專利名稱：治療毒性叮咬及叮刺的方法
技術領域：
本發明涉及應用5-HT2拮抗劑來治療或緩解毒性叮咬或叮刺的癥狀。
毒性叮咬及叮刺根據毒素的來源及個體或動物的敏感性而能引起多種反應。在某些情況下，叮咬或叮刺中的毒素能引起過敏反應，即一種能威脅生命的速發型超敏反應。在其它情況下，某些毒素能引起皮膚的“局部”反應。皮膚的局反應被分為1)有限大小及持續時間的“非過敏性”反應或2)“過敏性”或“擴大的”局部反應，一般在大小上增大而在持續時間上延長。對膜翅目動物的毒素(蜜蜂、黃蜂、大黃蜂及鮮黃色胡蜂)而言，“非過敏性局部反應為對毒素成分的毒性反應，而擴大的局部反應似乎是由對毒素蛋白質的過敏反應而引起的”。[見D.N.Wright，對叮刺昆蟲(膜翅目)的局部反應，Allergy Proc.11(1):23-28(Jan-Feb.1990)]。
一旦接受了毒性的叮咬或叮刺，即可出現由毒素引起的多種癥狀，包括瘙癢、紅斑、蕁麻疹、血管水腫、軟組織腫脹、感染部位的炎癥及感染部位疼痛。
當被皮下注射時，許多叮咬及叮刺中的毒素引起從鄰近血管中外滲。[見V.Cattell,Focal Mesangial Proliferative Glomerulonephritis InThe Rat Caused By Habu Snake Venom:The Role of Platelets,British J.ofExp.Pathol.,60(2):201-208(April 1979)]；另外，毒素可誘發血小板聚集及肥大細胞脫粒，炎癥的兩個成分一起外滲。5-羥色胺的釋放也與毒素的注射有關。[見如Y.Ozaki等，Mastopran,A Wasp Venom,Activates Platelets Via Pertussis Toxin-Sensitive GTP-Binding Proteins,Biochem.Biophys.Res.Commun.,170(2):779-85(July 31,1990)及C.Wang等，Experimental Study of Chinese Agkistrodon Actus Venom InAetivation of Rabbit Platelets In Viuo,Hua Hsi I Ko Ta Huseh Huseh Pao,25(1):38-40(March 1994)。
從四十多年前發現血清素(5-羥色胺，5-HT)以來，許多不同研究的累積結果表明血清素在哺乳動物體的機能上，即在中樞神經系統及在外周神經系統上起著重要作用。中樞神經系統的形態學研究表明源于腦干的血清素激活的神經元形成一個凸出到腦及脊髓的大部分區域中的充分擴散的系統[R.A.O’Brien,Serotonin in MentalAbnormalities,1∶41(1978)；H.W.M.Steinbusch,HANDBOOK OFCHEMICAL NEUROANATOMY,Volume 3,PartⅡ,68(1984)；N.E.Anden等，Acta Physiologica Scandinavia,67:313(1966)]。這些研究通過生化結果予以補充，其結果表明5-HT的大部分集中在腦及脊髓中[H.W.M.Steinbusch，上文]。
由于具有這樣的擴散系統，所以5-HT與各種行為表現、生理性反應以及源于中樞神經系統的疾病有關是不足為奇的。它們包括這樣的擴散區域如睡眠、吃、可察覺的疼痛、控制體溫、控制血壓、抑郁、精神分裂癥以及其它身體狀態[R.W.Fuller,BIOLOGY OFSEROTONERGIC TRANSMISSION,221(1982)；D.J.Boullin,SEROTONIN IN MENTAL ABNORMALITIES 1:316(1978)；J.Barchas等，Serotonin and Behavior(1973)]。
血清素在外周系統中也起著重要作用。例如，近90％的體內的血清素在胃腸道系統中被合成，已發現血清素介導該系統中的各種收縮、分泌及電生理作用。血清素可被血小板吸收，以及在血小板聚集過程中，它可被釋放，以使心血管系統提供另一個能釋放及響應血清素的外周網絡的實例。由于血清素在體內的廣泛的分布，即可理解存在對影向血清素系統藥物極大興趣的原因。特別是，受體特異性激動劑及拮抗劑對治療很大范圍內的紊亂是重要的，包括焦慮、抑郁、高血壓、偏頭痛、強迫性紊亂、精神分裂癥、孤獨癥、神經變性性紊亂、如Alzheimer氏病、帕金森神經機能障礙及Huntington氏舞蹈病及癌癥化療誘發的嘔吐[M.D.Gershon等，THE PERIPHERAL ACTIONSOF 5-HYDROXYTRYPTAMINE,246(1989)；P.R.Saxena等，Journalof Cardiovascular Pharmacology,15:Supplement 7(1990)]。
血清素通過與細胞表面上專門化的受體結合而影響細胞的生理。許多類型的受體為許多神經遞質及激素而存在，包括血清素。多種結構上有區別的血清素受體的存在提供了制造亞型選擇藥物制劑的可能性。這些化合物的發現可產生新的、選擇性增加的及較少副作用的治療劑，因為個別受體亞型的激活可起影響中樞和/或外周血清素系統的不同部分的特殊作用。
這種特性的實例可通過應用作為例子的血管系統來說明。在某些血管中，刺激在內皮細胞上某些5-HT受體引起血管舒張而刺激在平滑肌細胞上某些5-HT受體引起血管收縮。
當前，大多數種類的血清素受體(5-HT1,5-HT2、5-HT3、5-HT4、5-HT5、5-HT6及5-HT7)含有約14-18個單獨的、以其藥理或結構差別正式分類的受體。[對于各種5-HT受體類型的藥理作用及臨床影響的非常好的綜述，見Glennon等，Neuroscience and BehavioralReviews,14:35(1990)]。
一類血清素受體為5-HT2。在這一類中已知存在幾種亞型。這些亞型包括5-HT2A、5-HT2B及5-HT2C。亞型5-HT2A位于許多組織中，包括(但不限于此)血管平滑肌、血小板、肺、中樞神經系統(CNS)及胃腸道中。認為這些受體與某些效應有關例如，血管收縮、血小板聚集及支氣管收縮。5-HT2B受體局限于鼠肺、胃底、子宮、膀胱及結腸中。5-HT2B受體位于人體上值得注意的部位包括(但不限于此)腦部及血管。亞型5-HT2C位于CNS中，在脈絡叢中具有高密度。
由于在受影響人群中對當今毒性叮咬及叮刺治療的普遍不滿，所以存在著對一種更有效及安全治療的需求。本發明提供該治療。
本發明提供治療或緩解哺乳動物毒性叮咬或叮刺癥狀的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動物有效劑量的一種或多種具有5-HT2拮抗劑活性的化合物。
除非另有指明，用在本制備及實施例中的術語及縮寫都具有其正常意義。例如“℃”指攝氏度；“N”指正常或正常狀態；“mmol”指毫摩爾；“g”指克；“ml”指毫升；“L”指升；“M”指摩爾或摩爾濃度；“MS”指質譜；“IR”指紅外光譜；而“NMR”指核磁共振光譜。
術語“叮刺”指由導入個體的昆蟲或其它動物的毒素(生物毒素)所引起的損傷，以及由器官對毒素的反應而引起的機械性損傷。
術語“毒素”指一種毒物，更準確地說，一種一般由昆蟲或其它動物分泌的毒性物質。在此所用的術語“毒素”不包括被認為是神經毒素的物質。所知能分泌毒素的昆蟲及其它動物的實例包括(但不限于此)某些類型的蛇、螞蟻、水母、水螅、雙鰭鯧、刺鰩、海葵、海膽、錐螺、蜘蛛、蝎子、蚊子、蜜蜂、黃蜂、大黃蜂、蜂、蚋蚊及蠅。
“炎癥”是組織對各種刺激或損害的非特異性應答，其導致在炎癥部位釋放引起疼痛的物質。現已了解肥大細胞、中性白細胞及T-細胞與發炎皮膚癥狀的病理生理以及其它生理性紊亂有關。
本發明的方法應用5-HT2受體。有三個5-HT受體的5-羥色胺2(5-HT2)家族的成員5-HT2A、5-HT2B及5-HT2C受體。這些受體為G-蛋白質連接的受體，其實際至少在這些受體的克隆模型中與磷酸肌醇的代謝正性結合。這些受體享有序列同源性，且具有相同模式的內含子和外顯子。該類受體對其配體特異性上的相似進一步表明該家族受體的共同團體性。本發明的方法優選使用5-HT2B受體。
本發明提供治療或改善毒性叮咬或叮刺癥狀的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動物有效劑量的一種或多種5-HT2受體拮抗劑。如所指明的，在本發明的方法中應用一種或多種5-HT2拮抗劑。在一個實施方案中，只用一種5-HT2拮抗劑。在某些情況下，該5-HT2拮抗劑將僅對一種亞型的5-HT2受體有親合力(如對5-HT2A、5-HT2B或5-HT2C的特異性)。在其它情況下，5-HT2拮抗劑將對多種5-HT2受體的亞型具有親合力(如對5-HT2A和5-HT2B；5-HT2A和5-HT2C；5-HT2B和5-HT2C或5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C的特異性)。在另一個實施方案中，可用多種5-HT2拮抗劑。這些5-HT2拮抗劑中的每一種對專門的5-HT2受體亞型、多種5-HT2受體亞型可有親合力，或者可以是一種對專門的受體亞型及多種受體亞型有親合力的5-HT2拮抗劑的混合物。本發明更優選的實施方案提供了治療或改善毒性叮咬或叮刺癥狀的方法，它包括給予需要此治療的哺乳動物有效劑量的一種或多種5-HT2B受體拮抗劑。
本領域的普通技術熟練人員將了解盡管用于本發明中的拮抗劑可以對一種或多種5-HT2受體亞型具有親合力，可出現一定量的與其它5-HT受體類型的交叉反應性。不排除化合物或組合物在本發明中的使用，僅因為它具有對一種或多種5-HT受體的親合力。
在最近的出版物中記敘了許多可用于本發明的不同的5-HT2受體拮抗劑。
例如，美國專利第5428036號(在此結合到本發明中作為參考)介紹了一組式Ⅱ的5-HT2拮抗劑及其藥學上可接受的鹽
其中X選自CO、CS或CH2，而若X為CO或CS，則R選自ⅰ)氫、C1-C24烷基、C1-C24鏈烯基、C3-C8環烷基、C3-C8環烯基或C4-C32環烷(烯)基烷(烯)基，以上基團任選由一個或多個羥基取代，或由一個或多個選自鹵素、三氟甲基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、C1-C3烷硫基、酰氧基或氰基的取代基任選取代的苯基；或ⅱ)YR1，其中Y為O或S，而R1選自以上ⅰ)項下作為R所定義的取代基；及ⅲ)NR2R3，其中R2和R3獨立選自以上ⅰ)項下作為R所定義的取代基，或R2和R3結合形成一個含有1-3個氮原子及0-3個氧或硫原子的4-8元雜環；或若X為CH2，則R選自ⅳ)如ⅱ)中定義的YR1基團；ⅴ)如ⅲ)中定義的NR2R3基團；或ⅵ)OC(O)R4基團，其中R4定義同R1。
另一組5-HT2拮抗劑包括在美國專利第5229382號(在此結合到本發明中作為參考)中介紹的化合物，其通式為式Ⅲ
還有另一組5-HT2拮抗劑是在美國專利第5457115中(在此結合到本發明中作為參考)中介紹的式Ⅳ拮抗劑及其藥學上可接受的酸加成鹽或前體藥物
其中Ar為下列基團之一苯基，由選自鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、三氟甲基及氰基的至少一個取代基取代的苯基以及選自2-噻吩基、3-噻吩基、2-呋喃基、3-呋喃基、2-噁唑基、2-咪唑基、2-吡啶基、3-吡啶基及4-吡啶基的雜芳基；每條虛線為一可任選雙鍵；X和X’為獨立選自氫、鹵素、低級烷基、低級烷氧基、羥基、低級烷硫基、低級烷磺酰基、低級烷氨基、低級二烷基氨基、氰基、三氟甲基及三氟甲硫基；或X和X’一起形成一個5-7元碳環；R1選自氫、低級烷基及由1個或2個羥基取代的烷基；條件是當X是氫或氟時，R1不能為氫；R是具有下式的取代基
其中n為2-6范圍內的整數；W為氧或硫；V1選自OR4、SF5、CHR6R7和NR8R9；其中R3-R9獨立選自氫、低級烷基、低級鏈烯基、環烷基、由一個或二個羥基取代的低級烷基及由一個或二個羥基取代的低級鏈烯基。
還有一組可用于本發明方法中的5-HT2拮抗劑包括在美國專利第5480885號(在此結合到本發明中作為參考)中介紹的式Ⅴ的拮抗劑、其外消旋體和酸加成鹽
其中R1、R2和R3獨立代表氫原子或直鏈或支鏈的C1-C6烷基；X代表氫或鹵原子；Z代表羰基或亞甲基及C9…C10代表單鍵或雙鍵。
可用于本發明方法中的另一組5-HT2拮抗劑包括在美國專利第4563461號(在此結合到本發明中作為參考)介紹的式Ⅵ化合物或其藥學上可接受的鹽
其中R為C1-3烷基或烯丙基，R1為C1-3羥烷基或C1-3二羥基烷基，而R2為H或甲基。
以上各組化合物僅是對可使用的5-HT2受體拮抗劑的說明。所列的這些組的化合物并不是全面的，本發明的方法可應用任何5-HT2受體拮抗劑而且不局限于任何具體類型的化合物。
更優選類別的拮抗劑為式Ⅶ的5-HT2受體拮抗劑、其藥學上可接受的鹽或溶劑化物
其中R1為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R6選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、CO2R5’、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5和OR5；R7和R8獨立選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、NO2、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、C7-C16芳基烷基、CO2R5’、(C1-C6烷基)m氨基、-SR5和OR5；n為1、2或3；n’為1、2或3；m為1或2；R5獨立為氫或C1-C4烷基；R5’為C1-C4烷基；…可任選為一個鍵。
式Ⅶ化合物的實例包括(但不限于此)螺-9,9-[2-(3,4-二氯)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲氧基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲氧基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二乙氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,5-二氯)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-二甲氨基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3-氟，4-氯)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-乙基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-溴-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚、螺-9,9-[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-氯-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚。
這些化合物的合成在公開未決的美國臨時專利申請系列號60/014119(代理人檔案號P-10656,1996年3月25日申請)中被介紹(在此結合到本發明中作為參考)。以下詳細介紹此類典型化合物的合成，包括6個特定實施例。
式Ⅶ化合物可用本領域所熟知的化學方法制備。這些實施例只用以說明，并不限制本發明的范圍。
以下的吲哚起始原料(1a、1b和1c)中，(1a)可購買，(1b)根據Bartoli的方法制備[Bartoli,G.等，Tetrahedron Lett.,1989,30,2129]或者(1c)由2-碘代-4,6-二甲基苯胺(5)合成。該過程通過下列圖式來說明
2-碘代-4,6-二甲基苯胺(5)合成按如下來完成在氬氣下，向5(24mmol)、CuI(0.05當量)及(PPh3)2PdCl2(0.05當量)的30ml干燥三乙胺的混懸液中加入三甲基硅烷基乙炔(1.1當量)，將產生的混合液攪拌3小時。然后真空下除去溶劑，殘留物經快速層析純化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)作洗脫劑得到定量收率的6”。將6(23mmol)和CuI(2當量)的50ml干燥二甲基甲酰胺的淤漿在通Ar氣下，于100℃加熱2.5小時。冷卻至室溫后，過濾反應混合物，固體用乙醚(20ml)沖洗二次。有機相用水洗(3×50ml)，用Na2SO4干燥，蒸發溶劑至干。粗品經快速層析純化，用己烷/乙酸乙酯(3∶1)作洗脫劑得1c(1.5g,45％)。
實施例1
將對應的色胺鹽酸鹽(3a)(1g)與對應的二甲氧基四氫萘酮(3b)(1g)的乙醇(10ml)中的混懸液回流128小時。然后將反應混合物冷卻至室溫，過濾。洗滌固體粗品并干燥。
熔點261℃。
理論值計算值C 69.25 69.24H6.82 6.97N7.02 6.98
實施例2
將對應的色胺鹽酸鹽(2a)(575mg)與對應的酮(2b)(464mg)的乙醇(10ml)中的混懸液回流128小時。然后將反應混合物冷卻至室溫，過濾。將固體粗品洗滌并干燥。
得到525mg理論值 計算值C74.43 74.36H 6.846.84N 8.278.25MS:301實施例3
將對應的色胺鹽酸鹽(2a)(500mg)與對應的酮(2b)(396mg)的乙醇(10ml)中的混懸液回流72小時。然后將反應混合液冷卻至約0℃，過濾。將固體粗品洗滌并干燥。
得到262mgMS:274。
實施例4
將對應的色胺鹽酸鹽(4a)(500mg)與對應的酮(4b)(396mg)的乙醇(10ml)中的混懸液回流72小時。然后將反應混合液冷卻至約0℃達約24小時，過濾。將粗品固體洗滌并干燥。
進行質譜分析，得MI為274。
實施例5
將對應的色胺鹽酸鹽(5a)(500mg)與對應的酮(5b)(397μl)的乙醇(10ml)中的混懸液回流72小時。然后將反應混合液冷卻至約0℃達約14小時，過濾。將固體粗品洗滌并干燥。
得到630mg理論值計算值C73.9573.32H 6.52 6.73N 8.62 8.59MS:288實施例6
將對應的色胺鹽酸鹽(4a)(1g)與對應的酮(4b)(800mg)的乙醇(10ml)另一優選類型的5-HT2受體拮抗劑是WO 95/24200(在此結合到本發明中作為參考)中介紹的式Ⅰ化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物
其中Q為氫或(CHR2)R4；R1為氫或C1-C3烷基；R2為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R4為C5-C8環烷基、取代的C5-C8環烷基、C5-C8環烯基、取代的C5-C8環烯基、雙環或取代的雙環；A選自
和
其中，R6和R7獨立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、CO2R5、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5或OR5；m為1或2；R5獨立為氫或C1-C4烷基；R5為C1-C4烷基；R8獨立選自R6基團、取代的C3-C8環烷基、C3-C8環烷基、C3-C8環烷基-(C1-C3)烷基、C5-C8環烯基、取代的C5-C8環烯基、C5-C8環烯基-(C1-C3)烷基、C7-C16芳基烷基；或R6和R7一起與基團A的碳原子形成一個5-8元碳環。
式Ⅰ化合物的實例包括(但不限于此)8-甲基-1[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；8-溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6,8-二溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-8-溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；8-甲氧基-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6,8-二氟-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]哚；7-甲基-8-溴-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-(1,1-二甲基乙基)-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-1-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；5-氟-6-甲基-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；7,8,9,10-四氫-10-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1H-苯并[g]吡啶并[3,4-b]吲哚；6-環己基-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；5,8-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6-(1-甲基乙基)-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6,8-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；5,7-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6,7-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6-乙基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；6-溴-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚；7,8-二甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1,2,3,4-四氫-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-9H-吡啶并[3,4b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3,4,5-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,3,4-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,5-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2,4,5-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-(1-甲基乙基)-1-[(2,3,4-三甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3,4-二甲氧基-5-硝基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3-碘代-4,5-二甲氧基-苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-1-[(3,4-二甲氧基-5-氨基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3-甲氧基-4-丙氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚；6-甲基-1-[(4-二甲氨基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二鹽酸鹽；6-甲基-1-[(4-二丁氨基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚二鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3-氟-4-甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(3,4-二甲基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-氯-3-甲氧基-4-羥基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；5-氟-6-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-(環己基甲基)-1,2,3,4-四氫-9H-比啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽；6-甲基-1-[(2-溴-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[2,4-b]吲哚；及6-碘代-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽。
實施例76-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽的制備
將2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛(10.45g)、N-乙酰基甘氨酸(11.9g,0.1 0mol)及乙酸鈉(8.4g,0.1mol)的醋酐(100ml)溶液加熱至100℃2小時。將反應混合液冷卻到室溫，攪拌下倒入冰(300ml)中。過濾分離產物，用水(3×50ml)及乙醚(3×50ml)洗滌，減壓干燥得5.26g。
將上面制備的氮雜內酯(1.34g,4.76mmol)及5-甲基色胺鹽酸鹽(1.0g,4.75mmol)的1N HCl(30ml)中的混懸液在通氮氣下加熱回流24小時。將反應混合物冷卻至室溫，過濾分得粗品產物。將固體用乙醇研磨，用乙醚洗滌。過濾分得產物(1.19g)。m/e=370,mp 244℃(分解)。分析計算值實測值C 61.92 61.67H5.94 5.94N6.88 6.94實施例86-甲基-1-[(2-溴-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚的制備實施例8按實施例7中所述的相同方法制備，有下列例外用2-溴-3,4-二甲氧基苯甲醛代替2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛作為起始原料。生成的終產物的收率為79.2％。M/I 416,414；mp272-4℃。
分析計算值實測值C 55.83 55.57H5.35 5.36N6.20 6.09
實施例96-碘代-1-[(3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽的制備實施例9按實施例7中說明的相同方法制備，有下列例外用3,4-二甲氧基苯甲醛代替2-氯-3,4-二甲氧基苯甲醛，用5-碘代-色胺代替5-甲基色胺作為起始原料。反應完成后，將反應混合液用碳酸鉀水溶液中和，用氯仿提取。將合并的氯仿層用無水碳酸鈉干燥，減壓濃縮。產物經硅膠層析純化，用2％的甲醇的氯仿液洗脫。收集含有產物的部分，濃縮。將殘留物溶于乙醚中，用HCl氣體處理。將得到的HCl鹽過濾分離，減壓干燥。得到的終產物收率為31.3％；M/I 448；mp272-3℃。
分析計算值實測值C49.5549.62H 4.57 4.51N 5.78 5.66被確信為有效的5-HT2受體拮抗劑的化合物的生物效能首先通過應用能快速及準確測定待測化合物與5-HT2受體結合的初篩實驗來證實。一旦待測化合物結合，在受體上待測化合物的體外活性即顯出。用于評估5-HT2拮抗劑的測試試驗對本領域的技術熟練人員是熟知的。5-HT2B受體結合活性化合物結合5-HT2B受體的能力用下面列出的標準方法測定。測試方法本發明的某些化合物及中間體用于調節5-HT2B受體。主要用于結合5-HT2B受體的化合物可用下列方法證明。另外，以下提供用以說明5-HT2B活性的體外模型。5-HT2B的放射配體結合研究從轉化的細胞中制備膜將表達克隆大鼠的5-HT2B受體的懸浮細胞通過在4℃下，以2200xg離心15分鐘收集[J.Kursar等，Mol.Pharmacol.42:549-557(1992)]。用于結合測試的膜通過在50mM Tris HCl,pH 7.4中旋轉該粒狀沉淀物而得(0.5×109細胞/30ml)。然后將該組織懸浮物以3,9800xg轉速，在4℃下離心10分鐘。將該步驟總共重復三次洗滌，在第一和第二次洗滌之間，在37℃下孵育10分鐘。將后最的粒狀沉淀物在67mM Tris-HCl,pH7.4(以20-40及12.5×106細胞/ml，最初細胞數，分別用于表達低及相對高水平的5-HT2B受體的細胞)中用Tissumizer(Tekmar,Cincinnati,OH)，設定65下均化15秒。5-HT結合研究用Biomek 1000(Beckman Instruments,Fullerton,CA)使結合測試自動進行，該試驗在0.8ml總體積下一式三份進行。將膜懸浮液200μl(0.04-0.27mg蛋白質)及200ml藥物的水稀釋液加入到400μl含有[3H]5-HT、優降寧、CaCl2及L-抗壞血酸的67mM Tris-HCl(pH 7.4)中。優降寧、CaCl2及L-抗壞血酸的最后濃度分別是10μM、3mM和0.1％。將試管在37℃下孵育15分鐘或在0℃下孵育2小時(兩個條件都用來證實結合平衡)，然后通過預先浸于0.5％聚乙烯亞胺及用冰冷的50mM Tris-HCl,pH7.4預冷卻的Whatman GF/B濾器，用Brandel細胞收集器(Model MB-48R；Brandel,Gaithersburg,MD)迅速過濾。然后用1ml冰冷的50mMTris-HCl,pH 7.4迅速洗滌濾器4次。在濾器上截留的[3H]5-HT的量通過液相閃爍光譜法測定(Ready Protein and Beckman LS 6000 IC,BeckmanInstruments,Fullerton,CA)。對于飽和實驗，實際的游離放射配體濃度通過對其中結合的放射活性已通過離心分離的平行的飽和實驗的上清液取樣測試而得。將用于飽和實驗的濃度范圍0.02-5nM及0.6-63nM的[3H]5-HT分別在0℃及37℃下孵育。5-HT,10μM或1-萘基哌嗪(1-NP),10μM確定為非特異性結合。對于競爭性實驗而言，要用6-12個濃度的待測藥物，跨越6個log單位，[3H]5-HT的最后濃度為2nM。蛋白質通過Bradford的方法，用牛的血清白蛋白為標準品來測定[M.M.Bradford,Anal.Biochem.,72:248-254(1976)]。統計分析用部分F檢驗確定飽和測試中Kd及Bmax值以便最佳地適合一位點或二位點的結合模型[A.De Lean等，Mol.Pharmacol.,21:5-16(1981)]。下列方程用于一位點結合模型
其中結合=[3H]5-HT特異結合的量，Bmax＝結合位點的最大數目，Kd=平衡離解常數，[L]=游離[3H]5-HT濃度，或二位點結合模型
其中結合=[3H]5-HT特異結合的量，Bmax=高親合力結合位點的最大數目，Bmax2=低親合力結合位點的最大數目，Kd1=高親合力位點的平衡離解常數，Kd2=低親合力位點的平衡離解常數，[L]=游離的[3H]5-HT濃度。競爭測試中IC50值、IP3標準曲線的結合參數以及IP3測試中EC50和Emax值通過四參數邏輯方程的非線性回歸分析確定[(Systat,Systat Inc.Evanston.IL)。A.De Lean.等，Mol.Pharmacol.,21:5-16(1981)]。用Cheng-Prusoff方程將IC50等值轉換成Ki值[Y.Cheng等，Biochem.Pharmacol.,22:3099-3108(1973)]。體外5-HT2B測試方法將雄性Wistar鼠(150-375g；Laboratory Supply,Indianapolis,IN)通過頸部離位處死，制備胃底的縱向截面供體內試驗。由一個鼠的胃底得四份制備物。按Hooker說明的方法制備取出的頸靜脈的環狀制備物[Blood Vessels.14:1(1977)及M.L.Cohen,J.Pharmacol.Exp.Ther.227:327(1983)。將組織固定于器官浴中，其中含有10ml改進的下列成分的Krebs溶液(毫摩爾濃度)NaCl,118.2,KCl4.6；CaCl2.H2O,1.6；KH2PO4,1.2；MgSO4,1.2；葡萄糖，10.0及NaHCO3,24.8。將組織浴液保持在37℃，用95％O2和5％CO2均衡。將組織置于最適靜止力(4g)之下，然后平衡約1小時，再接觸待測化合物。在具有Statham UC-3轉換器的Beckman倍增描記器上記錄等長收縮的力的克數的變化。表觀拮抗劑離解常數的測定胃底中非累積可縮濃度-血清素響應曲線以及頸靜脈中累積濃度響應曲線通過每15-20分鐘洗掉在先的濃度之后濃度的逐步增加而獲得。測定與組織接觸約2分鐘時每種興奮劑的保留的濃度以及對每種化合物濃度的最大響應。ED50值為產生最大收縮的一半的激動劑的濃度。在獲得控制響應之后，將組織與適當濃度的緩沖液或拮抗劑孵育1小時。然后在一拮抗劑存在下重復對血清素的響應。濃度響應每一組織只利用一種激動劑和一種拮抗劑濃度。一般地說，在緩沖液處理存在下連續的激動劑響應是不被改變的(平均劑量比率為1.28+/-0.21)。
根據下列方程測定每個拮抗劑濃度的表觀拮抗劑離解常數(KB)KB=[B]/(劑量比率-1)其中[B]為拮抗劑的濃度而劑量比率為在拮抗劑存在下激動劑的ED50被對照的ED50除。一般地說，濃度-響應曲線中平行移動出現在拮抗劑存在下。以KB的負對數值(例如，-logKB)表示結果。用已知的方法進行計算[B.R.Zaborowsky,J.Pharmacol.Methods,4:4165(1980)]。5-HT2B轉化細胞中IP3的形成IP3的形成及提取將懸浮液中生長的Abook-2-3-MTX細胞通過以200xg轉速的離心作用收集，再將其懸浮在無蛋白質的細胞孵育基介質中。將該細胞(2.5-3×106細胞/管125μl中)在37℃下孵育10分鐘后，加入125μl稀釋于無蛋白質介質中的所研究的化合物。所有孵育一式三份進行。當用拮抗劑抑制5-HT的效用時，在加入5-HT之前，將細胞與該拮抗劑一起在37℃下孵育10分鐘。加入激動劑后，旋轉細胞懸浮液，在37℃下再孵育10秒(該10秒包括旋轉時間)。然后加入250μl冰冷的10％高氯酸終止反應。將試管在冰上孵育10分鐘，再以1500xg轉速離心10分鐘。離心后，取400μl的上清液樣本。從已發表的方法中改進下列IP3提取的方法(E.S.Sharps等，高效液相色譜法測定孵育細胞中結合入磷酸化代謝物持的32P,Anal.Biochem.124:421-424(1982)及K.A.Wreggett等，磷酸肌醇酯及其異構體的Rapic分離法，Biochem.J.,245:655-660(1987))。將400μl樣本加入到含有100μl 10mM EDTA,pH 9.0的1.5ml microfuge管中。再加入500μl1,1,2-三氯三氟乙烷/三正辛胺(1∶1,v/v)。將該管劇烈旋轉5-7分鐘，然后以1500xg轉速離心2分鐘以分成三層。取最上部的水層100μl為樣本，按以下說明的方法測定IP3含量。
IP3結合測試用大鼠小腦膜作為結合測試中IP3-結合蛋白質的來源，該測試由已發表的方法改進(P.F.Worley等，腦中三磷酸肌醇酯受體結合的鑒定，J.Biol.Chem.,262:12132-12136(1987)及D.S.Bredt等，生物組織中1,4,5-三磷酸肌醇酯的簡便、靈敏及專一的放射性受體測試試驗，Biochem.Biophys.Res.Commun.,159:976-982(1989))。膜是通過將在30體積均化緩沖液(在50mM Tris·HCl,pH7.7中的1mMEDTA和1mM 2-巰基乙醇)中，用Tissumizer(Tekmar)以65設置，均化鼠小腦15秒而制成。將均化物在4℃下以39800xg轉速離心10分鐘。將該步驟再重復三次以上，一共四次洗滌。將最后的粒狀沉淀物懸浮于30體積的IP3結合緩沖液(在64.3mM Tris·HCl,pH 9.0中的1mMEDTA和1mM 2-巰基乙醇)中，然后于-70℃下冷凍，待用。
將結合緩沖液(350μl，含[3H]IP3)及50μl結合蛋白質均漿加入到100μl已經過以上所述提取過程的提取的IP3樣本液或已知的IP3標準液中。[3H]IP3的最后濃度為1nM。將此管在0℃下孵育15分鐘，然后用Brandel細胞收集器通過Whatman GF/B濾器過濾[濾器用水先潤濕，再用2ml冰冷的IP3洗滌緩沖液(1mM EDTA于50mM Tris·HCl,pH 9.0中)預冷)]。然后將濾器用1ml冰冷的IP3洗滌緩沖液快速洗滌二次。截留在濾器上[3H]IP3的量通過液體閃爍計數器測定。樣本中IP3的量通過與標準曲線對比確定。
當表達5-HT2B受體的細胞在加入5-HT之前與米安舍林、二甲麥角新堿、rauwolscine或l-NP預孵育時，5-HT曲線向右移而Emax值相對于5-HT本身降低。5-HT2A與5-HT2C受體結合活性化合物結合5-HT2A或5-HT2C受體的能力用以下所列的標準方法來測定。測試方法從轉化的細胞系得膜制品。使用與人-5-HT2A與5-HT2C受體穩定轉化的AV12細胞(Syrian hamster fibroblast,ATCC no.CRL 9595)來制備膜(Wainscott等，新克隆大鼠5-羥色胺2F受體的藥理特性，Mol.Pharmacol.,48:419-426(1993))。簡單地說，表達有關受體的細胞在懸浮液中生長且通過離心收集。再將細胞懸浮于最小體積的低滲緩沖液50mM Tris-HCl,pH 7.4中，再在-70℃下冷凍，備用。在測試當天，將所述懸浮液解凍，用50mM Tris-HCl稀釋至35ml/0.5×102細胞(原始細胞數)，再在4℃下以39800xg轉速離心。將得到的粒狀沉淀物通過旋轉再懸浮，再在37℃下孵育10分鐘，然后在4℃下以39800xg轉速離心。將粒狀沉淀物再進行一次懸浮及離心。為得到均化的膜懸浮液，用Tissumizer(Tekmar,Cincinnati,OH)在設置75下，將最終的粒狀沉淀物在67mM Tris-HCl,pH 7.4中再懸浮10-15秒鐘，以作為表達人或大鼠的5-HT2A受體的細胞，或在含有13mM MgCl2及0.67mMEDTA的67mM Tris-HCl,pH 7.4中再懸浮10-15秒鐘，以作為表達人的5-HT2C受體的細胞。
5-HT2A,2C[125I]DOI結合研究人的5-HT2A或5-HT2C結合研究基本上按[3H]5-HT結合5-HT2B受體中說明的方法，帶有下列例外來進行。在最后濃度中，測試緩沖液含有10mM巴吉林、9.75mM MgCl2、0.5mM EDTA、0.1％抗壞血酸鈉及50mM Tris-HCl,pH 7.4。分別與約40及30mg的5-HT2A及5-HT2C受體蛋白質在37℃下孵育30分鐘，然后通過在0.5％(w/v)聚乙烯亞胺中預浸及用4ml冰泠的洗滌緩沖液預冷的Whatman GF/C濾器過濾。然后用1ml冰冷的洗滌緩沖液快速洗滌濾器4次。用伽馬計數器測定截留在濾器上的[125I]DOI的量。測定用10mM米安舍林對5-HT2C及1mM酮舍林對5-HT2A受體的非特異性結合。[125I]DOI的最后濃度對競爭試驗來說約為0.07-0.15mM。
統計分析飽和及競爭曲線的非線性回歸分析按前面提到的方法進行(Wainscott等，新克隆大鼠5-羥色胺2F受體的藥理特性，Mol.Pharmacol.,48:419-426(1993))。在pK1值(即logK,molar)上進行單向方差分析，接著進行Tukay-kramer簡單顯著性差異檢驗(JMP；SASInstitute Inc.,Cary,Nc)。用Cheng-Prusoff(1973)方程將競爭曲線的IC50值轉化成Kd值。對[125I]DOI標記的受體而言，5-HT2A或5-HT2C受體[125I]DOI的Kd值用重排Cheng-Prusoff方程來測定Kd=IC50-[L]，其中IC50為引起50％特異[125I]DOI結合抑制的未標記DOI的濃度，[I]=[125I]DOI的游離濃度。
5-HT2A及5-HT2C轉化的細胞中IP3形成5-HT2A及5-HT2C轉化的細胞中IP3形成測試按5-HT2B轉化細胞中IP3形成相同的方法進行，其例外為對于5-HT2C用人的AHSlC-3S細胞而對于5-HT2A用人的Hu2-3S細胞。
建議用下列實驗檢測用于治療或改善毒性叮咬或叮刺癥狀的5-HT2拮抗劑的效用。實驗#1在實驗前16-24小時，將重250-400g的雄性Wistar鼠的背部用電剪刀剃光。在實驗當天，用甲氧氟烷(Metofane)通過吸入將鼠麻醉。將體積為0.05ml的三種濃度的血清素用26號的皮下針真皮下注射。另外，給每個動物真皮下注射0.05ml鹽水來表明由于注射出現的血管滲漏的量。在真皮下注射血清素之前15分鐘，腹膜內給予樣品1(6-甲基-1-[(2-氯-3,4-二甲氧基苯基)甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽)、樣品2(螺-9,9[2-(3,4-二甲氧基)-1,2,3,4-四氫萘基]-5-甲基-1,2,3,9-四氫-8H-吡啶并吲哚)、樣品3(6-甲基-1-[(2-溴-3,4-二甲氧基苯基)-甲基]-,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚)及樣品4(6-碘代-1-[(3,4-二甲氧基苯基)-甲基]-1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]吲哚鹽酸鹽)。真皮下注射血清素之前2分鐘，靜脈注射Evans藍染料(35mg/kg)。為得到最大響應，在真皮下注射血清素30分鐘之后，通過頸部離位處死動物。反映的皮膚于背上，割去每塊注射部位(約1-1.5cm直徑)。也從未受影響的背部皮膚上取一片皮膚。
將每片皮膚稱重，放入1ml 1.0N KOH中，在37℃下孵育16-20小時。在加入3.3ml丙酮及0.7ml 1.2N H3PO4之后，將混合液旋轉，然后離心(400xg,25min)。傾出上清液，其光密度用Bausch及LombSpectronic 710分光光度計在620nm處讀出。用三份已知濃度的Evans藍染料的光密度建立標準曲線，從中確定未知樣品的Evans藍染料的濃度。由于任何一塊皮膚上的總染料為血管內及血管外染料的總和，我們通過測定未受影響的一片皮膚上每毫克皮膚中染料的微克數，按單位重量計算，再減去其它每片皮膚的量來修正血管內染料的量。
用方差分析來進行統計分析，接著進行Dunnett的檢驗以比較均值。當p＜0.05時，認為有統計學意義。結果血清素在真皮下給藥時能使皮膚的染料外滲增加。當用真皮下注射血清素激發前15分鐘給藥時，樣品1-4(0.1及1.0mg/kg,i.p.)的劑量依賴性地抑制血清素誘導的皮膚血管滲透性的增加。實驗#2在實驗前16-24小時，將重250-400g雄性Wistar鼠的背部用電剪刀剃光。在實驗當天，用甲氧氟烷通過吸入將鼠麻醉。將體積為0.05ml的三個濃度的蜜蜂毒素(天然懸浮液，Sigma#V 3250)用26號皮下針真皮下注射。另外，給每個動物真皮下注射0.05ml鹽水來標明由于注射出現的血管滲漏的量。真皮下注射蜜蜂毒素之前2分鐘，靜脈注射Evans藍染料(35mg/kg)。為得到最大響應，在真皮下注射蜜蜂毒素30分鐘之后頸部離位處死動物。反映皮膚于背上，割去每塊注射部位(約1-1.5cm直徑)。也從未受影響的背部皮膚上取一片皮膚。
將每片皮膚稱重，放入1ml 1.0NKOH中，在37℃下孵育16-20小時。在加入3.3ml丙酮及0.7ml 1.2N H3PO4之后，將混合液旋轉，然后離心(400xg,25min)。傾出上清液，其光密度用Bausch及LombSpectronic 710分光光度計在620nm處讀出。用三份已知濃度的Evans藍染料的光密度建立標準曲線，從中確立未知樣品的Evans藍染料的濃度。由于任何一塊皮膚上的總染料為血管內及血管外染料的總和，我們通過測定未受影響的一片皮膚上每毫克皮膚中染料的微克數，按單位重量計算，再減去其它每片的量來修正血管內染料的量。
用方差分析進行統計分析，接著進行Dunnett的檢驗以便比較均值。當p＜0.05時，認為有統計學意義。結果蜜蜂毒素在皮下給藥時能使皮膚的染料外滲增加。實驗#3在實驗前16-24小時，將重250-400g雄性Wistar鼠的背部用電剪刀剃光。在實驗當天，用甲氧氟烷通過吸入將鼠麻醉。將體積為0.05ml的三個濃度的蜜蜂毒素(天然懸浮液，Sigma#V 3250)用26號皮下針真皮下注射。另外，給每個動物真皮下注射0.05ml鹽水來表明由于注射出現的血管滲漏的量。在真皮下注射蜜蜂毒素前15分鐘，腹膜內注射樣品1-4。真皮下注射蜜蜂毒素之前2分鐘，靜脈注射Evans藍染料(35mg/kg)。為得到最大響應，在真皮下注射蜜蜂毒素30分鐘之后頸部離位處死動物。反映皮膚于背上，割去每塊注射部位(約1-1.5cm直徑)。也從未受影響的背部皮膚上取一片皮膚。
將每片皮膚稱重，放入1ml 1.0N KOH中，在37℃下孵育16-20小時。在加入3.3ml丙酮及0.7ml 1.2N H3PO4之后，將混合液旋轉，然后離心(400xg,25分鐘)。傾出上清液，其光密度用Bausch及LombSpectromic 710分光光度計在620nm處讀出。用三份已知濃度的Evans藍染料的光密度建立標準曲線，從中確立未知樣品的Evans藍染料的濃度。由于任何一塊皮膚上的總染料為血管內及血管外染料的總和，我們通過測定未受影響的一片皮膚上每毫克皮膚中染料的微克數，按單位重量計算，再減去其它每片的量來修正血管內染料的量。結果蜜蜂毒素在皮下給藥時能使皮膚的染料外滲增加。當皮下注射血清素激發前15分鐘給藥時，樣品1-4(0.1及1.0mg/kg i.p)劑量依賴性地抑制蜜蜂毒素誘導的皮膚血管滲透性的增加。
盡管可能將用在本發明方法中的化合物不經任何制劑形式直接給藥，但通常該化合物以含有藥學上可接受的賦形劑及至少一種活性組分(本發明的化合物)的藥用組合物形式給藥。這些組合物含有約0.1-90.0％(重量)的本發明化合物。這些組合物可通過多種途徑給藥，包括口服、直腸、局部、透皮、皮下、靜脈內、肌內及鼻腔內給藥。許多用于本發明方法中的化合物作為注射、口服及局部的組合物都有效。這些組合物以制藥領域熟知的方法制備，含有至少一種活性化合物[見如REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES，(16版，1980)]。
在制備本發明所用的組合物中，通常將活性成分與一賦形劑混合、用一種賦形劑稀釋或者在一種以膠囊、香囊、紙或其它容器形式的載體中包封。當所述賦形劑被用作稀釋劑時，它可為固體、半固體或液體物質，其作用為活性成分的溶媒、載體或介質。因此，該組合物可為片劑、小丸、粉末、錠劑、香囊、扁膠囊劑、酏劑、懸浮液、乳劑、溶液、糖漿、氣溶膠(以固體或于液體介質中)、含有如達10％(重量)的活性化合物的軟膏、軟或硬明膠膠囊、栓劑、無菌注射溶液和無菌包裝粉末。
在制備制劑中，有必要在與其它成分混合前將活性化合物研磨以提供適當的粒度。如果活性化合物基本上是不溶的，通常將其研磨成粒度小于200目。如果活性化合物基本上是水溶性的，一般通過研磨調節粒度，以提供制劑中基本均勻的分布，如約40目。
一些適當的載體、賦形劑及稀釋劑的實例包括乳糖、葡萄糖、蔗糖、山梨醇、甘露糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、磷酸鈣、藻酸鹽、黃蓍膠、明膠、硅酸鈣、微晶纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、纖維素、黃蓍膠、明膠、水、糖漿及甲基纖維素。這些制劑另外可包括潤滑劑如滑石粉、硬脂酸鎂和礦物油；潤濕劑；乳化劑和懸浮劑；防腐劑如羥基苯甲酸甲酯和丙酯；甜味劑及香味劑。通過應用本領域中熟知的方法，可以配制本發明的組合物，以便在給藥后速釋、持續釋放或緩釋活性成分。
可用已知的透皮傳遞系統和賦形劑將本發明的化合物透皮傳遞。最優選將本發明的化合物與滲透增強劑混合，該滲透增強劑包括(但不限于此)丙二醇、聚乙二醇單月桂酸酯及氮雜環烷-2-酮，并摻入貼劑或類似傳遞系統中。可將包括膠凝劑、乳化劑及緩沖劑的另外的賦形劑加入到所述的透皮制劑中。
對于局部給藥來說，為形成粘性液或乳狀制劑，一般將本發明的化合物與各種賦形劑充分混合。
對口服給藥來說，一般將本發明的化合物與載體及稀釋劑充分混合，再壓制成片劑或用明膠膠囊包封。
優選將所述組合物制成含有約0.05-約100mg，更通常為約1.0-約30mg活性成分的單位劑量形式。術語“單位劑量形式”指適于以單位的劑量給予患者或其它哺乳動物的物理上獨立的單位，每個單位含有計算能產生所要求的藥理效應的預定量的活性物及適當的藥用賦形劑。
一般活性化合物在一很寬的劑量范圍內是有效的。例如，一般每目的劑量在每公斤體重約0.01-約30mg的范圍內。在成年人的治療中，單劑量或分劑量的特別優選范圍為0.1-約15mg/kg/天。但是，應理解實際給藥劑量將由主治醫師根據有關情況而定，包括治療的癥狀、所選的給藥途徑、實際給藥的化合物、個別患者的年齡、體重及反應以及患者癥狀的嚴重性，因此以上的劑量范圍并不在任何方面限制本發明的范圍。在某些情況下，低于上面所說的范圍的下限的劑量水平更為適合，而在其它一些情況下，可應用在不引起任何有毒副作用下更大的劑量，條件是將這些較大的劑量首先分成幾個較小劑量在一天內給藥。
為了更充分說明本發明的操作，提供下列制劑的實施例。這些實施例只用于說明，并不限制本發明的范圍。這些制劑可利用作為活性成分(化合物)的本發明的任何化合物。
制劑制備1制備含有下列組分的硬明膠膠囊組分 用量(mg/膠囊)活性組分 100.0淀粉 235.0硬脂酸鎂 5.0將以上組分混合，再以340mg量裝入硬明膠膠囊中。
制劑制備2用下列組分制備片劑組分 用量(mg/片)活性組分 100.0
吲微晶纖維素 125.0膠態二氧化硅 10.0硬脂酸 5.0將各組分混合，再壓制成片，每片重240mg。
制劑制備3制備含下列組分的干粉吸入劑組分 重量％活性組分 5乳糖 95將活性混合物與乳糖混合，再將混合物加入到干粉吸入裝置中。
制劑制備4每片含30mg活性組分的片劑按如下制備組分用量(mg/片)活性組分 30.0mg淀粉 45.0mg微晶纖維素 35.0mg聚乙烯吡咯烷酮4.0mg(為10％的水溶液)羧甲基淀粉鈉 4.5mg硬脂酸鎂 0.5mg滑石粉1.0mg總計 120.mg
將活性組分、淀粉及纖維素通過20目美國篩，再徹底混合。將聚乙烯吡咯烷酮溶液與上面得到的粉末混合，然后過16目美國篩。將所得顆粒在50-60℃下干燥，再通過16目美國篩。然后將預先通過30目美國篩的羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂及滑石粉加入到該顆粒中，攪拌后，在壓片機上壓制得每片重120mg的片劑。
制劑制備5每粒含40mg藥物的膠囊按如下制備組分 用量(mg/膠囊)活性組分 40.0mg淀粉109.0mg硬脂酸鎂 1.0mg總計150.0mg將活性組分、纖維素、淀粉及硬脂酸鎂混合，過20目美國篩，再以150mg量裝入硬明膠膠囊中。
制劑制備6每粒含25mg活性組分的栓劑按如下制備組分用量活性組分 25mg飽和脂肪酸甘油酯 至2000mg使活性組分過60目美國篩，再將其混懸于預先用所需最少的熱量熔化的飽和脂肪酸甘油酯中。然后將混合液倒入公稱2.0g容量的栓劑模中，冷卻。
制劑制備7每5ml劑量含有50mg藥物的混懸液按如下制備組分 用量活性組分 50.0mg合成生物聚合膠 4.0mg羧甲基纖維素鈉(11％)微晶纖維素(89％) 50.0mg蔗糖 1.75g苯甲酸鈉 10.0mg調味劑及著色劑 適量純水 至5.0ml將藥物、蔗糖及合成生物聚合膠混合，過10目美國篩，然后與預先制得的微晶纖維素及羧甲基纖維素鈉的水溶液混合。將苯甲酸鈉、調味劑及著色劑用部分水稀釋并在攪拌下加入。然后加入足量的水以達到所要求的體積。
制劑制備8每粒含有15mg藥物的膠囊按如下制備組分 用量(mg/膠囊)活性組分 15.0mg淀粉 407.0mg硬脂酸鎂 3.0mg總計 425.0mg將活性組分、纖維素、淀粉及硬脂酸鎂混合，過20目美國篩，再以425mg量裝入硬明膠膠囊。
制劑制備9靜脈注射劑可按如下制備組分 用量活性組分250.0mg等滲鹽水1000ml制劑制備10局部制劑按如下制備組分 用量活性組分1-10g乳化蠟 30g液體石蠟20g白色軟石蠟 至100g將白色軟石蠟加熱至熔化。將該液體石蠟與乳化蠟混合，攪拌至溶解。加入活性組分，繼續攪拌至分散。然后冷卻該混合物成固體。
制劑制備11每片含10mg活性組分的舌下及口腔片劑可按如下制備組分 每片用量活性組分 10.0mg甘油 210.5mg水143.0mg檸檬酸鈉 4.5mg聚乙烯醇 26.5mg聚乙烯吡咯烷酮15.5mg
總計 410.0mg將甘油、水、檸檬酸鈉、聚乙烯醇及聚乙烯吡咯烷酮在持續攪拌且保持溫度約90℃下一起混合。當聚合物進入溶液后，將溶液冷卻至約50-55℃，再慢慢混入藥物。將此均相混合液倒入由惰性材料制成的結構中，得到含藥物具有約2-4mm厚度的擴散基質。然后將該擴散基質切成具有適當大小的單片。
另一優選用于本發明方法中的制劑應用透皮傳遞裝置(“貼劑”)。可用這些透皮貼來提供以控制劑量的持續或間斷的本發明化合物的輸注。這些用于傳遞藥劑的透皮貼的制造及使用在本領域內是熟知的(見如美國專利第5023252號，1991年6月11日授權，在此結合到本發明中作為參考)。可將這些貼制成供持續、間斷或按要求傳遞給藥的形式。
一般為優選的間接技術通常包括通過將親水性藥物轉化成脂溶性藥物或前藥來配制可提供藥物潛伏作用(latentiation)的所述組合物。潛伏作用一般通過將藥物上呈現的羥基、羰基、磺酸酯基及伯胺基封閉，以使藥物脂溶性增加而更易透過血腦屏障來達到。另外，親水性藥物的傳遞可通過能瞬時打開血腦屏障的高滲溶液的動脈內輸注而增強。
使用本發明方法中所用的化合物的給藥的制劑類型可由所用的具體化合物、給藥途徑及化合物所要求的藥物動力學分布的類型以及患者的狀況來決定。
權利要求
1．一種或多種具有作為5-HT受體拮抗劑活性的化合物或組合物在制備用于治療或緩解哺乳動物體上毒性叮咬或叮刺癥狀的藥物中的用途。
2．一種或多種具有作為5-HT2受體拮抗劑活性的化合物或組合物在制備用于治療或緩解哺乳動物體上毒性叮咬或叮刺癥狀的藥物中的用途。
3．按權利要求2中要求的用途，其中使用一種具有作為5-HT2受體拮抗劑活性的化合物或組合物。
4．按權利要求3中要求的用途，其中所述5-HT2受體拮抗劑為5-HT2A、5-HTB或5-HTC受體拮抗劑。
5．權利要求3的方法，其中所述5-HT2受體拮抗劑為受體亞型5-HT2A和5-HT2B、5-HT2A和5-HT2C、5-HT2B和5-HT2C或5-HT2A、5-HT2B和5-HT2C的5-HT2受體拮抗劑。
6．按權利要求2中要求的用途，其中使用一種以上的具有作為5-HT2受體拮抗劑活性的化合物或組合物。
7．按權利要求6中要求的用途，其中每個5-HT2受體拮抗劑是不同受體亞型的受體拮抗劑。
8．按權利要求6中要求的用途，其中每個5-HT2受體拮抗劑為對多個受體亞型具有親合力的受體拮抗劑。
9．按權利要求6中要求的用途，其中所述5-HT2受體拮抗劑為對單個受體亞型具有親合力的受體拮抗劑及對多個受體亞型具有親合力的受體拮抗劑的混合物。
10．下式的5-HT2受體拮抗劑
其中R1為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R6選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、CO2R5’、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5和OR5；R7和R8獨立選自氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、NO2、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、C7-C16芳基烷基、CO2R5、(C1-C6烷基)m氨基、-SR5和OR5；n為1、2或3；n’為1、2或3；m為1或2；R5獨立為氫或C1-C4烷基；R5’為C1-C4烷基；…可任選為一個鍵；及其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物，在制備用于治療或緩解哺乳動物體上毒性叮咬或叮剌癥狀的藥物中的用途。
11．下式的5-HT2受體拮抗劑
其中Q為氫或(CHR2)R4；R1為氫或C1-C3烷基；R2為氫或C1-C3烷基；R3為氫或C1-C3烷基；R4為C5-C8環烷基、取代的C5-C8環烷基、C5-C8鏈烯基、取代的C5-C8環烯基、雙環或取代的雙環；A選自
其中，R6和R7獨立為氫、C1-C6烷基、C2-C6鏈烯基、鹵代、鹵代(C1-C6)烷基、鹵代(C2-C6)鏈烯基、COR5、C1-C10鏈烷酰基、CO2R5、(C1-C6烷基)m氨基、NO2、-SR5或OR5；m為1或2；R5獨立為氫或C1-C4烷基；R5為C1-C4烷基；R8獨立選自R6基團、取代的C3-C8環烷基、C3-C8環烷基、C3-C8環烷基-(C1-C3)烷基、C5-C8環烯基、取代的C5-C8環烯基、C5-C8環烯基-(C1-C3)烷基及C7-C16芳基烷基；或R6和R7與基團A的碳原子一起形成一個5-8元碳環，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑化物，在制備用于治療或緩解哺乳動物體上毒性叮咬或叮刺癥狀的藥物中的用途。
12．藥用組合物，它含有用于治療或緩解哺乳動物體上毒性叮咬或叮剌癥狀的5-HT2受體拮抗劑。
全文摘要
本發明提供治療或緩解毒性叮咬或叮刺癥狀的方法,它包括給予需要此治療的哺乳動物一種或多種5－HT
文檔編號A61K31/403GK1219104SQ97194729
公開日1999年6月9日 申請日期1997年3月17日 優先權日1996年3月25日
發明者M·L·克亨, K·W·約翰遜 申請人:伊萊利利公司