專利名稱：一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗jxa1-r株耐熱凍干保護劑及制備方法
技術領域：
本發明屬于獸用生物制品技術領域，涉及獸用病毒活疫苗制造的冷凍干燥技術，具體涉及一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑及制備方法。
背景技術：
在我國的獸用疫苗中，凍干活疫苗占相當大的比例，根據生產工藝和保存條件不同，可將其分為常規保護劑活疫苗和耐熱保護劑活疫苗，目前國內大多數產品為常規保護劑活疫苗。常規保護劑主要成分為脫脂牛奶、蔗糖、明膠等，組方簡單、配制簡便、易溶性良好，但熱穩定性和保護功能差，產品的保存條件較為苛刻，大多需要在_15°C以下保存。在疫苗生產、運輸以及使用過程中，如果冷鏈系統控制不當，疫苗保存環境溫度升高，常常導致疫苗效力下降或失效，造成免疫失敗。 耐熱凍干保護劑比常規的凍干保護劑更周到地考慮了具有生物活性的制品在較高溫度和較長保存時間的情況下，凍干物質可能產生的物理和化學變化對活疫苗存活的影響，通過填充、防凍、抗氧化、酸堿調整、羥基中和等一系列機制，確保病毒在2 8 °C條件下，保存期可達24個月，效價無明顯下降，即使是較高的常溫甚至37°C也可以保存十天以上，因而其保護性能要比傳統保護劑更為優良，從而使活苗的儲存、運輸和使用更方便、經濟。發達國家早在20世紀80年代就開始進行耐熱保護劑的研究，目前已經基本采用耐熱保護劑生產活疫苗，但由于保護劑的研究和應用均屬于專利資料，各國都處于保密狀態。我國在耐熱凍干保護劑方面的研究雖然起步較晚，但近年來研究非常活躍。我國不少具有國際戰略眼光的獸用生物制品企業均紛紛投入大量人力與資金，率先開展耐熱保護劑活疫苗的研究，研究領域主要包括ND、IBD, MD, IBV、雞痘和豬瘟等活疫苗產品，有的企業已經取得了一定的成果，并將耐熱保護劑活疫苗產業化。但是，產品配套還是很不齊全；另外，國內一些企業雖然獲得了產品批號，由于生產技術問題，至今尚無耐熱保護劑活疫苗產品投放市場。因此，目前我國耐熱保護劑活疫苗與國外同類產品相比仍處于劣勢地位。豬繁殖與呼吸綜合征是危害我國養豬業的一種主要傳染病，尤其是近幾年高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒在我國較大范圍的流行，更使我國的養豬業遭受巨大的經濟損失。用5%蔗糖脫脂乳凍干的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗已大量使用，雖預防效果良好，但疫苗的存放條件為-15°C以下，這樣給疫苗的存儲、動輸、使用帶來極大不便。目前廣泛使用的豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑由明膠、胰蛋白胨、酶解酪蛋白、山梨醇、PVP、谷氨酸鈉、精氨酸鹽，磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀組成，可使產品在2 8°C保存24個月，病毒含量不發生改變但該耐熱凍干保護劑存在配方過于復雜、生產成本高、保護性能不十分理想等缺陷。

發明內容
為克服現有技術的缺陷，本發明的目的在于提供一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑，具有良好保護性能，使凍干后的豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗在2 8°C條件下保存有效期可達24個月以上，有效解決目前該疫苗需在低溫冷凍運輸、儲存不便以及成本高等一系列問題。本發明的另一目的在于提供一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，配制方法簡單、成本低、能夠大規模生產。
為實現上述目的本發明所采用的技術方案如下
一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑，其是由以重量百分比計的以下組分組成明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。優選的，本發明所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑其是由以重量百分比計的以下組分組成明膠1%、大豆蛋白胨5%、甘氨酸1%、海藻糖5%、聚乙烯吡咯酮2%、甘露醇0. 8%、余量為注射用水。海藻糖是一種穩定的非還原性二糖，其羥基能代替水分子同蛋白質分子表面部分結合，對蛋白質形成保護，同時，海藻糖的分子較小，易于以分子的形式填充到蛋白質分子的空隙中，有效限制蛋白質分子內部的結構發生變化，從而能避免變性失活；海藻糖具有較高的玻璃化轉變溫度，易形成玻璃態，將蛋白質分子支撐和包裹起來使之不易變性，水化能力雖與蔗糖基本相同，但保護作用卻遠高于蔗糖。聚乙烯吡咯酮(PVP)是一種多聚體，對生物或生物大分子具有非特異性保護作用，同時它是一種非滲透性保護劑，通常和糖一起，主要通過與糖類間的氫鍵作用改變糖類的玻璃化溫度發揮作用；將海藻糖和聚乙烯吡咯酮(PVP)聯合使用，可起到良好的低溫、干燥保護劑作用。研究表明，在凍干某些生物制品時，添加大豆蛋白胨等植物源性蛋白質比添加動物源性蛋白質，凍干前后病毒下降滴度減少，且植物源性蛋白質比動物源性蛋白質更安全，避免了血清蛋白質潛在的血源性病原體污染疫苗。試驗表明，在眾多的氨基酸中，甘氨酸是最好的填充劑。甘露醇是山梨糖醇的異構化體，其沒有吸濕性，干燥快且穩定性好，凍干后制品不易回潮，復水迅速。據報道，低濃度甘氨酸可通過抑制10或100mmol/L磷酸緩沖鹽結晶所致PH值的改變而阻止蛋白質藥物變性。本發明高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的使用方法將本發明耐熱凍干保護劑與高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒JXAl-R株抗原液以I I的體積比例充分混勻，定量分裝后立即進行冷凍干燥。一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，其是按以下步驟進行
1)高溫滅菌明膠、大豆蛋白胨、海藻糖、聚乙烯吡咯酮甘露醇溶于注射用水中，110 116 °C高溫滅菌；
2)微孔濾膜過濾除菌將甘氨酸、甘露醇溶于注射用水中，用孔徑為0.2-0. 3 的微孔濾膜過濾除菌；
3)混合分別完成除菌后把兩種成分按照I : I的體積比例混合，攪拌均勻，干燥即得。上述制備方法中，其中各組分的質量分數為明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。上述制備方法中，所述步驟I)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2，滅菌的時間為10-20分鐘。上述制備方法中，所述步驟2)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2。本發明所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑結合高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒JXAl-R株抗原本身的特性在現有技術的基礎上作出的改進，其有益效果在于
(I)本發明的耐熱凍干保護劑減少了制品在冷凍干燥過程中各種理化因素可能對病毒活性的損傷，使凍干前后病毒損失率較低，不超過0. 2個滴度。(2)本發明的耐熱凍干保護劑活疫苗耐老化程度高，在37°C條件下保存IOd病毒損失率不超過0. 3個滴度，在2 8°C保存24個月，仍能達到農業部審批通過的《高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗(JXAl-R株)質量標準》規定的各項指標，有效解決了目前豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗需低溫冷凍運輸、儲存不便等問題。(3)本發明的耐熱凍干保護劑在保證耐熱性能好、能有效保護活疫苗的前提下，還具有配方成分及配制方法簡單、成本低、可實現大量生產等優點，有效解決了現有耐熱凍干保護劑所存在的成分復雜和成本高等缺陷。下面結合具體的實施方式對本發明作進一步詳細說明。
具體實施例方式一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，其是按以下步驟進行
1)高溫滅菌明膠、大豆蛋白胨、海藻糖、聚乙烯吡咯酮甘露醇溶于注射用水中，110 116 °C高溫滅菌；
2)微孔濾膜過濾除菌將甘氨酸、甘露醇溶于注射用水中，用孔徑為0.2-0. 3 的微孔濾膜過濾除菌；
3)混合分別完成除菌后把兩種成分按照I: I的體積比例混合，攪拌均勻，干燥即得。按照上述制備方法制備本發明的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑，具體實施例及各組分的用量見表I :
表I各實施例耐熱凍干保護劑配制參數
權利要求
1.一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑，其特征在于其是由以重量百分比計的以下組分組成明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。
2.根據權利要求I所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑，其特征在于其是由以重量百分比計的以下組分組成明膠1%、大豆蛋白胨5%、甘氨酸1%、海藻糖5%、聚乙烯吡咯酮2%、甘露醇0. 8%、余量為注射用水。
3.一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，其特征在于其是按以下步驟進行 1)高溫滅菌明膠、大豆蛋白胨、海藻糖、聚乙烯吡咯酮甘露醇溶于注射用水中，110 116 °C高溫滅菌； 2)微孔濾膜過濾除菌將甘氨酸、甘露醇溶于注射用水中，用孔徑為0.2-0. 3 的微孔濾膜過濾除菌； 3)混合分別完成除菌后把兩種成分按照I: I的體積比例混合，攪拌均勻，干燥即得。
4.根據權利要求3所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，其特征在于其中各組分的質量分數為明膠0. 8 I. 2%、大豆蛋白胨4 6%、甘氨酸0. 5 I. 5%、海藻糖4 6%、聚乙烯吡咯酮I 2%、甘露醇0. 5 1%，余量為注射用水。
5.根據權利要求4所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，其特征在于步驟I)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2，滅菌的時間為10-20分鐘。
6.根據權利要求4所述的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXAl-R株耐熱凍干保護劑的制備方法，其特征在于步驟2)中注射用水的用量為注射用水總重量的1/2。
全文摘要
本發明具體涉及一種高致病性豬繁殖與呼吸綜合征株活疫苗JXA1-R耐熱凍干保護劑及制備方法。本發明的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗耐熱凍干保護劑是由以重量百分比計的以下組分組成明膠0.8～1.2%、大豆蛋白胨4～6%、甘氨酸0.5～1.5%、海藻糖4～6%、聚乙烯吡咯酮1～2%、甘露醇0.5～1%，余量為注射用水；通過高溫滅菌、微孔濾膜過濾除菌、混合步驟制得。本發明的高致病性豬繁殖與呼吸綜合征活疫苗JXA1-R株耐熱凍干保護劑減少了制品在冷凍干燥中各種理化因素對病毒活性的損傷，使凍干前后病毒損失率較低，不超過0.2個滴度；有效解決目前該疫苗需在低溫冷凍運輸、儲存不便以及成本高等問題。
文檔編號A61K39/12GK102727903SQ201210229549
公開日2012年10月17日 申請日期2012年7月4日 優先權日2012年7月4日
發明者周智, 曲萍, 朱文冠, 林綺萍, 田克恭, 練炳洲, 翟新驗, 遇秀玲, 鄧小熊, 陳瑞愛 申請人:中國動物疫病預防控制中心, 廣東大華農動物保健品股份有限公司