專利名稱：基本無萜烯的銀杏類黃酮提取物在牙頰領域中的應用以及含有這種提取物的組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及銀杏類黃酮提取物的應用，具體而言是指基本上不含有萜烯的提取物在牙頰領域中的應用。本發明還涉及含有這種提取物的牙頰用組合物。
本發明所述的無萜烯銀杏葉類黃酮提取物含有類黃酮糖苷以及微量的萜烯或不存在萜烯。當所述提取物含有萜烯時，萜烯的含量最多為1％，優選最多0.5％。這種提取物含有28至35％的類黃酮糖苷，優選28至32％。這樣的提取物適合從修剪下的銀杏幼樹的葉子中獲得。
本發明的一個主題是如何獲得上述提取物的方法，該方法包括若干利用溶劑處理銀杏葉的提取步驟，并且該方法的特征在于所述提取步驟中的一個步驟是脫萜烯步驟并且所用溶劑為式RC(O)OR’所示化合物，其中R和R’分別獨立地代表低級烷基，這種溶劑可以單獨使用或與至少含有5個碳原子的飽和脂族烴混用。該提取步驟可以在所述方法的任何階段進行。優選的是，脫萜烯步驟所用的溶劑含有0至20％的飽和脂族烴。
除脫萜烯以外的提取步驟都已在文獻中公開，尤其是專利EP431535、EP431536、EP360556和EP324197。這些專利在此引入本中請作為參考。
在上述定義中，所述低級烷基是代表含有1至6個碳原子的直鏈或支鏈烷基基團，優選含有1至4個碳原子的烷基基團，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲丁基和叔丁基。式RC(O)OR’所示溶劑中R和R’代表甲基、乙基或丙基，優選采用乙酸乙酯。飽和的脂族烴可以選自己烷、庚烷和辛烷，優選使用庚烷。
銀杏葉的上述類黃酮提取物在人牙齦上具有抗彈性蛋白酶和抗炎活性。有關這些性質的說明將在下面的試驗部分表述。
銀杏提取物所具備的上述性質使其適合藥用。因此，本發明的一個主題是以銀杏葉的上述類黃酮提取物作為藥物，特別是作為牙頰區域內使用的藥物。
本發明的另一個主題是適合治療牙頰區域的藥物組合物，該組合物含有上述銀杏葉類黃酮提取物作為活性組分，該提取物可以任選性地與可藥用載體合用。
本發明優選的主題是一種抗彈性蛋白酶的藥物組合物，該組合物至少含有一個有效量的上述銀杏提取物作為抗彈性蛋白酶劑。本發明的另一個優選主題是至少含有一個有效量的上述銀杏提取物作為抗炎劑的抗炎藥物組合物。
本發明藥物組合物優選含有0.05至0.6％，更優選0.1至0.5％的銀杏提取物。該組合物還可以含有至少一種具有相似或互補活性的其它試劑。可取的是，本發明藥物組合物含有與神經酰胺合用的銀杏提取物。優選這種組合物含有0.1至0.5％的銀杏提取物和0.05至0.3％的神經酰胺。
本發明藥物組合物可以以任何適當的形式存在，這取決于所選的給藥方式。組合物可以是液體形式，例如溶液、懸浮液或乳液。還可以是凝膠、噴劑、牙膏或咀嚼膠的形式。優選組合物是凝膠或咀嚼膠形式。除單用或結合形式的銀杏提取物外，組合物還可以含有適當的制備此類組合物的常規載體、成分或輔劑。
本發明的一個主題是上述銀杏類黃酮提取物在制備用于牙頰區域治療的藥物組合物中的應用。
本發明的一個優選主題是上述銀杏類黃酮提取物在制備抑制彈性蛋白酶的藥物組合物中的應用。本發明的另一個優選主題是上述銀杏類黃酮提取物在制備抑制牙頰區域內炎癥的藥物組合物中的應用。可以單獨采用該類黃酮提取物，也可以將它與其它具有相似或互補活性的試劑聯合使用，這取決于所要達到的效果，合用時也可以任選性地使用適當的載體。優選上述提取物與神經酰胺合用。
神經酰胺是存在于所有細胞結構中的鞘脂。它們也大量存在于植物界，尤其是小麥、稻米、大豆、小米和菠菜中。也可以合成神經酰胺。鑒于其結構，神經酰胺適合用作載體，以顯著提高其所運載的活性劑的生物利用度。本申請所用的術語神經酰胺具有所屬領域專業人員公知的標準含義。因此，術語神經酰胺包括所有合成的或天然(植物、動物或人)的神經酰胺，它們可以被選擇性取代，例如被糖取代，如單-或多聚葡糖基神經酰胺。
鑒于類黃酮糖苷的高含量，有關專業人士提出，上述提取物具有抗氧劑活性和抗游離基活性。此外的一方面是，該提取物具有抗炎、抗彈性蛋白酶性質以及血管調節和膠原活化性，另一方面，其組成中幾乎不存在萜烯，所以這種提取物適合在化妝品或皮膚病領域使用。
本發明的一個主題是上述銀杏葉類黃酮提取物在制備血管調節和/或膠原活化藥物中的應用。本發明還涉及含有上述類黃酮提取物作為血管調節劑和/或膠原活化劑的化妝品組合物。本發明的主題之一是一種美容處理方法，其特征在于將上述類黃酮提取物用作血管調節劑和/或膠原活化劑。
本發明的另一個主題是特別適用于牙頰區域的化妝品組合物，該組合物含有上述銀杏葉類黃酮提取物。該提取物可以單獨使用，或與至少一種具有相似或互補活性的其它試劑以及任選性的適當載體合用。優選該銀杏提取物與神經酰胺合用。本發明所述的化妝品組合物可以含有0.05至0.6％的上述銀杏提取物以及優選0.05至0.3％的神經酰胺。這種組合物可以以適當的形式應用于此類用途，例如膏霜、乳液、奶液、凝膠、油、上妝品、唇膏或洗液。除含有單獨或結合形式的銀杏提取物以及適當載體外，該化妝品組合物可以含有制備此類組合物的常規成分或輔劑。
本發明的另一個主題是用于美容性處理牙頰區域感染，尤其是齒齦炎的上述銀杏類黃酮提取物。
下列實施例用于說明本發明，但決不限定本發明的保護范圍。試驗部分獲得類黃酮提取物的方法用6至12份(優選8份)含有60％丙酮的水在50至60℃下提取銀杏葉，將該溶液濃縮，使丙酮的百分含量減至3％以下。將該溶液冷卻，通過傾析除去類脂。水溶液用2至5份含有0至20％庚烷的乙酸乙酯提取。所得溶液用最少量的含有硫酸銨的丙酮/丁醇混合液(丙酮百分量為0至15％)提取。濃縮有機相；加入乙醇后，再次濃縮該溶液。用乙醇重新稀釋后，將溶液冷卻下來，過濾除去不溶的沉淀物。濃縮所得溶液，干燥、精細研磨，從而回收得到均勻粉末形式的類黃酮提取物。對基本不含萜烯的銀杏類黃酮提取物的抗彈性蛋白酶和抗炎活性的研究1-體外抗彈性蛋白酶活性的試驗本試驗的目的是研究所述提取物的抗彈性蛋白酶活性，該提取物可以是單用或與神經酰胺結合使用。這種活性是在人牙齦切片上進行評估。
所用神經酰胺是按照專利FR 2676936(該專利在此引入作為參考)公開的方法從植物中獲得的神經酰胺，該方法包括將小麥用極性溶劑提取且隨后自有機溶劑中重結晶。它們基本上由葡糖基神經酰胺和神經酰胺組成。
為達到目的，在抗彈性蛋白酶產物存在或不存在的條件下，將彈性纖維網絡用人白細胞彈性蛋白酶(HLE)處理。酶促作用后殘留的彈性纖維用(+)兒茶素染色。
在牙科摘出術中，從正常頰粘膜的活組織檢查中獲取樣品，本試驗在5個這種樣品的8μm冷凍切片上進行。試驗方案在第一階段中，測定破壞彈性纖維所需的人白細胞彈性蛋白酶的濃度在室溫和濕潤的氣氛下，將白細胞彈性蛋白酶涂敷在皮膚切片上并保持2小時；在丙酮中固定，并在70℃下和乙醇中脫水，此后將殘留的彈性纖維用(+)兒茶素染色。測定10μm/ml人白細胞彈性蛋白酶存在條件下被破壞的全部彈性纖維。
為了證實酶上固定的產品，在常溫下，將相似量的產品以乳液形式與10μm/ml的人白細胞彈性蛋白酶同時涂敷在切片上并保持2小時。將產品的抗彈性蛋白酶活性與PMSF的進行比較，PMSF是一種粉末狀的彈性蛋白酶抑制劑。
下表1中列出了通過圖象分析進行的形態學定量測定的結果。表1在銀杏提取物單獨或與神經酰胺結合存在的條件下，用人白細胞彈性蛋白酶處理后的殘余彈性纖維百分量
2-抗炎活性的試驗本試驗中的待測組合物是以凝膠形式存在，它含有0.5％所述銀杏提取物和0.1％在抗彈性蛋白酶活性試驗中所提及的植物神經酰胺。
本試驗選用了20位患有輕度和中度酒石性(tartaric)齒齦炎的患者。這些患者每天在其齒齦粘膜上涂敷兩次所述凝膠并持續一個月。在第0天和第28天按照評分規則對患者的齒齦狀態進行臨床評估。對紅斑和齒齦炎的評定是主要的評估標準。必須以紅斑的減少以及齒齦炎的減輕來證實上述處理具有抗炎作用。
臨床上，牙齦的紅斑外觀(紅色)和嚴重的齒齦炎都可以導致紅斑。牙齦恢復正常狀態、紅斑減少、齒齦炎級別和癥狀程度的降低都是抗炎活性的證據。
第二個評估標準是對自發性疼痛和咀嚼性疼痛以及流血(強度和局部形狀)的判斷。標準的操作在表示結果時，指示抗炎活性程度的三個主要標準，即“齒齦炎”、“牙齦顏色和“局部癥狀形狀”都被指定為系數2。
在表示結果時，“自發性疼痛”、“咀嚼性疼痛”和“乳突出血”都被指定為系數1。-對于齒齦炎的評估，評分如下(0)若為0級牙齦正常，無炎癥，顏色無變化，沒有出血；(2)若為1級輕度齒齦炎，輕度炎癥，齒齦表面輕微改變，無出血；(4)若為2級中度發展的齒齦炎，中度炎癥，紅斑，水腫，探觸或按壓時出血；(6)若為3級大范圍的齒齦炎，嚴重的炎癥，明顯的紅斑，水腫，有自發性出血的趨勢，潰瘍。-對于牙齦顏色的評估，評分如下(0)正常(2)輕微紅斑(4)中度紅斑(6)嚴重紅斑-對牙齦顏色的形狀評估定義6個部分RiUp、FrUp、LeUp、RiLo、FrLo和LeLo(Fr、Up、Lo、Ri和Le分別代表前、上、下、右和左)(0)無感染部分(2)有一個部分被感染(4)有兩個部分被感染(6)有三個部分被感染(8)有三個以上的部分被感染-對于乳突出血的評估(Engelberger et Coll.,1993)，評分如下(0)若為0級刺探后10至30秒無出血現象(2)若為1級輕微出血(細小血滴)(4)若為2級中度出血(6)若為3級嚴重出血-乳突出血的形狀評估(0)無感染部分(1)有一個部分被感染(2)有兩個部分被感染(3)有三個部分被感染(4)有三個以上的部分被感染-對“自發性疼痛和咀嚼性疼痛”改變的評估標準是在第0天和第28天時用目測標尺進行評定(0)如果無疼痛或輕微疼痛(目測標尺上的量度在0至2.5厘米)(1)如果中度疼痛(目測標尺上的量度為2.5至5厘米)(2)如果明顯疼痛(目測標尺上的量度為5至7.5厘米)(3)如果嚴重疼痛(目測標尺上的量度為7.5至10厘米)-隨后，通過將各個評分值相加計算出總分值·恢復正常狀態時的相應分值是0·程度最嚴重時相應分值是33分。結果如表2所列。表2<
本試驗對20名酒石性齒齦炎患者的研究證實了，上述與植物神經酰胺合用的銀杏提取物具有抗炎活性。
抗炎活性表現為20個病例中有11例出現齒齦炎和牙齦紅斑消失的顯著臨床形式，而另外中的8例有所改善。
在所有病例中，可以觀察到乳突出血評分值的明顯改善以及牙齦疼痛(自發性和咀嚼性)的完全消失。
權利要求
1．基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物在制備用于治療牙頰區域感染的藥物組合物中的用途。
2．根據權利要求1所述的用途，它是在制備用于抑制彈性蛋白酶的組合物中的用途。
3．根據權利要求1所述的用途，它是在制備用于抑制炎癥的組合物中用途。
4．基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物在制備用于血管調節和/膠原活化藥物中的用途。
5．含有基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物的化妝品組合物作為血管調節劑和/膠原活化劑的用途。
6．根據權利要求1至5任一項所述的用途，其特征在于所述提取物含有28至35％的類黃酮糖苷，優選28至32％。
7．根據權利要求1至6任一項所述的用途，其特征在于所述提取物最高含有1％，優選最高0.5％的萜烯。
8．根據權利要求1至7任一項所述的用途，其特征在于所述提取物與神經酰胺合用。
9．特別適用于治療牙頰區域的藥物組合物，該組合物含有基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物作為活性組分以及賦形劑。
10．根據權利要求9所述的組合物，其特征在于它具有抗彈性蛋白酶活性。
11．根據權利要求9所述的組合物，其特征在于它具有抗炎活性。
12．特別適用于治療牙頰區域的化妝品組合物，該組合物含有基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物。
13．根據權利要求9至12任一項所述的組合物，其特征在于所述提取物含有28至35％的類黃酮糖苷，優選28至32％。
14．根據權利要求9至13任一項所述的組合物，其特征在于所述提取物最高含有1％，優選最高0.5％的萜烯。
15．根據權利要求9至14任一項所述的組合物，其特征在于所述提取物含有0.05％至0.6％的所述提取物。
16．根據權利要求9至15任一項所述的組合物，其特征在于所述提取物與神經酰胺合用。
17．根據權利要求16所述的組合物，其特征在于其含有0.05至0.3％的神經酰胺。
18．根據權利要求17所述的組合物，該組合物是凝膠或咀嚼膠的形式。
19．基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物在美容性處理牙頰區域感染，特別是齒齦炎中的應用。
20．基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物作為藥物，尤其是作為牙頰區域用藥物。
21．基本無萜烯的銀杏葉類黃酮提取物的制備方法，該方法包括若干利用溶劑處理銀杏葉的提取步驟，該方法的特征在于包括一個脫萜烯步驟，并且所用溶劑為式RC(O)OR’所示化合物，其中R和R’分別代表低級烷基，這種溶劑可以單獨使用或與至少含有5個碳原子的飽和脂族烴混用。
全文摘要
本發明涉及銀杏類黃酮提取物的應用,具體而言是指基本上不含有萜烯的提取物在牙頰領域中的應用。本發明還涉及含有這種提取物的牙頰用組合物。
文檔編號A61K31/74GK1233962SQ9719910
公開日1999年11月3日 申請日期1997年10月24日 優先權日1996年10月25日
發明者J·奧雷萊 申請人:科學研究與運用咨詢公司