專利名稱：含有葒草的組合物在防治更年期疾病和延緩衰老中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及組合物的應(yīng)用，特別涉及含有葒草的組合物在制備防治更年期疾病和延緩衰老的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
更年期是人生中的一個(gè)重要階段，這個(gè)階段人的生理上變化較大，抵抗疾病的免 疫功能降低，神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的功能逐漸衰退，激素水平降低，常常帶來(lái)一系列的軀體疾病 和情緒上的變化，同時(shí)還承受著來(lái)自工作、學(xué)習(xí)、家庭、婚姻以及社會(huì)各方面的壓力，因而在 心理上也發(fā)生著明顯的變化。婦女從生育年齡過(guò)渡到老年階段，因卵巢功能減退會(huì)給機(jī)體帶來(lái)的一系列改變， 會(huì)出現(xiàn)如高血壓、面色潮紅、眩暈、耳鳴、眼花、失眠、記憶力減退、焦慮、抑郁、神經(jīng)過(guò)敏、易 激動(dòng)、情緒不穩(wěn)、關(guān)節(jié)肌肉疼痛、月經(jīng)紊亂等等癥狀，稱之為更年期綜合征，是婦女絕經(jīng)期前 后出現(xiàn)的一種癥候群。更年期抑郁癥是一種發(fā)生在更年期的常見(jiàn)精神障礙，抑郁癥患者常 有某些軀體或精神因素作為誘因，發(fā)生生理和心理方面的改變。多以消化系統(tǒng)、心血管系統(tǒng) 和植物神經(jīng)系統(tǒng)的臨床癥狀為主要表現(xiàn)食欲減退、上腹部不適、口干、便秘、腹瀉、心悸、血 壓改變、脈搏增快或減慢、胸悶、四肢麻木、發(fā)冷、發(fā)熱、性欲減退、月經(jīng)變化以及睡眠障礙、 眩暈、乏力等。目前有效的治療方法是激素替代療法和中藥方劑的治療。西藥多用鈣制劑、谷維 素、雌激素、雄激素以及降鈣素等藥來(lái)防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥，雖有一定療效，但是副作用 較大，長(zhǎng)期服用易患乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等婦科腫瘤。而中藥復(fù)方含多味藥，單味藥含有多 種成分，因此可以通過(guò)多層次、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)發(fā)揮作用，能夠達(dá)到保養(yǎng)卵巢、推遲更年期、 延緩衰老的效果。含有葒草的組合物由葒草、三七、山楂葉、川芎四味藥組成。方以葒草味辛，性涼， 活血、散瘀、止痛為君藥；輔以三七、山楂葉宣暢心陽(yáng)，疏通心脈，蠲除瘀阻，散瘀止痛；川芎 則辛散溫通，為血中之氣藥，有通達(dá)氣血之功，助氣血運(yùn)行，用之為佐使。全方以辛、甘為主， 溫、涼并行。辛能散瘀化滯，溫可通行血脈、促進(jìn)血行；甘緩溫通，苦降下泄，散瘀和血，瘀散 則血自歸經(jīng)，具有活血化瘀、通脈止痛功能。主要用于冠心病心絞痛心血瘀阻證，癥見(jiàn)胸悶、 胸部刺痛，固定不移，心悸不寧，唇舌暗紫，脈細(xì)澀等冠心病心絞痛見(jiàn)上述證候者，用藥至今 未見(jiàn)利用上述組合物對(duì)更年期疾病和衰老方面的防治作用的臨床藥理研究方面的報(bào)道。中國(guó)專利申請(qǐng)200610200023. 2中公開(kāi)的是含有葒草、三七、山楂葉和川芎的組合 物制劑及其制備方法，主要用于治療冠心病心絞痛的用途。但本申請(qǐng)人經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的試驗(yàn) 研究后，還意外地發(fā)現(xiàn)，上述含有葒草的組合物在防治更年期疾病和延緩衰老方面具有明 顯的治療效果。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種含有葒草的組合物在制備防治更年期疾病和延緩衰老的藥物方面的應(yīng)用。
本發(fā)明提供了含有葒草的組合物在制備預(yù)防和治療更年期綜合征藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了含有葒草的組合物在制備預(yù)防和治療更年期抑郁癥藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了含有葒草的組合物在制備預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供了含有葒草的組合物在制備預(yù)防延緩衰老藥物中的應(yīng)用。所述含有葒草的組合物是從葒草、三七、山楂葉和川芎中提取出的具有藥用價(jià)值 的提取物制成的制劑。按照生藥的重量配比葒草1 10份、山楂葉1 10份、三七1 10份和川芎 1 10份；優(yōu)選的配比為趕草5份、山楂葉4份、三七3份和川芎3份。本發(fā)明的含有葒草的組合物，其中葒草具有散血、消積、止痛的功能，主要含黃酮 類葒草素、葒草甙、葉綠醌等成分，可用于風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、心肌缺血、降血壓、腳氣瘡腫的治 療，為主藥；三七、山楂葉具有宣暢心陽(yáng)，疏通心脈，蠲除瘀阻，散瘀止痛的功能，川芎具有散 瘀化滯的功能，為輔藥。本發(fā)明提供的含有葒草的組合物中，其葒草、山楂葉、三七和川芎的有效成分提取 物可以按照專利號(hào)為200610200023. 2中的煎煮、醇沉、樹(shù)脂分離以及超臨界二氧化碳萃取 的方法進(jìn)行提取，也可以采用藥材單獨(dú)提取分離的方法進(jìn)行提取，還可以用常規(guī)的方法進(jìn) 行提取。本發(fā)明含有葒草的組合物可以根據(jù)需要加入一種或多種藥學(xué)上可以接受的載體， 如稀釋劑、賦形劑、填充劑、崩解劑、濕潤(rùn)劑、粘合劑、表面活性劑、吸收促進(jìn)劑、潤(rùn)滑劑等等， 按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法，制備需要的劑型。本發(fā)明所述含有葒草的組合物制成的制劑包括軟膠囊劑、滴丸、丸劑、顆粒劑、片 齊 、膠囊劑、口服液、注射液、注射用凍干粉針劑、大輸液。優(yōu)選為軟膠囊劑。為了使本領(lǐng)域普通技術(shù)人員更好的理解本發(fā)明，以下通過(guò)實(shí)驗(yàn)及實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步 闡述本發(fā)明葒葉心通制劑的組成、其制備方法及用途一、藥物的制備原料趕草5份、山楂葉4份、三七3份和川芎3份制備方法一葒草、山楂葉、三七加10倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾 液，減壓濃縮至相對(duì)密度1. 10，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液 減壓回收乙醇并濃縮至相對(duì)密度1.07，加適量水稀釋，上徑高比1 10的大孔吸附樹(shù)脂柱， 吸附流速2BV · h—1，棄去穿透液，用IBV水洗，流速2BV · h—1，棄去水洗液，繼用3BV70%乙醇 洗脫，流速2BV·!!—1，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮成稠膏，殘留物進(jìn)行微波真空干燥，粉碎成 細(xì)粉，得葒草、山楂葉、三七提取混合物；川芎藥材粉碎成粉末，過(guò)3號(hào)篩，用超臨界二氧化碳萃取，以壓力為30MP、溫度為 50°C、流量為20L/h的條件萃取4h，解析壓力10MP，溫度40°C，收集，得川芎萃取物；將川芎萃取物加入葒草、山楂葉、三七提取混合物中，再加入適量含2%蜂 蠟的大豆油，混合均勻，備用；以明膠甘油蒸餾水防腐劑(泥泊金甲酯)= 1 0.4 1 0.002制備囊材，壓制即得軟膠囊劑。需要說(shuō)明的是，以上僅僅是介紹一種制備提取物的方法及制備成軟膠囊劑的方 法，是為了闡釋本發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。
二、試驗(yàn)例(一 )含有葒草的組合物對(duì)更年期大鼠的作用研究 1、材料與方法1. 1試驗(yàn)藥物葒葉心通軟膠囊，按照實(shí)施例方法制得；大豆異黃酮，天津尖峰天 然產(chǎn)物公司生產(chǎn)，批號(hào)20040410。1.2試驗(yàn)動(dòng)物SD大鼠11-15月大，雌性，體重280_350g，經(jīng)陰道細(xì)胞涂片檢查呈 現(xiàn)不規(guī)則的動(dòng)情周期，確定為更年期鼠。貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。1. 3分組與給藥設(shè)更年期模型組、葒葉心通軟膠囊組、大豆異黃酮組，每組10只， 另選4 6月齡，體重150 220g雌性SD大鼠10只作為青年對(duì)照組。葒葉心通軟膠囊 組予以4g/kg · d，大豆異黃酮組予以500mg/kg · d，更年期模型組與青年鼠對(duì)照組均予以 019%生理鹽水2ml，連續(xù)6周。1. 4觀察項(xiàng)目與方法各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取腹主動(dòng)脈血樣后處死，摘除卵巢、腎上腺進(jìn) 行病理檢查。1. 4. 1血清學(xué)測(cè)定雌激素(E2)水平測(cè)定采用免疫化學(xué)發(fā)光法。脂質(zhì)過(guò)氧化物 (LPO)水平測(cè)定采用TBA比色法，結(jié)果以脂質(zhì)過(guò)氧化物的穩(wěn)定終產(chǎn)物丙二醛(MDA)濃度 (nmol/ml)表示。超氧化物歧化酶(SOD)活性測(cè)定采用化學(xué)發(fā)光法。谷胱甘肽過(guò)氧化物酶 (GSH-Px)活性測(cè)定采用DTNB直接顯色法。1. 4. 2卵巢組織學(xué)切片的光鏡觀察將摘除下來(lái)的各組大鼠雙側(cè)卵巢用福爾馬林 固定、石蠟包埋，切片，片厚6 μ m，HE染色，低倍鏡下觀察卵巢橫切面中原始卵泡、生長(zhǎng)卵泡 (包括初級(jí)卵泡和次級(jí)卵泡)、退化卵泡及黃體數(shù)目。1. 4. 3腎上腺組織切片的光鏡觀察將摘除下來(lái)的各組大鼠腎上腺用福爾馬林固 定，石蠟包埋，切片，片厚6 μ m，HE染色，低倍鏡下觀察腎上腺組織變化(包括有無(wú)結(jié)構(gòu)紊 舌L、瘀血程度及類脂滴含量)，高倍鏡下測(cè)定腎上腺皮質(zhì)厚度。瘀血程度判斷標(biāo)準(zhǔn)血竇中有少量紅細(xì)胞為“ + ”;血竇中充滿紅細(xì)胞但血竇未擴(kuò)張 為“++” ；血竇中充滿紅細(xì)胞，同時(shí)伴血竇擴(kuò)張為“+++”。束狀帶類脂滴含量判斷標(biāo)準(zhǔn)“ + ”，表示高倍鏡下觀察200個(gè)束狀帶細(xì)胞并計(jì)數(shù)其 胞質(zhì)內(nèi)含4個(gè)以下類脂滴的細(xì)胞占200個(gè)細(xì)胞中70%以上者；“++”表示含529個(gè)類脂滴的 細(xì)胞占200個(gè)細(xì)胞中的70%以上者；“+++”表示含10個(gè)以上類脂滴的細(xì)胞占200個(gè)細(xì)胞中 的70%以上者。球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶厚度系數(shù)高倍鏡球狀帶、束狀帶、網(wǎng)狀帶各帶厚度占腎上 腺皮質(zhì)全厚度的百分比。1. 5數(shù)據(jù)處理所有數(shù)據(jù)采用SPSS10. 0軟件處理，結(jié)果以χ士s表示，兩組間差異 顯著性分析用t檢驗(yàn)。2、結(jié)果2. 1各組大鼠E2測(cè)定從表1可看出，更年鼠模型組與青年鼠對(duì)照組比較，E2水平 明顯降低(P < 0. 01)。各用藥組E2水平均有所提高(P < 0. 05)。表1雌激素(E2)水平測(cè)定(χ士 s) 注*Ρ < 0. 05vs更年鼠模型組；Δ P < 0. 05vs青年鼠對(duì)照組2. 2各組大鼠SOD、GSH-Px及MDA測(cè)定從表2中可知，更年期組大鼠MDA值較青年 對(duì)照組明顯增高(P < 0. 05)，SOD值顯著降低(P <0.01)、GSH-Px值明顯降低(P < 0. 05)； 而用藥組均具有較好提高SOD、GSH-Px活性，降低MDA濃度作用(P < 0. 05或P < 0. 01)。表2S0D、GSH-Px 及 MDA 測(cè)定(χ士 s) 注*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0. Olvs 更年鼠模型組；Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. Olvs 青年 鼠對(duì)照組2. 3卵巢形態(tài)的改變更年鼠模型組原始卵泡少，退化卵泡多，發(fā)育正常的卵泡 少，黃體數(shù)目少；葒葉心通軟膠囊組發(fā)育正常的卵泡較多，生長(zhǎng)卵泡增多，退化卵泡少，黃體 數(shù)目較多；大豆異黃酮組初級(jí)、次級(jí)生長(zhǎng)卵泡增多，成熟卵泡少，黃體數(shù)目少；青年鼠組原 始卵泡多，初、次級(jí)卵泡增多，黃體數(shù)目最多。2. 4腎上腺皮質(zhì)形態(tài)及功能的改變表3、4顯示更年期鼠腎上腺皮質(zhì)球狀帶、網(wǎng)狀 帶較青年鼠增厚，束狀帶變薄且細(xì)胞索失去相互平行排列的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)而交叉成網(wǎng)，網(wǎng)狀帶 內(nèi)近束狀帶區(qū)瘀血明顯，束狀帶細(xì)胞胞質(zhì)中類脂滴含量明顯減少。葒葉心通軟膠囊組與更 年期模型組比較，球狀帶、網(wǎng)狀帶變(P <0.05)，束狀帶增厚(P <0.01)，束狀帶細(xì)胞索形 態(tài)基本正常，類脂滴含量接近青年鼠組，網(wǎng)狀帶未見(jiàn)明顯瘀血；大豆異黃酮組能增加腎上腺 皮質(zhì)束狀帶厚度，但對(duì)于結(jié)構(gòu)紊亂、瘀血程度的改善效果不及葒葉心通軟膠囊組。表3各帶厚度占腎上腺皮質(zhì)全厚度的百分比(χ士S) 注*Ρ< 0. 05，**Ρ < 0. Olvs 更年鼠模型組；Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. Olvs 青年 鼠對(duì)照組表4腎上腺組織變化情況 3、結(jié)論由以上試驗(yàn)可知，更年組大鼠較青年組腎上腺皮質(zhì)束狀帶變薄，球、網(wǎng)狀帶增 厚，皮質(zhì)結(jié)構(gòu)紊亂，類脂滴明顯減少；同時(shí)，更年鼠組MDA濃度較青年鼠組顯著上升，SOD、 GSH-Px活性顯著降低，說(shuō)明更年期組因內(nèi)分泌改變，有關(guān)器官逐漸衰老，并進(jìn)而出現(xiàn)脂質(zhì)過(guò) 氧化作用增加，自由基清除酶類活性下降等變化。葒葉心通軟膠囊制劑能夠改善更年鼠卵 巢、腎上腺組織功能，提高其體內(nèi)雌激素水平，并對(duì)自由基損傷有一定保護(hù)作用，說(shuō)明葒葉 心通軟膠囊制劑可在更年期綜合癥的防治中發(fā)揮作用。( 二 )葒葉心通制劑對(duì)更年期抑郁癥大鼠神經(jīng)遞質(zhì)的影響1、材料與方法1. 1 材料1. 1. 1動(dòng)物與分組SD雌性大鼠，體重220_280g，40只，貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心 提供。隨機(jī)分為正常組I ；更年期抑郁癥模型組II ；西藥治療組III ；葒葉心通軟膠囊組IV。1. 1. 2試驗(yàn)試劑及儀器葒葉心通軟膠囊，按本發(fā)明所述方法生產(chǎn)；百憂解20mg/ 片，美國(guó)禮來(lái)公司產(chǎn)品；雌二醇5mg/支，上海通用藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。GnRH、5-HT兔抗鼠多 克隆抗體，SABC免疫組化試劑盒，DAB顯色液；E2、LH、FSH試劑盒。JB-42型電刺激儀(寧 波科芝儀器研究所)；免疫熒光分析儀(德國(guó)拜耳公司)。1. 2試驗(yàn)方法1. 2. 1造模除I組外，其余各組行卵巢摘除術(shù)，然后每籠1只飼養(yǎng)，接受21d各種不同的應(yīng)激，包括電擊足底、冰水游泳、熱應(yīng)激、搖晃、夾尾、禁水24h、禁食48h和晝夜顛倒 等刺激，平均每種刺激2次，按上述刺激順序刺激2輪。經(jīng)上述處理后的大鼠以陰道上皮角 化試驗(yàn)驗(yàn)證模型，動(dòng)情間期見(jiàn)大量多核白細(xì)胞，少量上皮細(xì)胞。動(dòng)情前期見(jiàn)大量上皮細(xì) 胞，胞漿呈粒狀，少量角化(無(wú)核)上皮細(xì)胞，無(wú)白細(xì)胞。動(dòng)情期見(jiàn)大量角化上皮細(xì)胞，形 狀大而不規(guī)則，尚有少量上皮細(xì)胞。動(dòng)情后期見(jiàn)大量白細(xì)胞，尚有少量融合的角化上皮細(xì) 胞。連續(xù)5天陰道監(jiān)測(cè)未見(jiàn)動(dòng)情周期證明去勢(shì)成功。
1. 2. 2給藥在第一輪刺激結(jié)束后開(kāi)始給藥，IV組給予葒葉心通軟膠囊4g/kg · d， 灌胃；III組給予雌二醇(2mg/kg，肌肉注射，隔日1次)與百憂解混懸液(4mg/kg，灌胃，每 日1次)。連續(xù)21d。1. 3觀察指標(biāo)1.3. 1行為學(xué)測(cè)定(Open-Field法)采用敞箱為立柱體，底面由面積相等的25 塊組成。以動(dòng)物穿越地面塊數(shù)為水平活動(dòng)得分(crossing)，以直立次數(shù)為垂直活動(dòng)得分 (rearing)，在實(shí)驗(yàn)的第1，7，14，21d分別進(jìn)行測(cè)定。每只動(dòng)物進(jìn)行1次，每次時(shí)間為3min。1. 3. 2糖水消耗實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)時(shí)所有動(dòng)物均單籠飼養(yǎng)，每只動(dòng)物給予蔗糖溶液 120ml，同時(shí)禁食24h，計(jì)算動(dòng)物飲用1 %蔗糖溶液的量。1.3. 3血清E2、LH、FSH測(cè)定大鼠經(jīng)腹主動(dòng)脈采血，靜置4h后，離心分離血 清，-70°C保存。采用免疫熒光化學(xué)法測(cè)定各激素的含量。1. 3. 4下丘腦5-HT、GnRH測(cè)定大鼠腹腔麻醉后，用生理鹽水經(jīng)左心室插管至主 動(dòng)脈逆行灌流，直到未見(jiàn)紅色液體流出，再灌注4%多聚甲醛直至大鼠四肢僵硬為止。取 出腦組織放入4%多聚甲醛中固定4-6h，再將腦組織浸入30%蔗糖溶液中，待到組織下沉 時(shí)，以20 μ m厚度作連續(xù)冰凍切片，每只腦組織取10張切片。切片純丙酮室溫固定20min， 0. 5% H2O2的甲醇室溫處理30min，滴加山羊血清(效價(jià)1 10)封閉20min，滴加一抗(效 價(jià)1 200)，置于濕盒37 °C lh,滴加二抗(效價(jià)1 100)37°C 20min,滴加SABC (效價(jià) 1 100) 37°C20min，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片。切片經(jīng) SX-100計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)采樣，每張切片在100倍下隨機(jī)抽取2個(gè)不重疊視野計(jì)算陽(yáng)性 細(xì)胞數(shù)目，每組共取10個(gè)視野。1.4數(shù)據(jù)處理所有測(cè)定結(jié)果用(χ 士 s)表示，組間比較采用單因素方差分析。2、結(jié)果2. 1各組大鼠Open-Field評(píng)分以及糖水消耗量的比較與I組相比，水平積分、垂直積分和糖水消耗量均顯著降低；與II組比較，IV、III 組水平積分、垂直積分和糖水消耗量顯著增高。見(jiàn)表5。表5各組大鼠Open-Field評(píng)分以及糖水消耗量的比較 注與I 組比較 *Ρ < 0. 05，**Ρ < 0. 01 ；與 II 組比較Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. 012. 2各組大鼠血清E2、LH、FSH含量的比較與I組相比，II組E2顯著降低、FSH、LH顯著升高；與II組相比，IV、III組FSH、 LH均顯著降低并接近正常，IV組E2顯著升高。見(jiàn)表6。表6各組大鼠血清E2、LH、FSH含量的比較(pg/ μ 1) 注與I 組比較 *P < 0. 05，**P < 0. 01 ；與 II 組比較Δ P < 0. 05，ΔΔ P < 0. 012. 3各組大鼠下丘腦5-HT、GnRH含量的比較與I組相比，II組5-ΗΤ顯著降低、GnRH顯著升高 ’與II組相比，IV、III組5-ΗΤ、 GnRH均有不同程度的降低。見(jiàn)表7。表7各組大鼠下丘腦5-HT、GnRH含量的比較 3、結(jié)論由以上試驗(yàn)可以看出，本發(fā)明葒葉心通軟膠囊制劑可以明顯改善更年期抑郁癥模 型大鼠的行為學(xué)評(píng)分，增加糖水消耗量，在改善生殖激素方面，可以下調(diào)LH、FSH水平。在神 經(jīng)遞質(zhì)方面，本制劑能夠明顯上調(diào)模型鼠5-HT的水平，降低GnRH含量。故葒葉心通軟膠囊制劑能夠有效調(diào)整更年期抑郁癥模型大鼠下丘腦-垂體-卵巢軸的功能，從而協(xié)調(diào)神經(jīng)內(nèi) 分泌網(wǎng)絡(luò)。(三)葒葉心通軟膠囊制劑對(duì)摘卵巢大鼠骨組織形態(tài)計(jì)量及子宮病變的影響1、材料與方法1. 1 材料 1. 1. 1藥物及飼料葒葉心通軟膠囊，按上述方法生產(chǎn)；龍牡壯骨顆粒，5g/袋，武 漢健民藥業(yè)生產(chǎn)；低鈣飼料(含鈣量< 0. 3% )，北京科奧協(xié)力飼料有限公司產(chǎn)品。1. 1. 2試劑堿性磷酸酶(ALP)試劑盒、血清降鈣素(BGP)、甲狀旁腺素(PTH)、雌 二醇(E2)。1. 1.3動(dòng)物分組和給藥普通Wistar大鼠，雌性，6月齡，體重300_330g，貴陽(yáng)醫(yī) 學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。將動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組、骨質(zhì)疏松模型組、葒葉心通軟膠囊Sg/ kg組、葒葉心通軟膠囊4g/kg組、葒葉心通軟膠囊2g/kg組和陽(yáng)性對(duì)照龍牡壯骨顆粒組，每 組10只。除假手術(shù)組外均做卵巢摘除術(shù)。手術(shù)3月后，各用藥組分別按上述劑量給藥，1 次/日，連續(xù)給藥3個(gè)月，假手術(shù)組和骨質(zhì)疏松模型組給予等量水。喂食低鈣飼料(含鈣量 < 0.3%)，自由飲水限制進(jìn)食，每周稱一次體重，并按體重變化調(diào)整給藥量。各組大鼠于處 死前16d和3d分別腹腔注射鹽酸四環(huán)素，30mg/kg體重，對(duì)骨進(jìn)行熒光標(biāo)記。1. 2測(cè)定指標(biāo)血清堿性磷酸梅(ALP)活性；血清降鈣素(BGP)；甲狀旁腺素 (PTH)；雌二醇(E2)；子宮指數(shù)；子宮病理學(xué)檢查。1. 3測(cè)定方法1. 3. 1骨小梁組織形態(tài)計(jì)量取大鼠左側(cè)脛骨近端1/3，去除軟組織，包埋塊，修塊后縱向不脫鈣骨切5μπι片， 用二甲苯溶解去掉樹(shù)脂，梯度乙醇至水，甲苯胺藍(lán)染色，采用Leica Qwin圖象分析系統(tǒng)進(jìn)行 骨組織形態(tài)計(jì)量。骨小梁體積百分比(TBV% )骨小梁體積占被測(cè)骨髓腔總體積的百分比，是骨量 水平的主要標(biāo)志；骨小梁吸收表面百分比(TRS% ):不規(guī)則、凹凸不平骨小梁表面占骨小梁表面的 百分比；骨小梁形成表面百分比(TFS% )有成骨細(xì)胞被覆的類骨質(zhì)表面占骨小梁表面的 百分比；活性生產(chǎn)表面百分比(AFS% )有熒光標(biāo)記帶的骨小梁表面占骨小梁表面的百分 比；1.3. 2皮質(zhì)內(nèi)表面形態(tài)計(jì)量類骨質(zhì)平均寬度(OSW)皮質(zhì)內(nèi)表面類骨質(zhì)的平均寬度；骨皮質(zhì)礦化率(mAR):皮質(zhì)內(nèi)表面雙標(biāo)記帶的平均距離除以兩次標(biāo)記相隔的天數(shù)。1. 3. 3子宮指數(shù)動(dòng)物處死后，剪開(kāi)腹壁，暴露腹腔，觀察動(dòng)物卵巢是否切除完全， 并完整分離子宮，去除子宮周?chē)竞徒Y(jié)締組織，用生理鹽水洗滌后，濾紙吸干子宮表面水 分，電子天平稱重子宮指數(shù)=子宮濕重/體重；1. 3. 4子宮病理學(xué)檢查將取出的子宮組織用生理鹽水漂洗后，濾紙吸干表面水分，按組別置于中性甲醛溶液固定。石蠟包埋，連續(xù)切片，子宮取材時(shí)均選取兩側(cè)子宮中部 宮體組織，切片5 μ m厚，HE染色，10*10光鏡下觀察大鼠子宮內(nèi)膜變化情況。2、結(jié)果2. 1葒葉心通軟膠囊可明顯增加骨小梁體積百分比(TBV% )，并顯著降低骨小梁 吸收表面百分比(TRS%)，見(jiàn)表8 ；明顯升高摘卵巢模型大鼠的血清E2和BGP水平，降低ALP 和PTH水平，見(jiàn)表9。表8各組大鼠脛骨TBV %和TRS %的變化 注與假手術(shù)組相比，#Ρ < 0.05，##Ρ < 0.01 ；與模型組相比，*Ρ < 0.05，**Ρ < 0. 01表9葒葉心通軟膠囊制劑對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠血清Ε2、BGP、PTH和ALP的影響 (X 士 SD) 注η = 10，與假手術(shù)組相比，#P < 0. 05,##P < 0.01 ；與模型組相比，*P <0.05， < 0. 01
2. 2各組大鼠體重、子宮重、子宮指數(shù)變化，見(jiàn)表10。表10各組大鼠體重、子宮重、子宮指數(shù)變化 注η = 10，與假手術(shù)組相比，#Ρ < 0. 05,##Ρ < 0.01 ；與模型組相比，*Ρ <0.05， < 0. 012. 3大鼠子宮病理學(xué)檢查(10*10)正常體壁由內(nèi)向外分為內(nèi)膜層、肌層和漿膜層。假手術(shù)組大鼠子宮內(nèi)膜上皮無(wú)萎 縮或增生，內(nèi)膜固有層分布有單管腺狀體，腺上皮為單層柱狀，細(xì)胞核呈圓形，位于細(xì)胞基 底部固有層間質(zhì)內(nèi)細(xì)胞數(shù)量增多，間質(zhì)疏松；模型組大鼠子宮內(nèi)膜及肌層明顯萎縮，部分內(nèi)膜上皮已萎縮至不明顯；內(nèi)膜固有 層內(nèi)腺體數(shù)明顯減少，腺體腔明顯減小，近于閉合，腺上皮亦明顯萎縮，細(xì)胞間質(zhì)體積減小， 間質(zhì)相對(duì)緊密；陽(yáng)性對(duì)照組子宮內(nèi)膜上皮、腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞均有萎縮病變，但明顯輕于模型組， 在固有膜仍可見(jiàn)有單管狀腺體分布；本發(fā)明葒葉心通軟膠囊高、中劑量組子宮內(nèi)膜上皮、腺上皮、間質(zhì)細(xì)胞萎縮病變明 顯減輕，固有膜可見(jiàn)有單管狀腺體分布，間質(zhì)亦較疏松；其中低劑量組效果略低，提示使用 中劑量療效較好，成本較低。2. 4大鼠腺垂體病理HE染色觀察(10*10)假手術(shù)組腺垂體由大量腺細(xì)胞組成，細(xì)胞呈團(tuán)狀分布，細(xì)胞團(tuán)之間有竇狀毛細(xì)血 管；模型組大鼠腺垂體所有腺細(xì)胞胞體明顯萎縮，毛細(xì)血管竇分布亦減少；陽(yáng)性對(duì)照組、本發(fā)明制劑組腺垂體無(wú)明顯萎縮現(xiàn)象，提示上述治療可有效延緩去 卵巢大鼠腺垂體的衰老。3、結(jié)論以上實(shí)驗(yàn)可知，葒葉心通軟膠囊制劑可明顯改善摘卵巢大鼠骨質(zhì)疏松模型的骨代 謝狀態(tài)，提高體內(nèi)雌二醇水平，有效拮抗大鼠的子宮萎縮病變，延緩去卵巢大鼠子宮的衰老和延緩去卵巢大鼠腺垂體的衰老，其治療效果與對(duì)照組相當(dāng)。可見(jiàn)，本發(fā)明能保護(hù)女性子 宮、防止骨質(zhì)疏松，有效延緩女性更年期衰老。
具體實(shí)施例方式需要說(shuō)明的是，本制備實(shí)施例僅僅是介紹一種制備提取物的方法，是為了闡釋本 發(fā)明，而不是限制本發(fā)明。實(shí)施例1 葒草5份、山楂葉4份、三七3份和川芎3份(份為重量份，以下實(shí)施例均為重量 份) 葒草、山楂葉、三七加10倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮 至相對(duì)密度1. 10，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙 醇并濃縮至相對(duì)密度1.07，加適量水稀釋，上徑高比1 10的大孔吸附樹(shù)脂柱，吸附流速 2BV·!!-1，棄去穿透液，用IBV水洗，流速2BV·!!-1，棄去水洗液，繼用3BV70%乙醇洗脫，流速 2BV · 1Γ1，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮成稠膏，殘留物進(jìn)行微波真空干燥，粉碎成細(xì)粉，得葒 草、山楂葉、三七提取混合物；川芎藥材粉碎成粉末，過(guò)3號(hào)篩，用超臨界二氧化碳萃取，以壓力為30MP、溫度為 50°C、流量為20L/h的條件萃取4h，解析壓力10MP，溫度40°C，收集，得川芎萃取物。實(shí)施例2:將實(shí)施例1得到的川芎萃取物加入葒草、山楂葉、三七提取混合物中，再加入適量 含2%蜂蠟的大豆油，混合均勻，備用；以明膠甘油蒸餾水防腐劑(泥泊金甲酯)= 1 0.4 1 0.002制備囊材，壓制即得軟膠囊劑。實(shí)施例3:葒草6份、山楂葉5份、三七4份和川芎3份葒草、山楂葉加10倍量水煎煮3次，每次1小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至相對(duì) 密度1. 10，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇并濃 縮至相對(duì)密度1.07，加適量水稀釋，上徑高比1 10的大孔吸附樹(shù)脂柱，吸附流速2Βν· Λ 棄去穿透液，用IBV水洗，流速2BV化―1，棄去水洗液，繼用3BV70%乙醇洗脫，流速2BV化一1， 收集洗脫液，回收乙醇，濃縮成稠膏，殘留物進(jìn)行噴霧干燥，粉碎成細(xì)粉，得葒草、山楂葉提 取物；三七加10倍量水煎煮3次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并濾液，減壓濃縮至50°C相對(duì)密 度1. 10，加乙醇使含醇量達(dá)65%，攪拌均勻，靜置12小時(shí)，抽濾，濾液減壓回收乙醇，并濃縮 至相對(duì)密度1.07，加適量水稀釋，上徑高比1 10的大孔吸附樹(shù)脂柱，吸附流速2BV ^tT1, 棄去穿透液，用IBV水洗，流速2BV化―1，棄去水洗液，繼用3BV70%乙醇洗脫，流速2BV化一1， 收集洗脫液，回收乙醇，濃縮成稠膏，殘留物進(jìn)行噴霧干燥，粉碎成細(xì)粉，得三七提取物；川芎藥材粉碎成粉末，過(guò)3號(hào)篩，用超臨界二氧化碳萃取，以壓力為30MP、溫度為 50°C、流量為20L/h的條件萃取4h，解析壓力10MP，溫度40°C，收集，得川芎萃取物。實(shí)施例4:將實(shí)施例3得到的川芎萃取物加入葒草、山楂葉提取物和三七提取物中，混合均 勻，按藥粉基質(zhì)(聚乙二醇-6000和聚乙二醇-400) = 1:2的比例投料，先將基質(zhì)熔融后，加入藥粉混勻，在75°C下保溫，以40滴/分鐘的速度滴入冷凝液(二甲基硅油)當(dāng)中，冷凝成型，收集滴丸，用濾紙吸除冷凝液，即得滴丸劑。實(shí)施例5 將實(shí)施例1得到的葒草、山楂葉、三七提取混合物和川芎萃取物混合，用 制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成滴丸劑。實(shí)施例6 將實(shí)施例3得到的川芎萃取物加入葒草、山楂葉提取物和三七提取物 中，混合均勻，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成軟膠囊劑。實(shí)施例7 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成口服液。實(shí)施例8 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成丸劑。實(shí)施例9 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成顆粒劑。實(shí)施例10 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成膠囊劑。實(shí)施例11 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成片劑。實(shí)施例12 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成注射液。實(shí)施例13 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成注射用凍干粉針劑。實(shí)施例14 將實(shí)施例1或?qū)嵤├?得到的葒草提取物、山楂葉提取物、三七提取物 和川芎萃取物混合，用制劑學(xué)常規(guī)技術(shù)制備成大輸液。
權(quán)利要求
含有葒草的組合物在制備預(yù)防和治療更年期綜合征的藥物中的應(yīng)用。
2.含有葒草的組合物在制備預(yù)防和治療更年期抑郁癥的藥物中的應(yīng)用。
3.含有葒草的組合物在制備預(yù)防和治療骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。
4.含有葒草的組合物在制備延緩衰老的藥物中的應(yīng)用。
5.按照權(quán)利要求1-4任一所述含有葒草的組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于 所述含有葒草的組合物是從葒草、三七、山楂葉和川芎中提取出的具有藥用價(jià)值的提取物 制成的制劑。
6.按照權(quán)利要求5所述含有葒草的組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于生藥的 重量配比葒草1 10份、山楂葉1 10份、三七1 10份和川芎1 10份。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的應(yīng)用，其特征在于，生藥的重量配比為葒草5份、山楂葉4份、三七3份和川芎3份。
8.按照權(quán)利要求1-4任一所述含有葒草的組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于 所述藥物為軟膠囊劑、滴丸、丸劑、顆粒劑、片劑、膠囊劑、口服液、注射液、注射用凍干粉針 齊U、大輸液。
9.按照權(quán)利要求8所述含有葒草的組合物在制備藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述藥 物為軟膠囊劑。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種含有葒草的組合物在制備防治更年期疾病和延緩衰老的藥物方面的應(yīng)用，所述組合物是用葒草、三七、山楂葉和川芎的提取物制成，本發(fā)明提供含有葒草的組合物新的醫(yī)藥用途，為患者提供了一種新的用藥選擇。
文檔編號(hào)A61P15/12GK101843680SQ20091010248
公開(kāi)日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2009年3月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年3月25日
發(fā)明者竇啟玲 申請(qǐng)人:貴州益佰制藥股份有限公司