專利名稱：裸花紫珠提取物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及指裸花紫珠提取物及其制備方法和用途，更具體的說，裸花紫珠提取物在制備抑菌、止血、鎮痛、收斂的藥物的應用以及在制備牙膏、口膠、漱口水、口香噴霧劑、含片等口腔清潔用品中的應用。
背景技術：
裸花紫珠(CallicarpanudifIoraHook.exArn.)為馬鞭草科(Verbenaceae)紫珠屬植物，主產于我國海南，是一種海南地道藥材，我國廣東、廣西也有分布。國外主要分布于印度、越南和馬來西亞。其根、葉可入藥，有抗菌止血，消炎解毒，散瘀消腫，驅風祛濕等功效，主治化膿性炎癥、急性傳染性肝炎、呼吸道及消化道出血、創傷出血等癥，外用治燒、燙傷及外傷出血等。裸花紫珠近年來廣泛應用于醫藥、化妝品等領域中，如 CN200910142774.7，該發明提供了一種本發明提供了一種有抗菌、抗炎及止血作用的
黎藥裸花紫珠提取物及其制備方法以及含有該活性提取物的藥物組合物。用它可以制備成用來治療細菌感染引起的炎癥，急性傳染性肝炎，子宮、陰道、呼吸道及消化道等腔道出血的口服制劑。JP20060035045，該發明提供一種含有裸花紫珠提取物的抗老化劑、減肥制劑和化妝品。目前已有的裸花紫珠提取工藝主要為水提或者有機溶劑提取，且一般使用的原料為裸花紫珠采收后干燥的原料。但發明人發現裸花紫珠干品的有效成分含量不高，影響提取物及下游終端產品的有效成分含量和組成，進而影響其作用效果。因此，本發明所要解決的技術問題在于對裸花紫珠的工藝進行進一步的深入研究，從而提供一種活性成分含量更高，更有效的裸花紫珠提取物及其以及以該提取物在制備抑菌、止血、鎮痛、收斂等作用的藥物的應用，同時還提供以該提取物在口腔清潔產品中的應用。

發明內容
本發明的第一個目的是提供一種裸花紫珠提取物，該提取物以裸花紫珠鮮藥材為原料，新鮮原料經提取，濃縮得到裸花紫珠提取物。裸花紫珠提取物的原料采用新鮮狀態的裸花紫珠地上部分，優選夏季和秋季的裸花紫珠葉和/或嫩枝。所述的提取物的制備方法包括以下幾種
方法一采用裸花紫珠新鮮原料，加入水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
方法二 采用裸花紫珠新鮮原料，加入水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10% 90%的乙醇洗脫，洗脫液濾過，濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法三新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨液濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法四新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法五新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10 % 90 %的乙醇洗脫，洗脫液濾過， 濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法六，新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10 % 90 %的乙醇洗脫，脫液濾過，濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法七新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液和壓榨液合并，濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法八新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液和壓榨液合并，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10 % 90 %的乙醇洗脫，洗脫液濾過，濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。方法三至八中所述的壓榨是采用重量比為廣3 1的水或稀醇或稀酮與新鮮裸花紫珠混合。本發明實現了最大程度地從裸花紫珠中提取有效活性成分，發明人對裸花紫珠的提取方式(榨取、加熱)、采收時間(春季、夏季、秋季、冬季)和不同干燥狀態(新鮮、干品)進行了系統研究，結果如下表書J %J //1K
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注意以上指標均按鮮品計。在常規的提取工藝中，一般所用的為曬干的裸花紫珠，研究結果說明裸花紫珠的提取得率、總黃酮和木犀草素、總鞣質含量與采收季節、提取方式和藥材干燥狀態有關。1)新鮮的狀態的裸花紫珠加熱提取的提取得率、總黃酮和木犀草素、總鞣質含量均比相同時期的干品高。以秋季采收的裸花紫珠為例，新鮮裸花紫珠中的提取得率、總黃酮含量、木犀草素、總鞣質含量分別是干品的1. 20、1. 59、1. 52、1. 05倍，說明原料在干燥過程中有效成分的喪失了大部分。2)與加熱提取相比，榨取明顯提高了裸花紫珠的得率、總黃酮和木犀草素、總鞣質含量。以秋季采收的裸花紫珠為例，新鮮裸花紫珠榨取的得率、總黃酮含量、木犀草素、總鞣質含量分別是干品的1. 13,1. 23,1. 20,1. 14倍。3)不同采收季節的裸花紫珠的得率、總黃酮和木犀草素含量有一定差異，研究表明夏季和秋季時期的提取得率、總黃酮和木犀草素含量優于春季和冬季。發明的第二個目的是提供上述提取物在制備抑菌、止血、鎮痛、收斂的藥物的應用。
發明的第三個目的是提供上述提取物在制備牙膏、口膠、漱口水、口香噴霧劑、含片等口腔清潔用品中的應用，由裸花紫珠提取物與常規原料按常規工藝制成，裸花紫珠提取物為上述口腔清潔用品重量的1_20%。
本發明相對于現有技術，具有如下優點和技術效果
本發明以裸花紫珠鮮藥材為原料，其活性成分總黃酮和木犀草素、總鞣質含量較干品高，提取率大大提高，有利于節約成本，提高資源利用率。另一方面直接以裸花紫珠鮮品為原料，減少有效物質的損失，有利于提高有效物質成分群的作用，提高產品的作用效果。
具體實施例實施例一
取8月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加熱提取兩次，每次加水mcg，提取2小時，合并濾液，濾過，濃縮，干燥得90. 6g提取物，裸花紫珠提取得率為9. 06%,測得總黃酮含量為 48. ang/g，木犀草素含量為0. 65mg/g，總鞣質含量15. 61% (按新鮮藥材計)。實施例二
取8月采收的新鮮裸花紫珠葉和嫩枝各0. 5kg,加熱提取兩次，每次加水^g，提取2小時，合并濾液，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用80 % 的乙醇洗脫，脫液濾過，濃縮，干燥得74. 3g提取物，裸花紫珠提取得率為7. 43%，測得總黃酮含量為53. lmg/g，木犀草素含量為0. 50mg/g (按新鮮藥材計)。實施例三
取10月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加2kg水破碎成勻漿，壓榨，濾過，濃縮，干燥得 109. 3g提取物，裸花紫珠提取得率為10. 93%，測得總黃酮含量為59. 4mg/g,木犀草素含量為0. 75mg/g,總鞣質含量17. 95% (按新鮮藥材計)。實施例四
取10月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加2kg水破碎成勻漿，壓榨，壓榨渣加3kg水加熱提取，提取液濾過，濃縮，干燥得12. Ig提取物，裸花紫珠提取得率為1. 21%，測得總黃酮含量為10. ang/g，木犀草素含量為0. 06mg/g,總鞣質含量2. 11% (按新鮮藥材計)。實施例五
取8月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加2kg水破碎成勻漿，壓榨，壓榨液濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用70%的乙醇洗脫，脫液濾過，濃縮， 干燥得83. 4g提取物，裸花紫珠提取得率為8. 34%，測得總黃酮含量為58. 6mg/g，木犀草素含量為0.75mg/g (按新鮮藥材計)。實施例六
取8月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加2kg水破碎成勻漿，壓榨，壓榨渣加3kg水加熱提取，提取液濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用70%的乙醇洗脫，脫液濾過，濃縮，干燥得9. 5g提取物，裸花紫珠提取得率為0. 95%，測得總黃酮含量為8. 7mg/g，木犀草素含量為0. 04mg/g (按新鮮藥材計)。實施例七取10月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加2kg水破碎成勻漿，壓榨，壓榨渣加3kg水加熱提取，提取液和壓榨液合并，濾過，濃縮，干燥得122. Ig提取物，裸花紫珠提取得率為 12. 21%，測得總黃酮含量為64. 7mg/g，木犀草素含量為0. 82mg/g，總鞣質含量19. 22%(按新鮮藥材計)。實施例八
取8月采收的新鮮裸花紫珠葉1kg，加2kg水破碎成勻漿，壓榨，壓榨渣加3kg水加熱提取，提取液和壓榨液合并，濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用70%的乙醇洗脫，脫液濾過，濃縮，干燥得94. 2g提取物，裸花紫珠提取得率為 9. 42%，測得總黃酮含量為67. %ig/g，木犀草素含量為0. 79mg/g (按新鮮藥材計)。實施例九
本發明裸花紫珠提取物的有關藥效試驗如下 1、抑菌作用
通過體外抑菌實驗，以最低抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)指標評價本發明制備的裸花紫珠提取物對常見菌株的抗菌作用。菌液制備挑取斜面菌種接種于20%牛浸汁培養基中，37°C培養過夜，再用20%牛浸汁培養基將菌液稀釋至lOcfu/ml，立即接種。MIC測定采用液體試管連續稀釋法，用20%牛浸汁培養基將樣品作連續對倍稀釋。將1.0 ml加入滅菌試管中，每管加入0.05 ml標準新鮮菌液，并設菌株對照及溶媒對照組，37°C培養18 M小時，觀察細菌生長情況，以無菌生長的最高稀釋度為MIC。MBC測定采用平板劃線接種法，從被判為MIC及MIC相鄰兩管的培養基中挑取培養液接種至10%血清MH肉湯瓊脂平板上，37°C培養18 M小時，以生長菌落數彡5個的最高稀釋度為MBC。試驗結果見表一。表一裸花紫珠提取物體外抗菌試驗結果
本發明制備的裸花紫珠提取物與裸花紫珠干藥材提取物均具有對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、傷寒桿菌、肺炎球菌、綠膿桿菌、乙型鏈球菌、丙型鏈球菌和幽門螺旋桿菌均有不同程度的抑制和殺滅作用，但本發明制備的裸花紫珠提取物效果更好。、止血作用
用本發明制備的裸花紫珠提取物300、600mg/kg2個劑量組，空白對照組，裸花紫珠干藥材提取物組，云南白藥組。將50只健康昆明小白鼠隨機分5組(每組10只，雌雄各半)。 連續給藥7天，最后一天給藥45min后，用剪尾法測定小鼠出血時間(BT)，用毛細玻管法測凝血時間(CT)，評價藥物止血效果。血液放出后測定凝血酶時間(TT)、凝血酶原時間(PT)、 活化部分凝血活酶時間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)含量。實驗數據見下表二和三。表二本發明裸花紫珠提取物對小鼠止血作用的試驗結果 (均數士標準差，N =10)；..岬
*Ρ < 0·05，**Ρ < 0. 01與空白對照組比較。
表三本發明裸花紫珠提取物對小鼠止血作用的試驗結果
(均數士標準差，N =10)
*Ρ < 0.05，#Ρ < 0.01與裸花紫珠干藥材提取物組比較。以上表二和三的數據分析，表明本發明制備的裸花紫珠提取物能縮短BT、CT和 PT、APTT及降低FIB含量，具有明顯的止血作用。、鎮痛作用
醋酸所致小鼠扭體反應(扭體實驗)
將健康昆明小鼠隨機分成5組(每組10只)，即用本發明制備的裸花紫珠提取物300、 600mg/kg兩個劑量組，空白對照組，裸花紫珠干藥材提取物組，云南白藥組。每日灌胃給予相應藥物，連續7天。末次給藥后1小時，各組分別腹腔注射0. 6%醋酸溶液0. 2 ml/只， 5分鐘后觀察10分鐘內扭體次數，與對照組比較計算扭體抑制率，評價藥物的鎮痛效果。實驗結果見表四。表四本發明裸花紫珠提取物對醋酸所致小鼠扭體反應的影響 (均數士標準差，N = 10)
權利要求
1.一種裸花紫珠提取物，其特征在于其原料采用新鮮狀態的裸花紫珠地上部分，其制備方法為新鮮原料經提取，濃縮得到裸花紫珠提取物。
2.根據權利要求1所述的裸花紫珠提取物，其特征在于其原料采用新鮮狀態的裸花紫珠的葉和/或嫩枝，其制備方法為新鮮原料經提取，濃縮得到裸花紫珠提取物。
3.根據權利要求1或2所述的提取物的制備方法，其特征在于采用裸花紫珠新鮮原料，加入水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
4.根據權利要求1或2所述的提取物的制備方法，其特征在于采用裸花紫珠新鮮原料，加入水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10% 90%的乙醇洗脫，洗脫液濾過，濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
5.根據權利要求1或2所述的提取物的制備方法，其特征在于，新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨液濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
6.根據權利要求5所述的提取物的制備方法，其特征在于，所述的壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
7.根據權利要求5所述的提取物的制備方法，其特征在于所述的壓榨液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10 % 90%的乙醇洗脫，洗脫液濾過，濃縮， 干燥得裸花紫珠提取物。
8.根據權利要求6所述的提取物的制備方法，其特征在于所述的濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10 % 90%的乙醇洗脫，脫液濾過，濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
9.根據權利要求5所述的提取物的制備方法，其特征在于新鮮狀態的裸花紫珠原料， 經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液和壓榨液合并，濾過，濾液濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
10.根據權利要求5所述的提取物的制備方法，其特征在于新鮮狀態的裸花紫珠原料，經壓榨得到壓榨液及壓榨渣，壓榨渣加水或稀醇溶劑，加熱提取，提取液和壓榨液合并， 濾過，濾液通過大孔吸附樹脂柱層析，用水洗滌柱體，棄去水洗液，再用10% 90%的乙醇洗脫，洗脫液濾過，濃縮，干燥得裸花紫珠提取物。
11.根據權利要求5所述的提取物的制備方法，其特征在于，所述的壓榨是采用重量比為廣3 :1的水或稀醇與新鮮裸花紫珠混合。
12.權利要求1或2所述的提取物在制備抑菌、止血、鎮痛、收斂的藥物的應用。
13.權利要求1或2所述的提取物在制備牙膏、口膠、漱口水、口香噴霧劑、含片等口腔清潔用品中的應用，裸花紫珠提取物為上述口腔清潔用品重量的1_20%。
全文摘要
本發明提供了一種裸花紫珠提取物、制備方法及其應用，具體提供了一種裸花紫珠提取物和制備方法，以及該提取物在制備抑菌、止血、鎮痛、收斂的藥物的應用，同時還提供以該提取物為在口腔清潔產品中的應用。
文檔編號A61P29/00GK102258637SQ20111020097
公開日2011年11月30日 申請日期2011年7月19日 優先權日2011年7月19日
發明者盧捷, 周芳, 袁莉, 谷陟欣, 黃勝 申請人:九芝堂股份有限公司