由液態低沸點前體物質來產生。此類造影劑見EP 0 327 490或者WO 91/09629中所述，其中，由體溫活化的向氣態的轉變可由液體前體物質在體內進行。
其中氣泡呈準游離形式存在的造影劑的缺點是，在施用于血流后，氣泡存留在血管空間中，因此使在該區域中的診斷仍非常有限。通過例如聚合物殼(EP 0 327 490)穩定的氣泡也可通過吞噬作用被網狀內皮系統細胞吸收，因此也可進行細胞內空間的診斷。
在診斷間隙空間時，已知的造影劑表現得非常不合適。細胞內空間的診斷限制在包含巨噬細胞的身體區域中[肝(Kupffer細胞)、淋巴結(固定的巨噬細胞)和肺(肺泡巨噬細胞)]。具體而言，已知的造影劑不適合用于功能和鑒別診斷中。
因此，本發明的目的是提供可克服上述缺陷的造影劑，即找出適合于間隙空間或者整個細胞內空間之診斷、特別是適合于功能和鑒別診斷的造影劑。
該目的由本發明來解決。
發現以下水溶性金屬配合物特別適合于用作超聲診斷的造影劑，所述配合物中配位至少一個原子或者分子，該原子或者分子在從所述配合物上解離后為氣態的。
在此情況下，氣體的釋放取決于所選的配合物以及使用于口服或者血管給藥之后，并可通過pH值、溫度、氧化或還原反應、以及酶反應來控制。
各種包含氣體的金屬配合物的此種性質使它們可特別被用于功能和鑒別診斷中。其結果是得到新型的超聲造影劑，該造影劑根據所要診斷之身體區域的生理或者病理狀況以可控的方式釋放氣體，并因而使所希望的診斷成為可能。
根據本發明，常規的氣泡形成以及選擇性的氣泡形成在血管系統中都是可能的，常規的氣泡形成以血管中占主導地位的條件，如pH值、溫度、酶、生理氧化劑、以及還原劑為基礎，而選擇性氣泡形成與限于局部存在的生理或者病理參數或者功能有關。因此，作為疾病征象之癥狀和病因的病理變化的檢查是可能的。
根據本發明，可使用由中心金屬原子、至少一個配位體、以及至少一個在正常條件下為氣體物質的分子組成的配合物。
雖然實際意義上的配位氣體分子可被視作配位體，但是以下術語“配位體”只是用于表示在游離狀態下不是氣體的分子部分。
眾所周知，金屬配合物取決于配位數和氧化數可有許多不同的結構。觀察到的配位數在2-10之間，其中，已知的金屬配合物中的大多數具有4-7的配位數。
該配合物的結構基本上通過配位數來決定。嚴格的線性、四面體形、平行四角形、三角雙錐形、和八面體形配合物，以及扭曲的配合物幾何形都是可能的，由此各氣體分子或者氣體前體(例如在氫化配合物的情況下)可端連、端連-橋連、側連或者側連-橋連配位。
文獻中已描述了帶有各種氣體的金屬配合物。根據本發明，在此情況下，可使用作為氣體前體或者產生CO、CO2、H2、N2、H-、O2的配合物，其中N2是特別優選的。
其他可能的氣體配位體產生不飽和的烴(烯或炔烴)或它們的鹵化物，特別是氟化衍生物。例如，可提及的有乙炔(C2H2)、乙烯(C2H4)、丙炔(C3H4)和丙二烯(C3H4)。此類烴以及它們的衍生物也可從包含相應去質子形式的氣體前體的配合物中釋放。
元素周期表中的第二至七族的所有金屬基本上都可用作金屬(中心)原子，這是因為它們具有一個空軌道，可用于吸收配位體的自由電子對。典型的金屬配合物特別是副族元素，這是因為它們中有自由的d-或者f-軌道用于配位鍵合。
中心原子通常具有多個氧化態。標準的配合物中心原子是原子序數為21-30、39-48、57-81(包括鑭系金屬)和89-103(包括錒系金屬)的過度態金屬。特別合適的是以下族的金屬原子(i)銅族(Cu、Ag、Au)(ii)鋅族(Zn、Cd、Hg)(iii)鈧族(Sc、Y、La)(iv)鈦族(Ti、Zr、Hf)(v)釩族(V、Nb、Ta)(vi)鉻族(Cr、Mo、W)(vii)錳族(Mn、Tc、Re)(viii)鐵族(Fe、Co、Ni)或者(ix)鉑族(Os、Ru、Rh、Ir、Pd、Pt)，其中，優選帶有鐵和鉑族元素的氣體配合物。
但是，沒有自由軌道的金屬如主族的金屬也基本上是合適的。作為形成氣體的組份，例如氫離子可如鹽一樣連接在該化合物上，并在質子存在時產生H2氣泡。
所有帶有至少一個自由電子對的原子或者分子都可用作配位體。在此情況下，也存在自由電子相對于不只一個而是幾個中心原子(橋連配位體)的可能性。然而在例如O2-或者N3-配合物中觀察到的在配位體和金屬原子之間的多重鍵也是可能的。
而且，也存在占據多個配位點的配位體(所謂的多配位基配位體)。對此，該配位體分子中必須具有幾個供體點。因此，有二配位基(乙二胺，草酸化)、三配位基(二乙基三胺)、四配位基(三乙基四胺)、六配位基(EDTA、CDTA)、八配位基(DTPA)和十配位基(TTHA)配位體。此類配位體也可涉及只帶有它們所能連接的最多配位點的一部分的配合物。
通過以各種方式安排不同的配位體，可形成具有cis-trans-異構體和光學異構體的配合物。
能夠配合的配位體例如有H-(氫)、F-(氟)、Cl-(氯)、Br-(溴)、I-(碘)、H2O(水)、OH-(氫氧)、O2-(氧)、O2(二氧)、ONO-(亞硝酸基)、O22-(過氧)、THF(四氫呋喃)、OCN-(氰氧基)、SCN-(硫氰基)、S2-(硫)、S22-(二硫)、SH-(巰基)、N2(二氮)、N3-(疊氮)、NH3(氨基)、NH2-(酰胺基)、NH2-(亞氨基)、N3-(次氮基)、烯、二烯、三烯、乙二胺、二乙基三胺、三乙基四胺、NO+(亞硝酰基)、NO2-(硝基)、NC-(異氰基)、NCR(腈)、NCO-(異氰氧基)、NCS-(異氰硫基)、py(吡啶)、dipy(二吡啶基)、PF3(三氟化磷)、PR3(膦烷(Phosphan))、diphos(二膦烷)、AsR3(胂烷(Arsan))、diars(二胂烷)、甲硼烷、氮雜甲硼烷、硼二環烷、硼二環[3.3.1]壬烷、硼酸(Boronsauren)、HBO2C6H4、HIMDA(N-羥基乙基亞氨基二乙酸)、HEDTA(N-羥基乙二胺-N，N′，N′-三乙酸)、NTA(次氮基三乙酸)、EDTA(乙二胺四乙酸)、CDTA(環己二胺四乙酸)、PDTA(戊二胺四乙酸)、EGTA(1，2-乙二醇-O，O′-二(2-氨基乙基)-N，N，N′，N′-四乙酸)、DTPA(二乙基三胺五乙酸)、TTHA(三乙基四胺-N，N，N′，N″，N，N-六乙酸)、四氮雜環十二烷(EP 0 255 471)的衍生物、配合酸(DE 34 01 052和EP 0 071564)、DTPA的衍生物(EP 0 405 704)、蛋白質、肽、卟啉衍生物(WO 94/07894)、Podanden[開鏈冠醚和雜冠醚(N、S、P、As)]、Coronanden[單環冠醚和雜冠醚(N、S、P、As)]、Cryptanden[寡環冠醚和雜冠醚(N、S、P、As)]、Dendrimeren的金屬配合物(WO 95/17451)、CH3-(甲基)、C2H-(乙炔基)、C2H4(乙烯)、C3H5-(烯丙基)、C4H6(丁二烯)、C5H5-(環戊二烯基)、C5H6(環戊二烯)、C6H6(苯)、C6H8(環己二烯)、C7H7+(環庚三烯鎓)、C7H8(環庚三烯)、C7H10(環更二烯)、C8H12(環辛二烯)、CO(羰基)、OX2-(草?；?-)、CN-(氰基-C)、CNR(異腈)、-CNO-(雷酰-C)。
根據本發明，優選的配位體能夠按以下方式直接或間接地影響與氣體配位體的鍵連即在生理狀況下釋放氣體。氣體的釋放可以誘導，例如根據所在位置的pH，多配位基配位體能夠產生另外可配位的電子對。如果發生配位，可進行氣體配位體如N2的置換。該多官能配位體是例如EDTA、CDTA、PDTA、ox、以及包含雙鍵的配位體如烯、二烯或三烯。
其他根據pH值誘導氣體釋放的可能方式是通過中心原子之pH依賴性的氧化還原電勢。通常情況下，在氧化后，中心原子失去鍵合氣體組份的能力。對于二氮分子尤為如此。特別是鐵和鉑族金屬(如Fe、Ru、Os)具有pH依賴性的氧化還原電勢，使得可通過生理條件下存在或者同時或隨后給藥的氧化劑來實現所述釋放。
也可通過酶如酯酶來改性“配位體臂”，以此提供可配位的新基團。如果該新產生的基團比氣體組份具有更高的對中心原子的親和性，該新的基團則可通過配位置換中心原子中的反襯氣體組份。
除二氮配合物外，主要是氫化配合物也可用于本發明，該配合物在文獻中已被大量描述。同樣，該配合物可用作根據本發明的超聲造影劑。在此，氣體組份并不直接釋放，而只是在與質子反應之后才釋放。在氫化配合物中，在含水介質中緩慢反應的配合物如Li[AlH(OC)(CH3)3]或者Selectride(R)如KB[CH(CH3)C2H5]3H是特別適合的。
在含水介質中，穩定的釕-氫配合物是合適的。此類配合物描述于例如Rodriguez等人在An.Quim.Int.Ed.92(3)(1996)131-133中的文章。除金屬離子外，這些配合物通常還包含作為配位體的硼-氫基團(硼氫化物)。根據本發明，可使用如下的釕配合物[RuH(η6-C6H4O2BO2C6H4)(PCy3)2]、[RuH(H2BBN)(PCy3)2]、[RuH(H2BBN)(CO)(PCy3)2]、[RuH(H2BBN)(H2)(PCy3)2]、[RuH(OH)(PCy3)2(H2O)]、[RuH(OH)(H2)(PCy3)2(H2O)]、[RuH(OH)(H2)(PCy3)2(H2O)]，其中，η6-C6H4O2BO2C6H4代表
基團，該基團衍生自基本兒茶酚結構。在該配合物中，兩個兒茶酚環之一通過η6-鍵連接在金屬上。Cy代表環己基、苯基或者芐基；H2BBN代表9-硼二環[3.3.2]壬烷。
另外，配位體具有至少一個α-氨基酸或者一個N-?；?α-氨基酸的配合物也是合適的。此類可用于本發明中的配合物描述于K.Severin等人在Z.Anorg.Allg.Chem 622(1966)562-570中的文章。例如，可提及的有[RuCl(O2CCHRNHCOR′(CO)(PPh3)2]或者[RuH(O2CCHRNHCOR′(PPh3)2]，其中R指氫原子或者異丁基，R′是甲基或苯基，以及銥配合物[IrH2(O2CCH2NHCOPh(PPh3)2]。
為進行呼吸鏈或者檸檬酸循環，生理氧化還原系統在細胞內是必須的。在象級聯般進行的呼吸鏈中，形成ATP。呼吸鏈的底物是還原輔酶如NAD和NADH。必須的酶位于線粒體膜中。在進行細胞氧化還原反應時，通常需要作為酶的氧化酶或者還原酶、H-或者電子轉移輔酶、以及底物。
輔酶和底物通常具有pH依賴性的氧化還原電勢。取決于影響氧化還原電勢的現存濃度，也可進行與非生理或者病理物質的氧化還原反應，例如也與帶有氣體或氣體形成配位體之配合物中的這些原子。
特別是通過氧化反應，此類配合物失去它們與配位氣體如氮的鍵合能力，因此可用超聲來檢測。
例如，通過可生理合適的氧化劑，配合物之溶酶體內的氧化反應是合適的。
其他生理合適的可用于本發明中的氧化或還原劑列于下表中
標準電勢，pH＝7
上述生理上無害的氧化和還原劑可在本發明之造影劑制劑之后或者同時給藥。它們可血管內或者局部注射至身體中待檢查的部位。該過程也可反過來。
除通過使用氧化還原系統使氣體從配合物中釋放外，當然也可使用在體內已存在的系統。
在此情況下，在血管內的空間中，可考慮基本氧化還原系統FeII/FeIII和CuI/CuII。
基本上，除pH外，配位體對中心原子的氧化或還原性質具有非常強的影響也是可接受的。因此，如果通過氧化還原反應釋放氣體是通過在體內的反應物來觸發的，那么并非所有的配位體都是適合的。在此情況下，產生電子的配位體穩定低氧化態并產生氧化還原電勢，則通常也是可接受的。但是吸電子的配位體穩定更高的氧化態并減低氧化還原電勢。
配合物的幾何形狀對氧化還原電勢也有影響。因此，對于在體內條件下控制氣體的釋放，存在很多的可能性。
配位體以及幾何形狀對氧化還原電勢的影響可通過以下實施例來說明。對于RuII(NH3)5N2+配合物來說，使用環形電壓計在幾個研究中測定pH7.0時的氧化電勢為860mV(NHE)，而287mV的電勢表明與Ru(EDTA)N22-非常相似(Diamantis和Dubrawski；Inorg.Chem.22，(1983)1934/46)。
根據本發明之釋放氣體的金屬配合物還可用于結構特異性的超聲檢測。為此目的，可使用具有結構特異性結合位如除配位體之外的抗體、受體、肽、或者核酸的配合物。在如上所述完成結合后，給予可使氣體從配合物中釋放出來的合適的氧化或還原劑。給予氧化/還原劑應在配合物的非特異性結合部分已通過例如腎濾被從身體中消除時適當地進行。上述釋放氣體的配合物或帶有可被解離之氣體組份的分子可按現有技術中已知的方法配制成超聲造影劑。
在此情況下，取決于給藥的方法，含水溶液、乳液或者懸浮液通?？砂谥扑帢I中通常使用的輔劑。但是上述造影劑也可作為試劑盒來提供，其中，配合物和懸浮劑或溶劑儲存在單獨的容器中，并僅在給藥之前制備待給藥的造影劑。制備該造影劑的更為詳細的信息可從現有技術中匯集，例如EP 0 071 564。
根據本發明的造影劑通常包含10-2-10-6mol/ml的含氣體的金屬配合物，并以10-2-10-8mol/kg體重的劑量給藥。根據診斷問題，可靜脈或口服給藥。
以下實施例用于說明本發明的主題，而本發明并非限制于這些實施例中。實施例1[RuII(NH3)5N2]Br2的合成根據Armor和Taube描述的方法(J.Am.Chem.Soc.92，6170 ff.)進行。將0.2g[RuIII(NH3)5Cl]Cl2溶解在100ml的0.1N HCl中。在該溶液中通過兩個含有90ml 1.25％CrIICl2溶液的洗瓶引入笑氣(N2O)，各10分鐘。在反應料中加入22ml 1.25％CrIICl2溶液后，再引入笑氣1小時，然后引入氧氣30分鐘。借助40g溴化鈉，過夜沉淀[RuII(NH3)5N2]Br2。離心該沉淀物，用甲醇和丙酮洗滌，然后干燥。實施例2與實施例1類似地合成[RuII(NH3)5N2]BF4，其中，用NaBF4沉淀出所希望的配合物。實施例3將10mg實施例1中制備的配合物加至10ml 0.01％H2O2溶液(pH4)中。用診斷用超聲儀(HP 77020E)和5MHz聲頭觀察B-像的變化。在平均的聲輸出時，在短暫的反應時間后可觀察到氣泡的升起。實施例4100mg實施例1中制備的氮配合物稱量至GC管中。將管中的氣體換成氦氣，在加入10ml 5％Ce(IV)溶液的前或后，用氣相色譜研究頭部空間。使用WLD-檢測儀，通過添加氧化劑可清楚地證明配位的氮被釋放出來。實施例5分別將2mg實施例2中制備的配合物溶解在0.5ml水中，然后分別加至0.5ml 0.01％H2O2溶液(pH2、4和6)中。在反應10分鐘后，用肉眼顯微鏡觀察氣泡的產生。
權利要求
1.其中配位至少一個原子或分子的金屬配合物在超聲診斷中的應用，所述原子或分子在從所述配合物上解離后為氣體形式的。
2.如權利要求1的金屬配合物應用，其是制備用于超聲診斷的造影劑。
3.如權利要求1的金屬配合物應用，其是用于超聲功能診斷和鑒定診斷。
4.如權利要求3的金屬配合物應用，其特征在于，通過pH或溫度的變化使形成氣體的配位體在體內從金屬配合物中釋放。
5.如權利要求3的金屬配合物應用，其特征在于，通過酶反應使形成氣體的配位體在體內從金屬配合物中釋放。
6.如權利要求3的金屬配合物應用，其特征在于，通過氧化還原反應使形成氣體的配位體在體內從金屬配合物中釋放。
7.如權利要求6的金屬配合物應用，其特征在于，氧化劑與金屬配合物同時或者隨后注射。
8.如權利要求7的金屬配合物應用，其特征在于，注射乙醛/乙醇、草酸乙酯/馬來酸、富馬酸/琥珀酸、脫氫抗壞血酸/抗壞血酸、細胞色素b、泛氫醌/泛醌、細胞色素c或細胞色素a作為氧化劑。
9.用于超聲診斷的介質，其包含其中配位至少一個原子或分子的金屬配合物，所述原子或分子在從所述配合物上解離后為氣體形式的。
10.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，在金屬上配位CO、CO2、H2、N2、H-、O2和/或C2H4、C2H2、丁二烯、丙烯、甲基乙炔、丙二烯，其任選地完全或部分被氟化。
11.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，包含銅族、鋅族、鈧族、鈦族、釩族、鉻族、錳族、鐵族或者鉑族元素作為金屬。
12.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，包含鐵族或鉑族元素作為金屬。
13.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，在金屬上配位以下至少一個基團作為配位體H-、F-、Cl-、Br-、I-、H2O、OH-、O2-、O2、ONO-、O22-、THF、OCN-、SCN-、S2-、S22-、SH-、N2、N3-、NH3、NH2-、NH2-、N3-、烯、二烯、三烯、NO+、NO2-、NC-、NCR、NCO-、NCS-、py、dipy、PF3、PR3、diphos、AsR3、diarsan、甲硼烷、氮雜甲硼烷、硼二環烷、硼二環[3.3.1]壬烷、硼酸、HBO2C6H4、N-羥基乙基亞氨基二乙酸、N-羥基乙二胺-N，N′，N′-三乙酸、次氮基三乙酸、乙二胺四乙酸、環己二胺四乙酸、戊二胺四乙酸、1，2-乙二醇-O，O′-二(2-氨基乙基)-N，N，N′，N′-四乙酸、二乙基三胺五乙酸、三乙基四胺-N，N，N′，N″，N，N-六乙酸、四氮雜環十二烷、蛋白質、肽、卟啉、Podands、Coronand、Cryptand、Dendrimere、CH3-、C2H-、C2H4、C3H5-、C4H6、C5H5-、C5H6、C6H6、C6H8、C7H7+、C7H8、C7H10、C8H12、CO、OX2-、CN-、CNR、-CNO-。
14.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，在金屬原子上配位至少一個α-氨基酸作為配位體。
15.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，在金屬原子上配位至少一個N-?；?α-氨基酸作為配位體。
16.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是氫化配合物。
17.如權利要求16的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是釕氫配合物。
18.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物包含硼氫基團。
19.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(η6-C6H4O2BO2C6H4)(PCy3)2]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
20.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(H2BBN)(PCy3)2]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
21.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(H2BBN)(CO)(PCy3)2]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
22.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(H2BBN)(H2)(PCy3)2]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
23.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(OH)(PCy3)2(H2O)]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
24.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(OH)(H2)(PCy3)2(H2O)]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
25.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述釕氫配合物是[RuH(OH)(H2)(PCy3)2(H2O)]，Cy代表環己基、苯基或者芐基。
26.如權利要求17的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是[RuH(O2CCHRNHCOR′(PPh3)2]，R指氫原子或者異丁基，而R′是甲基或苯基。
27.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是[RuCl(O2CCHRNHCOR′(CO)(PPh3)2]，R指氫原子或者異丁基，而R′是甲基或苯基。
28.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是[IrH2(O2CCH2NHCOPh(PPh3)2]。
29.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是[Ru11(NH3)5N2]Br2。
30.如權利要求1的金屬配合物應用，其特征在于，所述金屬配合物是[Ru11(NH3)5N2](BF4)2。
全文摘要
本發明涉及含氣體之金屬配合物在超聲診斷、特別是功能和鑒定診斷中的應用。
文檔編號A61K49/22GK1202115SQ96198254
公開日1998年12月16日 申請日期1996年11月8日 優先權日1995年11月13日
發明者馬蒂娜·伯格曼, 迪特爾·赫爾德曼, 德特烈夫·澤爾茨勒, 維爾納·維齊斯 申請人:舍林公開股份有限公司